鼠冠狀病毒核衣殼蛋白的抗體制備與抗原決定簇分析

郭佳慧，文榮，王玉燕，張浩旸，劉紅，徐婭佳，葉榮

復旦大學基礎醫學院病原生物學系，上海 200032

·論著·

鼠冠狀病毒核衣殼蛋白的抗體制備與抗原決定簇分析

郭佳慧，文榮，王玉燕，張浩旸，劉紅，徐婭佳，葉榮

復旦大學基礎醫學院病原生物學系，上海 200032

核衣殼(nucleocapsid，N)蛋白有穩定病毒基因組、調控病毒復制及細胞狀態的特殊作用。鼠肝炎病毒(murine hepatitis virus，MHV)為乙型冠狀病毒屬的原型病毒，是研究冠狀病毒N蛋白功能的經典模型。本研究用去污劑處理鼠冠狀病毒粒子暴露N蛋白，另用原核表達純化的重組N蛋白分別免疫小鼠，制備多克隆及單克隆抗體。酶聯免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)和蛋白免疫印跡分析結果顯示兩類抗體均具有高靈敏度和特異度，與甲型冠狀病毒豬傳染性胃腸炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus，TGEV)的N蛋白無交叉反應。原核表達缺失突變的N蛋白分析結果顯示，多克隆抗體與單克隆抗體2E6識別的鼠冠狀病毒N蛋白抗原決定簇完全一致，位于N端結構域(N-terminal domain，NTD)C端與SR之間的58個氨基酸殘基內。此外，基于單克隆抗體2E6的ELISA及免疫熒光法能檢測到感染細胞中和培養上清液中的N蛋白組分，且其含量與病毒復制的滴度一致。這些結果表明，鼠冠狀病毒復制過程中粒子與細胞中的N蛋白可能維持相似的結構，使NTD與SR之間的部分氨基酸殘基一直暴露在表面，從而形成了優勢抗原決定簇。

鼠冠狀病毒；核衣殼蛋白；抗體；抗原決定簇

冠狀病毒(coronavirus，CoV)是一類有包膜的正鏈RNA病毒，屬于套式病毒目(Nidovirales)，其基因組是目前已知最大的mRNA分子，約30 kb[1]。……