藍(lán)果忍冬果實花青素含量及合成相關(guān)基因表達(dá)分析

摘要：【目的】分析藍(lán)果忍冬果實花青素含量及其合成相關(guān)調(diào)控基因表達(dá)情況，為藍(lán)果忍冬種質(zhì)的挖掘、利用及花青素的合成調(diào)控研究提供參考依據(jù)。【方法】利用高效液相色譜檢測技術(shù)定性定量分析不同藍(lán)果忍冬品種（蓓蕾、HSY-4和日本-5）果實花青素成分及含量，并以實時熒光定量PCR（qRT-PCR）對3個品種不同成熟期花青素合成相關(guān)基因及轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)量進(jìn)行分析。【結(jié)果】在525 nm波長下，從成熟藍(lán)果忍冬果實中檢測出8種花青素，含量最高的花青素是矢車菊3-葡萄糖，占總花青素含量的76.61%～86.67%，其中蓓蕾的花青素含量最高，達(dá)500.14 mg/100 gFW，日本-5最低，為162.79 mg/100 gFW。半轉(zhuǎn)色期花青素合成相關(guān)基因表達(dá)量最高，與花青素積累情況相符；PAL、ANS和bHLH基因的表達(dá)量隨花青素合成積累量增加呈先升高后降低的變化趨勢。【結(jié)論】藍(lán)果忍冬果實含8種花青素，以矢車菊為苷元的花青素種類最多，其合成相關(guān)基因中PAL、ANS和bHLH基因在花青素合成過程中起調(diào)控作用。蓓蕾、HSY-4和日本-5的花青素合成相關(guān)基因表達(dá)情況相似，但品種間存在差異。

關(guān)鍵詞： 藍(lán)果忍冬；花青素；含量；基因表達(dá)

中圖分類號： S663.9 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：2095-1191（2017）07-1139-09

0 引言

【研究意義】藍(lán)果忍冬（Lonicera caerulea L.）又名藍(lán)靛果，屬忍冬科忍冬屬藍(lán)果亞組灌木類漿果，其變種在我國分布廣泛（中國植物志編輯委員會，1988），其果實富含花青素、氨基酸、兒茶酸和槲皮苷等生理活性物質(zhì)（李淑芹等，1994；趙佳，2010），具有很高的營養(yǎng)保健價值。藍(lán)果忍冬是目前發(fā)現(xiàn)花青素含量最高的水果之一（Chaovanalikit et al.，2004），高于藍(lán)莓、樹莓、黑莓和紅加侖等漿果（Celli et al.，2014），且花青素種類豐富，其中含量最高的是矢車菊3-葡萄糖苷，占總含量的84%～92%（Kusznierewicz et al.，2012），但有關(guān)藍(lán)果忍冬果實花青素的生物合成及其基因調(diào)控機(jī)理尚不清楚。因此，對藍(lán)果忍冬花青素合成及其基因調(diào)控表達(dá)開展研究，有助于了解藍(lán)果忍冬花青素合成過程及影響因素，為進(jìn)一步挖掘利用其種質(zhì)資源提供理論依據(jù)。【前人研究進(jìn)展】花青素是植物體內(nèi)一類重要的次生代謝物質(zhì)，屬于類黃酮化合物，不僅是天然著色劑，還是最有效的天然抗氧化劑（Wang and Stoner，2008；劉奕琳，2012；唐容等，2017），在抑制脂質(zhì)過氧化、清除自由基等方面發(fā)揮重要作用，已廣泛應(yīng)用于化妝品和食品添加劑研發(fā)領(lǐng)域（王海竹等，2016；烏日罕等，2016）。花青素是類黃酮代謝途徑中一個分支產(chǎn)物，由苯丙氨酸經(jīng)3個階段的反應(yīng)合成，合成路徑涉及三類調(diào)控基因及15個結(jié)構(gòu)基因（胡可等，2009）。目前，相關(guān)調(diào)控基因及轉(zhuǎn)錄因子已有報道。Laurent等（2006）研究發(fā)現(xiàn)，葡萄R2R3-MYB型轉(zhuǎn)錄因子VvMYB5a主要在果皮、果肉和種子的發(fā)育早期表達(dá)，而VvMYBAl基因在漿果皮中特異表達(dá)，可誘導(dǎo)葡萄皮花青素的生物合成，VvMYBAl基因的激活作用需要bHLH蛋白協(xié)助；賈趙東等（2014）從花生、馬鞭草、紫蘇等植物中克隆出結(jié)構(gòu)基因UFGT，并證實蘋果、草莓、荔枝和梨中花青苷的積累與UFGT基因表達(dá)呈明顯的正相關(guān)，在不同品種中UFGT基因的表達(dá)量也不同。【本研究切入點】目前關(guān)于藍(lán)果忍冬果實花青素生物合成及其相關(guān)基因表達(dá)調(diào)控的研究鮮見報道。【擬解決的關(guān)鍵問題】對藍(lán)果忍冬果實花青素的種類、含量、合成相關(guān)基因及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的表達(dá)進(jìn)行研究，為藍(lán)果忍冬種質(zhì)挖掘、利用及花青素合成調(diào)控研究打下基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

供試藍(lán)果忍冬品種（系）為蓓蕾[（subsp. altaica×subsp. Kamtschatica）×subsp. Kamtschatica]、HSY-4（L. caerulea L. subsp. venulosa）和日本-5（L. caerulea L. subsp. emphyllocalyx），種植于東北農(nóng)業(yè)大學(xué)藍(lán)果忍冬種質(zhì)資源圃，于2014年4月22日進(jìn)入盛花期，選取各品種（系）生長健壯的植株進(jìn)行標(biāo)記，于2014年5月25日果實綠熟期（花后33 d）及6月4日完熟期（花后43 d）分別采收果實作為花青素種類和含量定性定量分析材料。采收蓓蕾不同發(fā)育期的果實（幼果期5月16日、綠熟期5月25日、半轉(zhuǎn)色期5月28日、完熟期6月4日和軟化期6月15日）作為果實花青素合成分析材料（圖1），用于實時熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測分析。5月25日采收蓓蕾和HSY-4綠熟期果實、6月1日采收日本-5綠熟期果實，6月4日采收蓓蕾和HSY-4完熟期果實，6月13日采收日本-5完熟期果實（圖2），用于品種間花青素合成相關(guān)基因的表達(dá)分析。上述材料被采摘后立即用液氮速凍處理并于-80 ℃冰箱保存。

1. 2 花青素種類和含量分析

參考Wang等（2014）的方法，利用安捷倫液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)（Agilent 1100 LC/MSD Trap VL，美國）檢測花青素種類及含量，流動相A為含1%甲酸的雙蒸水，流動相B為含15%甲醇的乙腈。洗脫條件：0 min 5% B，30 min 30% B，35 min 5% B，每個樣品設(shè)3個重復(fù)；紫外檢測器（Agilent G1314B）檢測波長為525 nm；以矢車菊3-葡萄糖和矢車菊3-蕓香糖苷為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，含量由峰面積計算方法得出，單位為mg/100 gFW。

1. 3 花青素合成相關(guān)基因表達(dá)分析

1. 3. 1 引物設(shè)計及合成 根據(jù)花青素合成的代謝通路，選取合成相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因PAL、CHS、F3H、DFR、ANS及轉(zhuǎn)錄因子MYB、bHLH、WD40，并以β-Actin為內(nèi)參基因。利用Primer 6.0設(shè)計花青素合成相關(guān)基因和β-Actin的引物，如表1所示。

1. 3. 2 RNA提取及cDNA合成 利用RN38-EASYspin Plus植物RNA快速提取試劑盒[艾德萊（北京）有限公司]提取幼果期、綠熟期、半轉(zhuǎn)色期、完熟期和軟化期果實的RNA，并用TransScript One-Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix試劑盒（北京全式金生物技術(shù)有限公司）合成cDNA。反應(yīng)體系如表2所示。為提高合成效率，將RNA模板、引物與RNase-free Water混勻后，65 ℃孵育5 min，冰浴2 min，然后再加入其他組分，42 ℃孵育30 min，85 ℃加熱5 min，使TransScript RT和gDNA Remover失活。

1. 3. 3 qRT-PCR檢測 采用TransStart Top Green qPCR SuperMix試劑盒（北京全式金生物技術(shù)有限公司），熒光染料為SYBR Green I。反應(yīng)體系（20.0 μL）：模板2.0 μL，正向引物（10 μmol/L）1.0 μL，反向引物（10 μmol/L）1.0 μL，2×TransStart Top Green qPCR SuperMix 10.0 μL，ddH2O 6.0 μL。擴(kuò)增程序：94 ℃預(yù)變性3 min；94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，進(jìn)行35個循環(huán)；68 ℃ 1 min。每個樣品設(shè)4個重復(fù)。采用2-△△Ct法分析檢測結(jié)果（張麗等，2015）。

1. 4 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2013進(jìn)行統(tǒng)計和制圖，采用SPSS 21.0進(jìn)行相關(guān)性分析。

2 結(jié)果與分析

2. 1 花青素種類鑒定結(jié)果

在紫外檢測器下，花青素在260～280 nm和490～ 550 nm出現(xiàn)最大吸收峰（劉海英等，2012）。從圖3可看出，利用高效液相色譜儀和紫外檢測器在525 nm波長下對成熟藍(lán)果忍冬果實進(jìn)行掃描檢測，發(fā)現(xiàn)8種花青素（A1～A8），出峰時間為11.77～23.82 min。峰值高低代表花青素含量的高低，A3為藍(lán)果忍冬果實含量最高的花青素，吸收峰分別為280.8和516.6 nm。

從8種花青素（A1～A8）的質(zhì)譜信息（表3）可看出，主要有3種苷元離子存在于藍(lán)果忍冬果實花青素中，分別為矢車菊色素（Cyanidin，m/z 287），天竺葵色素（Pelargonidin，m/z 271）和芍藥色素（Peonidin，m/z 301）。通過與標(biāo)準(zhǔn)品保留時間進(jìn)行比較（16.07和17.15 min），A3和A4被鑒定為矢車菊3-葡萄糖（Cyanidin 3-glucoside）和矢車菊3-蕓香糖（Cyanidin 3-rutinoside）。表明花青素的糖基化常發(fā)生在B環(huán)的3和5位，尤其易發(fā)生在3位。已有研究證實，花青素的洗脫時間為飛燕草色素（Delphinidin，Dp）>矢車菊色素（Cyanidin，Cy）>牽牛花色素（Petunidin，Pt）>天竺葵色素（Pelargonidin，Pg）>芍藥色素（Peonidin，Pn）>錦葵色素（Malvidin，Mv）（Singleton et al.， 1999； Mortazavi et al.， 2008； Abad-García et al.，2009；Grabherr et al.，2011）。A1顯示了非常高的碎片離子m/z 449（[Cy+162]+）及分子離子m/z 611（[Cy+162+162]+），由此判斷，A1為矢車菊3，5-二葡萄糖（Cyanidin 3，5-diglucoside）；A2為矢車菊—葡萄糖醛酸（Cyanidin derivatives），其存在m/z 463（[Cy+176]+）和625（[Cy+176+162]+）兩種離子片段，但仍需進(jìn)一步確定；A5存在高豐度的m/z 271和433（[Pg+162]）+離子碎片峰，被判斷為天竺葵3-葡萄糖（Pelargonidin 3-glucoside）；A6和A7均存在m/z 301離子片段，為芍藥色素苷元，A6含有m/z 463（[Pn+162]）+片段，而A7含有m/z 609（[Pn+308]）+片段，故兩種化合物分別判定為芍藥3-葡萄糖（Peonidin 3-glucoside）和芍藥3-蕓香糖（Peonidin 3-rutinoside）；A8含有碎片離子峰m/z 287和491，可能為矢車菊六碳糖衍生物[Cyanidin-（acetoyl）-

hexoside]，因為花青素苷元的極性越小，保留時間越長（Iseli et al.，1999；Chaovanalikit et al.，2004；Wang and Stoner，2008；Wojdy？覥o et al.，2013）。綜上所述，8種花青素中以矢車菊為苷元的花青素種類最多（5種），表明藍(lán)果忍冬果實中花青素主要以矢車菊色素為主。

高效液相色譜檢測結(jié)果還顯示，不同品種的藍(lán)果忍冬果實花青素種類有所差異，日本-5僅檢測到除矢車菊六碳糖衍生物以外的7種花青素，蓓蕾和HSY-4均檢測到8種花青素（表4）。

2. 2 花青素含量測定結(jié)果

由表4可知，3個品種果實中花青素含量最高的均為矢車菊3-葡萄糖（A3），占總花青素含量的76.61%～

86.67%。從花青素總含量來看，不同品種間差異明顯，蓓蕾成熟果實中總花青素含量最高，達(dá)500.14 mg/100 gFW，日本-5含量最低，為162.79 mg/100 gFW。

2. 3 花青素合成相關(guān)基因的表達(dá)分析結(jié)果

不同生長發(fā)育期的蓓蕾藍(lán)果忍冬果實qRT-PCR檢測結(jié)果如圖4、圖5和圖6所示，花青素合成相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因和轉(zhuǎn)錄因子在不同時期表達(dá)量均不同，其表達(dá)量隨著果實的成熟均呈先升高后降低的變化趨勢，總花青素含量呈升高趨勢。隨果實花青素的積累（圖6），果皮顏色發(fā)生轉(zhuǎn)變，花青素合成相關(guān)的基因表達(dá)量增加，至半轉(zhuǎn)色期時表達(dá)量達(dá)峰值，此時花青素合成并大量積累，至軟化期總花青素含量達(dá)500.14 mg/100 gFW。隨果實顏色的加深至果實軟化，花青素不斷的積累，而此時基因表達(dá)量逐漸降低。

5個結(jié)構(gòu)基因在不同時期的表達(dá)量也不相同（圖4）。二氫黃酮醇4-還原酶（DFR）、黃烷酮-3-羥化酶（F3H）、查爾酮合酶（CHS）基因變化不明顯，而苯丙氨酸解氨酶（PAL）和花青素合成酶（ANS）基因在花青素合成積累過程中相對表達(dá)量增幅較大，說明此時期苯丙氨酸作為大量花青素合成的直接前體物質(zhì)參與到此途徑中，PAL和ANS在花青素合成途徑中發(fā)揮重要作用。3個轉(zhuǎn)錄因子在不同時期的表達(dá)量差異也較明顯（圖5），隨著果實顏色加深，bHLH（TT8）基因表達(dá)量升高，果實進(jìn)入軟化階段，表達(dá)量又下降，說明bHLH基因在調(diào)控花青素合成方面發(fā)揮重要作用。MYB和WD40基因表達(dá)量變化不明顯，可能與MYB家族和WD40家族基因參與多個代謝過程有關(guān)。

2. 4 不同品種藍(lán)果忍冬間花青素合成相關(guān)基因表達(dá)對比分析結(jié)果

不同品種藍(lán)果忍冬果實總花青素含量比較結(jié)果見圖7，3種品種果實在完熟期花青素含量大量積累，其中蓓蕾總花青素含量最高，達(dá)500.14 mg/100 gFW，其次為HSY-4，總花青素含量達(dá)348.60 mg/100 gFW，最低的為日本-5，總花青素含量為162.79 mg/100 gFW。

5個結(jié)構(gòu)基因和3個轉(zhuǎn)錄因子qRT-PCR檢測結(jié)果如圖8和圖9所示，無論結(jié)構(gòu)基因還是轉(zhuǎn)錄因子，3個品種藍(lán)果忍冬果實完熟期花青素合成相關(guān)基因的相對表達(dá)水平均高于綠熟期。5個結(jié)構(gòu)基因中，PAL和ANS基因的相對表達(dá)水平最高，說明在整個花青素合成積累過程中這2個結(jié)構(gòu)基因高效表達(dá)，對花青素的合成起重要作用；3個轉(zhuǎn)錄因子中，bHLH基因的表達(dá)水平最高，而MYB和WD40基因表達(dá)水平較低，說明bHLH基因在藍(lán)果忍冬果實花青素合成過程中可能起到關(guān)鍵作用。比較3個品種的果實完熟期發(fā)現(xiàn)，蓓蕾果實中ANS和bHLH基因表達(dá)量最高，在HSY-4果實中PAL基因的表達(dá)量最高，而在日本-5果實中5個結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)量均比蓓蕾和HSY-4果實低，此結(jié)果與蓓蕾果實中總花青素的積累最高而日本-5中積累量最少相符；而在3個品種的果實綠熟期，HSY-4果實中的bHLH基因表達(dá)量最高，品種間存在差異。

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)藍(lán)果忍冬含8種花青素成分，其中含量最高的花青素為矢車菊3-葡萄糖，其含量占總花青素含量的76.61%～86.67%。盡管矢車菊3-葡萄糖普遍存在于水果中，但在藍(lán)果忍冬果實中的含量明顯高于其他漿果，如黑莓（105.65 mg/100 gFW）和藍(lán)莓（77.50 mg/100 gFW）（Chen et al.，2014），因此藍(lán)果忍冬可作為矢車菊3-葡萄糖的優(yōu)秀提取材料。本研究中蓓蕾果實中總花青素含量最高，達(dá)500.14 mg/100 gFW。黑加侖和紅樹莓果實中總花青素含量分別為250.00和323.50 mg/100 gFW（León-González et al.，2015），明顯低于藍(lán)果忍冬果實中總花青素含量，表明藍(lán)果忍冬是花青素提取及保健食品加工的優(yōu)質(zhì)資源。

花青素的合成除了受合成基因的調(diào)控外，環(huán)境因子對其影響也較大，基因表達(dá)是在特定環(huán)境等信號刺激下的選擇性表達(dá)結(jié)果（馬廷蕊等，2012）。本研究中3個品種的藍(lán)果忍冬引種自不同地方，其中日本-5引種自日本庫頁島地區(qū)，HSY-4引種自俄羅斯海參崴地區(qū)，蓓蕾為堪察加忍冬和阿爾泰忍冬雜交的F1代再與勘察加忍冬回交的F2代選育獲得的優(yōu)系品種（王藝菲，2014），三者屬于不同的亞種，因此花青素生物合成過程可能受遺傳因素影響較大，導(dǎo)致品種間的花青素合成機(jī)制存在差異（黃鴻曼等，2011）。但在藍(lán)果忍冬果實整個生長過程中，綠熟期后果實內(nèi)開始合成色素且大量積累，此時花青素合成相關(guān)基因大量表達(dá)，表達(dá)情況與花青素合成情況基本一致。雖然3個品種間花青素合成過程中基因表達(dá)略有差異，但整體來看，各基因相對表達(dá)模式相似，從一定的水平上可解釋藍(lán)果忍冬果實花青素合成的過程。

在基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控過程中，多數(shù)情況下一條以上的基因編碼同一個酶（Li et al.，2012）。本研究發(fā)現(xiàn)，MYB和WD40基因在整個果實發(fā)育期表達(dá)水平均不高，可能是其在藍(lán)果忍冬果實中特異性不強(qiáng)，也可能是植株間有遺傳差異性或果實的空間分布對環(huán)境信號的敏感度不同。張華磊等（2009）研究證實，調(diào)控蘋果果皮花青苷生物合成的MdMYB1基因轉(zhuǎn)錄豐度受光照強(qiáng)烈誘導(dǎo)。據(jù)此推測，果實表面的光照分布是影響MYB和WD40基因表達(dá)水平不明顯的因素之一。此外，在擬南芥長角果中TT8（bHLH）基因能調(diào)節(jié)DFR基因的表達(dá)，且依賴于TTG1（WD40蛋白）和TT2（R2R3-MYB蛋白）（Takos et al.，2006；胡可等，2010；楊鵬程等，2012），但在本研究的藍(lán)果忍冬果實中，bHLH基因在半轉(zhuǎn)色期高度表達(dá)，說明此基因在花青素合成及積累過程中發(fā)揮重要作用，且DFR基因表達(dá)不明顯，DFR基因表達(dá)水平呈低水平狀態(tài)。在蘋果果實中，bHLH基因可激活CHS、DFR和ANS等結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)，從而促進(jìn)花青素的合成與積累（馮曉明，2011）；在擬南芥中，TT8（bHLH）與CHS、CHI、F3H和DFR基因可直接相互作用（Burbulis and Winkel-Shirley，1999；Baudry et al.，2004）。本研究也發(fā)現(xiàn)PAL、CHS和ANS基因的表達(dá)水平與bHLH基因一致，由此猜測，bHLH基因可能是通過激活PAL、CHS和ANS等結(jié)構(gòu)基因來調(diào)控花青素的生物合成過程，但其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

藍(lán)果忍冬含8種花青素，以矢車菊為苷元的花青素種類最多，其PAL、ANS和bHLH基因在花青素合成過程中起調(diào)控作用。蓓蕾、HSY-4和日本-5的花青素合成相關(guān)基因表達(dá)情況相似，但品種間存在差異。

參考文獻(xiàn)：

馮曉明. 2011. 蘋果bHLH基因MdCIbHLH1克隆及功能分析[D]. 泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué). [Feng X M. 2011. Cloning and functional characterization of an apple bHLH gene MdCIbHLH1[D]. Tai’an：Shandong Agricultural University.]

胡可，韓科廳，戴思蘭. 2010. 環(huán)境因子調(diào)控植物花青素苷合成及呈色的機(jī)理[J]. 植物學(xué)報，45（3）：307-317. [Hu K，Han K T，Dai S L. 2010. Regulation of plant anthocyanin synthesis and pigmentation by environmental factors[J]. Chinese Bulletin of Botany，45（3）：307-317.]

胡可，孟麗，韓科廳，孫翊，戴思蘭. 2009. 瓜葉菊花青素合成關(guān)鍵結(jié)構(gòu)基因的分離及表達(dá)分析[J]. 園藝學(xué)報，36（7）：1013-1022.[Hu K，Meng L，Han K T，Sun Y，Dai S L. 2009. Isolation and expression analysis of key genes involved in anthocyanin biosynthesis of cineraria[J]. Acta Horticulturae Sinica，36（7）：1013-1022.]

黃鴻曼，袁利兵，彭志紅，任春梅. 2011. 花青素的生物合成與環(huán)境調(diào)控研究進(jìn)展[J]. 湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，（13）：118-120. [Huang H M，Yuan L B，Peng Z H，Ren C M. 2011. Advances in biosynthesis and environmental regulation of anthocyanin[J]. Hunan Agricultural Sciences，（13）：118- 120.]

賈趙東，馬佩勇，邊小峰，楊清，郭小丁，謝一芝. 2014. 植物花青素合成代謝途徑及其分子調(diào)控[J]. 西北植物學(xué)報，34（7）：1496-1506. [Jia Z D，Ma P Y，Bian X F，Yang Q，Guo X D，Xie Y Z.2014.Biosynthesis metabolic pathway and molecular regulation of plants anthocyanin[J]. Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica，34（7）：1496- 1506.]

李淑芹，李延冰，姜福臣，都昌杰. 1994. 野生植物——藍(lán)靛果營養(yǎng)成分研究[J]. 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)報，25（4）：401-404. [Li S Q，Li Y B，Jiang F C，Du C J. 1994. Study on nutrient components of Lonicera edulis[J]. Journal of Northeast Agricultural University，25（4）：401-404.]

劉海英，郭凈凈，王曼，張東玲，張倩倩，仇金草，丁一，王佩，王蘋，殷佩齊，王莉娜. 2012. 采后處理對紫菜菊花花瓣花青素吸收光譜及抗氧化活性的影響[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，51（17）：3821-3823. [Liu H Y，Guo J J，Wang M，Zhang D L，Zhang Q Q，Qiu J C，Ding Y，Wang P，Wang P，Yin P Q，Wang L N.2012.Effects of post-harvest treatments on absorption spectrum and antioxidant activity of anthocyanin extracted from purple chrysanthemum petals[J]. Hubei Agricultural Sciences，51（17）：3821-3823.]

劉奕琳. 2012. 藍(lán)靛果花色苷分離及其抗氧化與抗癌功能研究[D]. 哈爾濱：東北林業(yè)大學(xué). [Liu Y L. 2012. Separation and research on antioxidant and anticancer anthocyanin of Lonicera edulis[D]. Harbin：Northeast Forestry University.]

馬廷蕊，張金文，梁慧光，柳永強(qiáng). 2012. 植物花青素合成與基因調(diào)控[J]. 農(nóng)業(yè)科學(xué)與技術(shù)，13（3）：507-511. [Ma T R，Zhang J W，Liang H G，Liu Y Q.2012.Plant anthocyanin synthesis and gene regulation[J]. Agricultural Science Technology，13（3）：507-511.]

唐容，黃澤素，代文東，李德珍，王少銘. 2017. 紫紅葉油菜葉片花青素的含量變化及其穩(wěn)定性[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報， 30（2）： 285-290. [Tang R， Huang Z S， Dai W D， Li D Z， Wang S M. 2017. Variation and stability of anthocyanin content in leaves of rapeseed with purple-red leaves[J]. Southwest China Journal of Agricultural Sciences，30（2）： 285-290.]

王海竹，徐啟江，閆海芳. 2016. 光照、糖和激素對花青素合成調(diào)控的綜述[J]. 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報，28（9）：35-41. [Wang H Z， Xu Q J， Yan H F. 2016. Summary of regulation of anthocyanin synthesis by light， sugar and hormone[J]. Acta Agriculturae Jiangxi，28（9）：35-41.]

王藝菲. 2014. 藍(lán)果忍冬（Lonicera caerulea L.）主要生理活性物質(zhì)和揮發(fā)性化合物成分鑒定及遺傳多樣性研究[D]. 哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué). [Wang Y F. 2014. Genetic diversity of main physidogical active substances and volatile compounds of blue honeysuckle（Lonicera caerulea L.）[D]. Harbin：Northeast Agricultural University.]

烏日罕，付艷茹，張燁. 2016. 天然食用色素——花青素的研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢[J]. 現(xiàn)代食品，（16）：35-36. [Wu R H，F(xiàn)u Y R，Zhang Y. 2016. Research status and development tendency of natural edible pigment—Anthocyanidin[J]. Mo-

dern Food，（16）：35-36.]

楊鵬程，周波，李玉花. 2012. 植物花青素合成相關(guān)的bHLH轉(zhuǎn)錄因子[J]. 植物生理學(xué)報，48（8）：747-758. [Yang P C，Zhou B，Li Y H. 2012. The bHLH transcription factors involved in anthocyanin biosynthesis in plants[J]. Plant Physiology Journal，48（8）：747-758.]

張華磊，毛柯，劉志，謝興斌，馮曉明，郝玉金. 2009. MdMYB1轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控紅星蘋果果實著色的計算機(jī)模擬分析及表達(dá)驗證[J]. 園藝學(xué)報，36（11）：1581-1588. [Zhang H L，Mao K，Liu Z，Xie X B，F(xiàn)eng X M，Hao Y J. 2009. In silico analysis and expression confirmation of the regulation of fruit coloration by transcriptional factor MdMYB1 in delicious apple[J]. Acta Horticulturae Sinica，36（11）：1581- 1588.]

張麗，曹應(yīng)龍，王海英，梁曉聲，盧長明. 2015. 實時熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測轉(zhuǎn)基因成分的數(shù)據(jù)分析及其標(biāo)準(zhǔn)化研究[J]. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報，23（1）：126-134. [Zhang L，Cao Y L，Wang H Y，Liang X S，Lu C M. 2015. Standardization of data analysis in real-time quantitative PCR detection of genetically modified ingredients[J]. Journal of Agricultural Biotechnology，23（1）：126-134.]

趙佳. 2010. 藍(lán)果忍冬酚類物質(zhì)的提取、鑒定及抗氧化性研究[D]. 哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué). [Zhao J.2010.Studies on extraction，identification and antioxidant capacity of blue honeysuckle（Lonicera caerulea L.）[D]. Harbin：Northeast Agricultural University.]

中國植物志編輯委員會. 1988. 中國植物志（第七十二卷）[M]. 北京：科學(xué)出版社. [Editorial Board of Flora of China. 1988. Flora of China（Vol. 72）[M]. Beijing：Science Press.]

Abad-García B，Berrueta L A，Garmón-Lobato S，Gallo B，Vicente F. 2009. A general analytical strategy for the cha-

racterization of phenolic compounds in fruit juices by high-performance liquid chromatography with diode array detection coupled to electrospray ionization and triple quadrupole mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography（A），1216（28）：5398-5415.

Baudry A，Heim M A，Dubreucq B，Caboche M，Weisshaar B，Lepiniec L. 2004. TT2，TT8，and TTG1 synergistically spe-

cify the expression of BANYULS and proanthocyanidin biosynthesis in Arabidopsis thaliana[J]. The Plant Journal，39（3）：366-380.

Burbulis I E，Winkel-Shirley B. 1999. Interactions among enzymes of the Arabidopsis flavonoid biosynthetie pathway[J]. Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America，96（22）：12929-12934.

Celli G B，Ghanem A，Brooks M S L. 2014. Haskap berries （Lonicera caerulea L.）—A critical review of antioxidant capacity and health-related studies for potential value-added products[J]. Food Bioprocess Technology，7（6）：1541- 1554.

Chaovanalikit A，Thompson M M，Wrolstad R E. 2004. Cha-

racterization and quantification of anthocyanins and poly-

phenolics in blue honeysuckle（Lonicera caerulea L.）[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，52（4）：848- 852.

Chen L，Xin X，Lan R，Yuan Q P，Wang X J，Li Y. 2014. Isolation of cyanidin 3-glucoside from blue honeysuckle fruits by high-speed counter-current chromatography[J]. Food Chemistry，152（2）：386-390.

Grabherr M G，Haas B J，Yassour M. 2011. Full-length transcriptome assembly from RNA-Seq data without a reference genome[J]. Nature Biotechnology，29（7）：644-652.

Iseli C，Jongeneel C V，Bucher P. 1999. ESTScan：A program for detecting，evaluating，and reconstructing potential coding regions in EST sequences[J]. Proceedings-International Conference on Intelligent Systems for Molecular Biology，12（8）：138-148.

Kusznierewicz B，Piekarska A，Mrugalska B，Konieczka P，Namienik J，Bartoszek A. 2012. Phenolic composition and antioxidant properties of polish blue-berried honeysuckle genotypes by HPLC-DAD-MS，HPLC postcolumn derivatization with ABTS or FC，and TLC with DPPH visualization[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，60（7）：1755-1763.

Laurent D，F(xiàn)ran？觭ois B，Chloé M，Virginie L，Alain D，Tristan R，Jean-Pierre C，Jean-Michel M，Sa？觙d H. 2006. Characterization of a grapevine R2R3-MYB transcription factor that regulates the phenylpropanoid pathway[J]. Plant Phy-

siology，140（2）：499-511.

León-González A J，Sharif T，Kayali A，Abbas M，Dandache J，Etienne-Selloum N，Kevers C，Pincemail J，Auger C，Chabert P，Alhosin M，Schini-Kertha V B. 2015. Delphinidin-3-O- glucoside and delphinidin-3-O-rutinoside mediate the redoxsensitivecaspase 3-related pro-apoptotic effect of blackcurrant juice on leukaemia Jurkat cells[J]. Journal of Functional Foods，178（8）： 847-856.

Li X Y，Sun H Y，Pei J B，Dong Y Y，Wang F W，Chen H，Sun Y P，Wang N，Li H Y，Li Y D. 2012. De novo sequencing and comparative analysis of the blueberry transcriptome to discover putative genes related to antioxidants[J]. Gene，511（1）：54-61.

Mortazavi A，Williams B A，MeCue K，Schaeffer L. 2008. Ma-

pping and quantifying mammalian transcriptomes by RNA- Seq[J]. Nature Methods，5（7）：621-628.

Singleton V L，Orthofer R，Lamuela R M. 1999. Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants by means of Folin-Ciocalteu reagent[J]. Methods Enzymol，299（2）：152-178.

Takos A M，Jaffé F W，Jacob S R，Bogs J，Robinson S P，Walker A R. 2006. Light-induced expression of a MYB gene regulates anthocyanin biosynthesis in red apples[J]. Plant Physiology，142（3）：1216-1232.

Wang L J，Su S，Wu J，Du H，Li S S，Huo J W，Zhang Y，Wang L S. 2014. Variation of anthocyanins and flavonols in Vaccinium uliginosum berry in Lesser Khingan Mountains and its antioxidant activity[J]. Food Chemistry，160：357- 364.

Wang L S，Stoner G D. 2008. Anthocyanins and their role in cancer prevention[J]. Cancer Letters，269（2），281-290.

Wojdy？覥o A，Jáuregui P N N，Carbonell-Barrachina ？魣 A，Oszmiański J，Golis T. 2013. Variability of phytochemical pro-

perties and content of bioactive compounds in Lonicera caerulea L. var.kamtschatica berries[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，61（49）：12072-12084.

（責(zé)任編輯 陳 燕）