RIHA在動物疾病診斷中的應用研究進展

摘要：反向間接血凝試驗（RIHA）是動物疾病診斷中最常用的實驗室檢測技術，在動物的田間及人類的診斷臨床檢測中得到廣泛的運用。現筆者為探討反向間接血凝試驗在動物疾病診斷中的運用，以期為獸醫臨床科技工作者更加合理科學的診斷動物疾病提供有價值的參考。

關鍵詞：反向間接血凝試驗；診斷；應用

反向間接血凝試驗（reverse indirecthemagglutination test，RIHA）是將可溶性抗原（或抗體）先吸附于紅細胞表面，使其成為致敏載體顆粒，然后和其相應抗體（或抗原）作 用，在有電解質存在的適宜條件下，出現的 凝集現象，稱為間接血凝集試驗。將可溶性 抗原吸附于紅細胞表面（致敏），用以檢測 未知抗體的方法稱為正向間接血凝試驗；將已知特異性抗體吸附于紅細胞表面（致敏），用以檢測樣品中的相應抗原的方法稱為反向間接血凝試驗。RIHA 實驗室檢測技術具有結果準確、操作簡便及快速便捷的特點，試驗過程無需特殊儀器及試劑，具有極強的現場適應性，因此在人類和動物疾病的田間和臨床檢測均得到廣泛的推廣運用。本文綜述了 RIHA 在動物疾病診斷中的應用進展，以期為獸醫臨床中致力于疾病診斷的科研工作者提供參考。

1動物病毒病

1.1 豬病

RIHA 為我國鑒定口蹄疫病毒（FMDV）的行業標準，可對FMDV 進行快速準確的初步鑒定。汪德友[1]等在研究中運用McAbDot-ELISA檢測法（免疫吸附試驗與單克隆抗體斑點酶）及 單獨RIHA方法對生豬的FMDV 和SVDV兩個指標進行了檢測，其檢測結果顯示McAb Dot-ELISA具有更加顯著的特異性，且操作簡便，與RIHA相比更具有敏感性、穩定性及直觀性。RIHA 在檢測的過程中雖然具有較高的靈敏度，但其對個別被檢抗原進行檢測時可能會出現非特異性凝集現象，影響最終的檢測結果。將豬瘟病毒（CSFV）中的免疫血清且提取 IgG 進行純化后，運用其致敏綿羊紅細胞進行RIHA ，可檢測生豬扁桃體、脾臟及淋巴結等病原中的CSFV 抗原，其存在的不足之處為處理組織病料的方法存在一定的差異性，這種差異性對血細胞帶來一定的干擾，進而引發非特異性凝集現象，對其結果準確性造成嚴重的影響降低。陳艷衡[2]等在其研究實驗中，采集了87份漢普夏、大約、長白及杜洛克等品種的豬血清樣品檢測研究測試，運用RIHA 試驗等豬源乙型肝炎病毒抗原（HBsAg）進行檢測及評定，結顯示共計檢出3例（3.4%）陽性，表明其具有較為理想的特異性及敏感性。張春杰[3]等在研究中為探討RIHA 試驗評定豬偽狂犬病毒（PRV）中的價值，運用綿羊紅細胞（單抗致敏）建立了RIHA檢測，結果顯示，血清中與試驗（SN）的相符率達96.4%，由此認為 RIHA在PRV常規診斷中具有較高的運用價值。

1.2羊病

國內外動物疾病檢測研究人員為實現羊病的快速檢測及評定，建立了山羊痘病毒（GPV）的RIHA方法，該方法可確診的檢測組織標本中的GPV，同時對感染細胞培養中的GPV的檢測也具有較為顯著的特異性。致敏綿羊紅細胞對于山羊痘病毒的診斷具有較高的準確性，目前動物實驗中對于綿羊紅細胞致敏的檢測方法很多，在實際檢測工作中可根據實際情況徐選擇合適的檢測方法。莊金秋，梅建國[4]等 研究中開展綿羊紅細胞致敏檢測時，使用的是戊二醛和單寧酸進行檢測。結果顯示，這種致敏試驗方法可顯著提升綿羊痘的診斷效果及有效性。

1.3禽病

史國忠[5]等在其研究中為檢測雞傳染性支氣管炎病毒（IBV），建立了 RIHA 檢測法。結果顯示：實驗聚乙二醇（PEG）對病料進行濃縮后，IBV 的檢出率顯著提升，而高免血清致敏紅細胞的純度越高其IBV 敏感度越低，兩者間為負相關關系。研究中將65 份雞血清樣品作為研究對象，分別使用RPHI 及AGP 兩種方法進行檢測，結果顯示：AGP共計檢出陽性21份，其陽性檢出率為23.3% ；RPHI共計檢出陽性61份，其陽性檢出率達93.8%。運用RPHI對AGP方法檢出的21份陽性血清進行再次檢測，其結果均顯示陽性 ；而RPHI 檢測AGP 檢測中的44份陰性血清，結果顯示RPHI共計檢出38份陽性，因此可見RPHI 檢測方法相對AGP來講，檢測準確性更高，且檢出率也更加高。等在研究中為探討RIHA 法對鴨瘟病毒（Virus）檢測的價值，結果顯示，進行3小時的檢測即可判讀其結果，具有操作簡便且檢測時間短且設備試劑費用不高、致敏細胞保存時間長，缺點在于其敏感性不高，僅僅適合進行少量的 DPV 檢測。相對DPV 定性檢測的價值來講，病鴨出現大面積感染且送檢組織內存在數量較大的病毒時，使用RIHA方法進行檢測其可表現出較為突出的敏感性，具有較顯著的實用價值。

1.4犬病

動物研究學者使用RIHA對犬血清進行檢測，結果顯示，共計檢出乙肝表面抗原（HBsAg）12例陽性，其陽性率為15.78%（12/76），同時運用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）對其進行復檢，結果顯示，兩種檢驗方法取得陽性符合率大93%，其陰性符合率則達到 100%。

2小結

RIHA試驗是動物及人類最常用的田間及臨床檢測方法之一。在動物的疾病檢測中，該檢驗最常用檢測紅細胞是羊、兔、雞及O-凝血人紅細胞。新鮮的紅細胞對吸附多糖抗原具有顯著的效果，致敏的新鮮紅細胞還具有保存時間短、易碎、溶血且極易受到污染等特點，通常情況下僅僅可使用2至3天。因此，紅細胞增敏通常是在致敏之前進行的。醛類化合物在吸附蛋白抗原及抗體方面表現出較明顯的能力，可長期保存，不發生溶血。RIHA不需復雜的設備，且操作簡單方便，進行檢測時只需在V型96井微反應板上進行，且檢測時間短，結果很容易判斷，檢測的特異性及重現性較為突出，可在3小時內確診，因此臨床及田間使用價值高。RIHA具有特異性高、靈敏度高、操作簡便等優點，適用于少量標本的臨床診斷和檢測，可用于動物疾病診斷、生物制品開發和基礎水產養殖。具有廣闊的應用前景。

參考文獻

[1]汪德友.畜牧獸醫動物防疫工作重點與存在的主要問題[J].農民致富之友，2018（16）：234.

[2]陳艷衡.中小養殖場動物疾病預防與控制方法探究[J].畜禽業，2018（08）：144-145.

[3]張春杰.淺議獸醫病理診斷技術在動物疾病診治中的作用[J].黑龍江科技信息，2016（28）：269.

[4]莊金秋，梅建國，王玉茂，謝金文，莫玲，沈志強.反向間接血凝試驗在畜禽病毒疾病診斷中的應用進展[J].中國動物保健，2016，18（06）：72-73.

[5]史國忠.獸醫病理學在動物疾病診斷及生產中的應用[J].中國畜牧獸醫文摘，2015，31（11）：163.