人降鈣素原的原核表達、純化和鑒定

付濤，蘇丹華，劉原，劉卿，吳亮，陳盛霞，姜旭淦

(江蘇大學醫學院，江蘇鎮江 212013)

人降鈣素原的原核表達、純化和鑒定

付濤，蘇丹華，劉原，劉卿，吳亮，陳盛霞，姜旭淦

(江蘇大學醫學院，江蘇鎮江 212013)

目的 構建人降鈣素原(procalcitonin，PCT)原核表達載體，獲得高純度PCT重組蛋白。方法 根據NCBI上PCT基因序列設計引物，利用PCR技術擴增PCT基因，構建PCT/pET-22b(+)重組表達載體，轉化至大腸埃希菌(E.coli)BL21中誘導表達；采用鎳柱親和層析法純化重組蛋白，用western blot和膠體金法對其進行鑒定。結果 瓊脂糖凝膠電泳結果顯示PCR擴增產物約為350 bp。同源性比對分析結果表明，PCT基因片段(348 bp)成功插入pTG19-T載體，未出現堿基突變。用BamHⅠ和HindⅢ對重組表達載體雙酶切，得到約為350 bp和5 500 bp片段。SDS-PAGE電泳顯示PCT重組蛋白以可溶性形式存在，Mr約14 000，經鎳柱親和層析法純化后即可獲得。western blot和PCT膠體金法結果呈陽性，顯示融合蛋白含組氨酸標簽(His-tag)，成功表達出PCT重組蛋白。結論 應用重組DNA技術成功構建PCT基因融合重組表達載體，通過蛋白質表達純化技術獲得PCT融合蛋白。

降鈣素原；原核表達；純化

降鈣素原(procalcitonin，PCT)是人11號染色體中降鈣素原基因表達的產物，由甲狀腺濾泡旁C細胞分泌產生，含有116個氨基酸，相對分子質量(Mr)約為1 3000[1-2]。目前關于PCT的研究主要集中于PCT基因結構、功能以及導致其升高的機制和臨床表現等，關于PCT檢測方法的研究較少[3]。研制PCT試劑盒所需要的高純度抗原和特異性抗體多數來自于國外公司，價格昂貴，并且因原料來源和質量不一致導致不同廠家產品檢測結果相差較大，不利于檢測結果的臨床應用和質量控制。……