人睪丸蛋白SPAG4L與KASH結(jié)構(gòu)域蛋白Nesprin-3的相互作用*

任瑤，伍勇，黃利華，邢曉為

(中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院a.醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，b.檢驗(yàn)科，長(zhǎng)沙 430013)

人睪丸蛋白SPAG4L與KASH結(jié)構(gòu)域蛋白Nesprin-3的相互作用*

任瑤a,b，伍勇b，黃利華a，邢曉為a

(中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院a.醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，b.檢驗(yàn)科，長(zhǎng)沙 430013)

目的 探討含SUN(Sad, UNC-84)結(jié)構(gòu)域的人睪丸蛋白SPAG4L(sperm-associated antigen 4 like)與具有KASH(Klarsicht, ANC-1 and Syne homology)結(jié)構(gòu)域的核膜血影重復(fù)蛋白3(nuclear envelop spectrin repeat proteins 3，Nesprin-3)之間的相互作用。方法 用生物信息學(xué)方法對(duì)SPAG4L蛋白進(jìn)行分析，通過(guò)體外轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，觀察SPAG4L的亞細(xì)胞定位；并用免疫熒光技術(shù)、免疫共沉淀和雙分子熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SPAG4L是否與KASH結(jié)構(gòu)域蛋白Nesprin-3存在相互作用。結(jié)果 生物信息學(xué)分析結(jié)果表明，SPAG4L蛋白具有跨膜結(jié)構(gòu)；亞細(xì)胞定位結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SPAG4L蛋白定位于核膜和胞漿；免疫熒光、免疫共沉淀和雙分子熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，SPAG4L蛋白與Nesprin-3蛋白質(zhì)相互作用，形成LINC(linkers of the nucleoskeleton to the cytoskeleton)復(fù)合物。結(jié)論 SPAG4L與Nesprin-3 能夠相互作用，形成LINC 復(fù)合物,對(duì)了解SPAG4L蛋白在精子發(fā)生中的作用具有重要的意義。

SPAG4L；核膜血影重復(fù)蛋白3；相互作用；LINC復(fù)合物；精子發(fā)生

SUN蛋白是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新的核膜蛋白家族，共有5個(gè)成員：SUN1、SUN2、SUN3、SPAG4(sperm-associated antigen 4)和SPAG4L，其共同特征是C端包含一個(gè)保守的SUN結(jié)構(gòu)域[1]。SPAG4L是SUN蛋白家族第5個(gè)成員，也稱為SUN5或TSARG4(testis and spermatogenesis related gene 4)，由本課題組最先克隆并提交GenBank(AF401350)[2]。在前期研究中發(fā)現(xiàn)，在小鼠動(dòng)物模式中，Spag4L在睪丸中特異性表達(dá)，受生長(zhǎng)發(fā)育調(diào)控，參與精子減數(shù)分裂過(guò)程[3-4]。

核膜血影重復(fù)蛋白3(Nesprin-3)是一個(gè)KASH結(jié)構(gòu)域蛋白。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，在睪丸滋養(yǎng)細(xì)胞中Nesprin-3介導(dǎo)中間纖維與核膜的連接[5]。在小鼠精子細(xì)胞中，Nesprin-3與 Spag4相互作用[6]。由于SPAG4L與SPAG4高度同源，本研究旨在分析SPAG4L和Nesprin-3的相互作用，為闡明SPAG4L在精子發(fā)生中的作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。……