慢病毒介導(dǎo)microRNA-214在成牙骨質(zhì)細(xì)胞分化過(guò)程中的作用

孫福財(cái)，劉雪婷，蔡志斌，張金華

（1.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 口腔科，浙江 溫州 325015；2.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院 口腔綜合科，浙江 溫州 325027）

慢病毒介導(dǎo)microRNA-214在成牙骨質(zhì)細(xì)胞分化過(guò)程中的作用

孫福財(cái)1，劉雪婷1，蔡志斌2，張金華1

（1.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 口腔科，浙江 溫州 325015；2.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院 口腔綜合科，浙江 溫州 325027）

目的:構(gòu)建microRNA-214沉默慢病毒載體并研究其在成牙骨質(zhì)細(xì)胞分化過(guò)程中的作用。方法:常規(guī)條件下培養(yǎng)成牙骨質(zhì)細(xì)胞系，并對(duì)其進(jìn)行礦化誘導(dǎo)，檢測(cè)牙骨質(zhì)分化及礦化相關(guān)標(biāo)記物的變化。隨后，構(gòu)建microRNA-214沉默慢病毒載體并感染成牙骨質(zhì)細(xì)胞，熒光顯微鏡觀察其感染效率，并用茜素紅和Von kossa染色檢測(cè)不同組成牙骨質(zhì)細(xì)胞的礦化能力，最后檢測(cè)不同組之間牙骨質(zhì)分化標(biāo)志物的變化。結(jié)果: Real-time PCR結(jié)果顯示，隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)，成牙骨質(zhì)細(xì)胞分化的標(biāo)志物ALP、Runx2、BSP、OCN、Col1a和CAP mRNA的相對(duì)表達(dá)量逐漸增加。空白組、陰性對(duì)照組和microRNA-214沉默載體組感染成牙骨質(zhì)細(xì)胞系比率達(dá)到90%以上。相對(duì)于空白組和陰性對(duì)照組，microRNA-214沉默組microRNA-214的表達(dá)量顯著下降，這表明microRNA-214沉默載體很好地發(fā)揮了沉默功能。相對(duì)于空白組和陰性對(duì)照組，microRNA-214沉默組能顯著提高成牙骨質(zhì)細(xì)胞的增殖速率。成牙骨質(zhì)細(xì)胞礦化程度的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于空白組和陰性對(duì)照組，microRNA-214沉默組礦化結(jié)節(jié)數(shù)量增多，形態(tài)變大。同時(shí)，成牙骨質(zhì)細(xì)胞分化的標(biāo)志物ALP、Runx2、OCN、Col1a、BSP和CAP的表達(dá)量在microRNA-214沉默組中均顯著增加。結(jié)論:microRNA-214沉默能夠促進(jìn)成牙骨質(zhì)細(xì)胞分化。

microRNA-214；慢病毒屬；……