高效液相色譜儀在《天然藥物化學》實驗教學中應用初探

韓忠耀　鄧先擴　劉承貴　唐方方　王傳明

摘 要 目的：為解決在《天然藥物化學》實驗課程中對目標單體化學成分純度判斷不精準及在提取、分離、純化等過程不能對目標分離成分純度的動態變化監控等問題，加強與提高學生對現代科學儀器的實際操作能力，將高效液相應用到《天然藥物化學》實驗課程中。方法：結合黔南民族醫學高等?？茖W校藥學專業的實際情況，通過學生分組實驗等方式探索將高效液相色譜儀應用于《天然藥物化學》實驗課堂中。結果：解決了傳統實驗課程中用薄層層析法與顯色反應等不能監控天然藥物化學成分在提取、分離、純化過程中目標單體成分純度的動態變化過程及最終目標單體化學成分具體的純度的問題。結論：高效液相色譜儀在《天然藥物化學》實驗課程中的應用，能對目標單體成分進行純度精準判斷以及對目標分離成分純度的進行動態監控，并能增強學生對現代科學儀器的操作能力，但實驗課程中仍存在一些問題，須進一步增強該課程實驗教學改革。

關鍵詞 天然藥物化學 實驗教學 高效液相 實驗改革

《天然藥物化學》實驗在實際開展過程中，通常是針對某一個天然藥物中某一個或幾個單體化學成分為目標進行實驗設計，通過提取、分離、純化等手段，得到目標單體化學成分，最后通常通過薄層層析方法與顯色反應等手段對目標單體化學成分進行判斷，但是在實驗過程中，對得到的目標單體化學成分的進行純度判斷始終是個問題，例如：通過薄層層析技術并結合對照品比較法，雖然能夠對得到的目標單體化學成分的純度進行定性判斷，但是，具體純度是多少呢？為解決諸類問題，將HPLC技術，即高效液相色譜技術應用到《天然藥物化學》實驗課程中，查閱相關文獻，未見關于高效液相色譜儀在《天然藥物化學》實驗教學改革中的應用的相關報道。本文通過將高效液相色譜儀在《天然藥物化學》實驗教學中進行嘗試，探索實驗過程中對目標單體化學成分具體純度的判斷以及天然藥物在提取、分離及純化等過程中對目標單體化學成分純度進行動態監控等問題的解決方法。

1高效液相色譜儀在《天然藥物化學》實驗教學中應用的必要性

HPLC技術，即高效液相色譜技術是近年來發展較快、應用較廣的一門現代科學技術，主要用于天然藥物、中藥及民族藥的含量測定、質量控制、定性定量分析等。

通常，該項技術主要應用于《藥物分析》、《中藥制劑分析》、《中藥分析》、《分析化學》等課程的實驗實踐教學過程中，較少應用到《天然藥物化學》實驗教學過程中，但是，近年來，隨著天然藥物化學學科的發展、高校職業教育及適應生產與工業實際的需要，將高效液相色譜儀應用到《天然藥物化學》實驗教學中越來越具有必要性，這是適應高校實驗課程多樣化、應用型及實驗教學改進的要求。

將高效液相色譜儀應用到《天然藥物化學》實驗教學過程中也是適應現代醫藥高等院校教學的需要，并能與現代企業實踐緊密結合起來，為此學校于2013年采購了多種現代化實驗設施設備，如Agilent 1260型高效液相色譜儀及相關配件二極管陣列檢測器、在線真空脫氣機、四元梯度泵等，這些硬件設施設備的完善，為將高效液相色譜技術應用到《天然藥物化學》實驗教學中提供物質保障。

2 高效液相色譜儀在《天然藥物化學》實驗教學中應用探索

2.1 知識準備

對《天然藥物化學》理論教學過程中加強了高效液相色譜儀的應用的學習和講解，通過在理論教學中應用講授法、案列分析法、視頻播放、Flash展示、小組討論等方法，學生基本掌握了該儀器的相關知識。

2.2 實驗的選擇、實驗設計及分組

黔南民族醫學高等?？茖W校藥學專業《天然藥物化學》實驗共安排五個實驗，以“黃連中鹽酸小檗堿的提取、分離與鑒定”為例，按照實驗講義，學生分小組分別開展實驗。將高效液相色譜技術分別對藥材粗粉浸泡液、滲漉液、過濾液（石灰乳調PH后）、濃鹽酸調試液、鹽酸小檗堿粗品（鹽析純化）、純品共六個操作過程中鹽酸小檗堿進行純度測定，進行全程動態監控。實驗的開展，首先是按照實驗教材全程完成傳統實驗的基礎上，再利用實驗過程中比較耗時的滲漉過程及整個實驗結束后，離線開展高效液相動態全程監控檢測的相關操作。

2.3 授課教師示范引導

實驗前準備：對高效液相色譜儀使用前對照品溶液的制備、供試品溶液的制備、濾膜、濾頭、過濾器及流動相的制備等，邊操作演示邊介紹，讓學生熟識使用精密儀器高效液相色譜儀前的一些操作要領及注意事項。

在開展實驗的過程中，教師首先介紹高效液相色譜儀的結構、基本原理、操作要領及操作時注意事項。然后答疑，對學生的疑問進行解答。最后，以對照品溶液的檢測為例進行全程演示。

通過教師演示，讓學生熟識并掌握高效液相色譜儀的各種操作要領及注意事項，為學生實際動手操作奠定基礎。

2.4 學生實際操作

教師演示后，學生以小組為單位，按照實驗設計分別收集藥材粗粉浸泡液、滲漉液等六個操作過程中間體適量及純品適量，然后按照供試品溶液的制備方法，進行處理，分別用0.45€%em 微孔濾膜濾過到液相小瓶、編號，即得各操作過程中間體供試品溶液及純品的供試品溶液。然后與對照品溶液，分別加入到高效液相進樣區相應位置，對號入座。

2.5 相關保障措施

根據檢測數量與檢測時間等，由于儀器設備的限制，為保證實驗的順利開展，分小組開展實驗，同時，保證流動相的量要高于實際用量，根據預測時間，分時間段依次進行檢測。每小組檢測結束后，離線方式打開數據處理軟件，分別查看藥材粗粉浸泡液、滲漉液等六個操作過程鹽酸小檗堿的純度，記錄在實驗記錄中。用EXCEL軟件或SPSS 18.0軟件繪制不同階段鹽酸小檗堿的純度動態變化曲線數據圖。

3 結果與討論

將高效液相色譜儀應用到《天然藥物化學》實驗課程中，這種探索的結果是成功的，解決了學生實驗操作中對純度的精準檢測，動態監控了目標化學成分純度在提取、分離、純化等各階段動態變化，同時，提高了學生的動手操作能力，但是，在實驗的開展過程中，也存在一定的問題，如儀器設備少，不能滿足實際教學的需要，整個實驗開展下來比較費時，同時，在精密儀器室開展實驗，缺少專業實驗員，建議設立專業實驗員教學崗位。

（通訊作者：王傳明）

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