皮炎濕疹疾病進展與皮損微生物感染種類、數量及炎性因子的關聯研究

鄧俊峰 樓芳 焦繼光

·論著·

皮炎濕疹疾病進展與皮損微生物感染種類、數量及炎性因子的關聯研究

鄧俊峰 樓芳 焦繼光

目的 探討皮炎濕疹疾病進展與其皮損微生物感染種類、數量及炎性因子的關聯。方法 于患者皮炎濕疹皮損部位皮膚、非皮損部位皮膚同時取材做微生物培養，對培養結果進行常規菌種鑒定和菌落計數，比較皮炎濕疹疾病進展組與無進展組患者的炎性因子檢測結果。結果 125例皮炎濕疹患者的皮損處微生物培養陽性者共占66.40%，其中金黃色葡萄球菌檢出率達到33.60%，較該組患者在非皮損部位細菌及真菌檢出率明顯升高(P<0.05)；皮損進展繼發感染的患者皮損部位金葡菌檢出率76.67%顯著高于臨床皮損無進展患者及對照組(P<0.05)；皮損進展繼發感染患者血清中多種炎性介質的含量明顯高于皮損無進展患者的指標(P<0.05)。結論 皮炎濕疹疾病進展與其皮損部位金黃色葡萄球菌感染、金葡菌平均密度密切相關，相關炎性因子可能為皮炎濕疹早期診治和預后評判提供參考。

皮炎濕疹；金黃色葡萄球菌；炎性因子

皮炎濕疹疾病是皮膚科臨床常見病和多發病[1-3]。通常只要是臨床表現為皮膚瘙癢、紅斑、丘疹、水皰、表皮脫屑和肥厚等特征，并伴有局部滲出和融合趨勢的皮疹，在暫時無法進一步確診的患者均可先行擬診為皮炎濕疹[4]。皮炎濕疹性疾病的發病原因十分復雜，發病機制目前尚未明確。多數觀點認為該病系由多種因素綜合作用而引起的以明顯滲出為特征的皮膚炎性反應性皮膚病[5,6]。目前仍缺乏特效治療手段，造成該病常慢性遷延，容易復發。研究發現，人體的免疫機能失衡是本病的發病基礎，而皮膚上某些微生物定植是造成免疫功能紊亂的重要原因，應引起足夠重視[7,8]。本研究選取125例皮炎濕疹患者為研究對象，探討皮炎濕疹疾病進展與其皮損微生物感染種類、數量及炎性因子的關聯，為臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年6月至2015年12月我院符合入組標準且自愿接受檢測的皮炎濕疹門診患者。(1)入選標準：①性別不限；②18歲以上成年患者；③臨床確診為各種類型的皮炎濕疹，病變處皮損有紅斑、丘疹或水皰且有滲出傾向；④病變反復發作，病因未明；⑤4周內未接受過皮質類固醇激素治療，未應用全身抗菌素和(或)抗真菌類藥物治療的患者；⑥近7d內未進行治療的患者。濕疹皮炎的診斷標準參照中華醫學會皮膚性病學分會免疫學組指定的《濕疹診療指南(2011 年)》[3]。(2)排除標準：①甲、乙、丙、丁、戊型肝炎病毒及人類免疫缺陷病毒感染者；②自身免疫性疾病患者；③惡性腫瘤患者；④嚴重的心腦血管等疾病患者；⑤各種精神疾患者；⑥罹患其他皮膚疾病者。(3)失聯原因及其應對措施：①預計原因：患者中途退出試驗；患者在試驗過程中轉院治療。②應對措施：按照1∶1比例相應補充受試患者進試驗組。(4)倫理學考量：①患者及其直系家屬簽署參與該臨床研究的知情同意書；②對患者的醫療治療和安全有充分保障；③對入選患者的信息及診療記錄予以保密，保護患者的隱私權；④本研究經過我院倫理委員會批準進行。最終共選取符合入組標準的皮炎濕疹患者共125例，男75例，女50例；年齡18～75歲，平均年齡(58.72±10.24)歲；病程3周～12年。臨床表現：(1)依據皮損范圍：局限性濕疹60例，泛發性濕疹65例；(2)依據皮損特征：急性滲出性濕疹71例，慢性斑塊性濕疹54例；(3)皮損有進展繼發感染者30例，皮損無進展者95例；對照組：健康成年人50 例，皮膚正常。

1.2 方法 用無菌棉簽自患者皮炎濕疹皮損部位皮膚、非皮損部位皮膚(選擇與皮損對稱部位或臨近皮損6cm外正常皮膚)，對于對照組正常皮膚者統一采集左側前臂屈側皮膚標本。取標本過程中應注意避免觸及皮損外皮膚。采集標本后將棉簽置于裝有3ml無菌稀釋液中，反復振蕩30s，取10μl稀釋液接種血瓊脂培養皿，置于35℃恒溫培養箱內，在有氧環境下培養24～48h后觀察培養皿內菌落發育情況。記錄全部分離后得到的細菌種類及菌落數目。同時將其余稀釋液經離心機離心后棄去上清液，將沉淀物接種在沙堡弱葡萄糖瓊脂(SDA)及馬拉色菌培養基上，置入37℃恒溫培養箱中開始孵育，每3天觀察1次菌落孵育結果，連續觀察30d。對培養出的細菌及真菌做常規菌種鑒定。對分離培養出的細菌菌種及菌落數，根據下列公式計算單位皮損面積內的菌落數：皮損表面微生物密度(cfu/cm2)=每平皿菌落數×250÷3.14。患者組和對照組分別在開始治療前晨起后空腹抽取上肢靜脈血5ml，采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗測定其中血清淀粉樣蛋白A(SAA)、白介素-6(IL-6)、白介素-17(IL-17)、白介素-22(IL-22)、白介素-1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、轉化生長因子-β1(TGF-β1)水平檢測。

2 結果

2.1 不同部位微生物分布培養結果比較 125例皮炎濕疹患者的皮損標本中，經培養鑒定呈細菌和(或)真菌陽性者共83例(66.40%)，其中包括金黃色葡萄球菌42株(33.60%)，表皮葡萄球菌33株(26.40%)，同時經鑒定檢出馬拉色菌62株(49.60%)。患者組非皮損部位標本中，經培養鑒定呈細菌和(或)真菌陽性者共39例(31.20%)，其中包括金黃色葡萄球菌9株(7.20%)，表皮葡萄球菌36株(28.80%)，同時經鑒定檢出馬拉色菌37株(29.60%)。對照組50例健康成人正常皮膚標本中，經培養鑒定呈細菌及(或)真菌陽性者共24例(48.00%)，其中包括金黃色葡萄球菌0株，表皮葡萄球菌16株(32.00%)，同時經鑒定檢出馬拉色菌14株(28.00%)。全部皮損區域標本細菌總檢出率顯著高于非皮損皮膚，差異有統計學意義(χ2=30.993，P<0.05)；全部皮損區域標本金葡菌檢出率顯著高于非皮損皮膚，差異有統計學意義(χ2=15.433，P<0.05)；急性滲出型皮損細菌總檢出率顯著高于慢性斑塊型皮損，差異有統計學意義(χ2=14.109，P<0.05)；急性滲出型皮損的金葡菌檢出率與慢性斑塊型皮損比較，差異無統計學意義(χ2=0.467，P>0.05)；全部皮損區域標本馬拉色菌檢出率顯著高于非皮損皮膚，差異有統計學意義(χ2=10.452，P<0.05)。見表1。

表1 皮炎濕疹皮損及非皮損處及對照組微生物分布情況 %(例)

注：與全部皮損比較，*P<0.05；與急性滲出型比較，#P<0.05

2.2 皮炎濕疹皮損進展情況與微生物檢出率關系比較 皮損進展繼發感染的患者共30例，皮損進展處細菌總檢出率83.33%(25/30)與金葡菌檢出率76.67%(20/30)均顯著高于臨床皮損無進展患者皮損處細菌總檢出率61.05%(58/95)和金葡菌檢出率20.00%(19/95)以及正常皮膚組，差異有統計學意義(P<0.05)；但皮損進展繼發感染的患者與皮損無進展皮炎濕疹患者及對照組正常皮膚者表皮葡萄球菌的檢出率接近，差異無統計學意義(P>0.05)。皮損進展繼發感染的患者與皮損無進展皮炎濕疹患者馬拉色菌的檢出率接近，差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 皮炎濕疹皮損進展情況與微生物檢出率關系比較 %(例)

注：與皮損無進展比較，*P<0.05；與皮損進展比較，#P<0.05

2.3 皮炎濕疹皮損進展情況與患者血清炎性因子關系比較 皮損進展繼發感染患者血清中SAA、IL-6、IL-17、IL-22、IL-1β、TNF-α、TGF-β1等多種炎性介質的含量明顯高于皮損無進展患者的指標，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

2.4 皮炎濕疹皮損進展情況與微生物數量關系比較 皮損進展繼發感染的患者共30例，皮損處細菌平均密度為(953 466±9 255)cm2，金葡菌平均密度為(744 287±8 337)cm2，均顯著高于皮損無進展組及對照組的細菌平均密度及金葡菌平均密度，差異有統計學意義(P<0.05)。皮損無進展患者皮損處細菌平均密度為(493 668±8 362)cm2，金葡菌平均密度為(443 755±6 844)cm2，均顯著高于對照組的細菌平均密度及金葡菌平均密度，差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表3 皮炎濕疹皮損進展情況與微生物數量關系比較

進展情況細菌平均密度金葡菌平均密度皮損無進展(n=95)493668±8362443755±6844皮損進展(n=30)953466±9255744287±8337對照組(n=50)3654±4218944±695

注：與皮損無進展比較，*P<0.05；與皮損進展比較，#P<0.05

組別SAA(ng/ml)IL-6(pg/ml)IL-17(pg/ml)IL-22(pg/ml)IL-1β(pg/ml)TNF-α(ng/L)TGF-β1(ng/ml)皮損無進展(n=95)7.32±1.1448.65±15.9220.91±3.4516.96±2.2212.12±2.4284.44±24.63117.84±15.23皮損進展(n=30) 12.12±2.2499.64±21.2230.62±4.5726.07±4.5118.15±4.76201.33±25.85161.23±41.22t值13.53514.24312.16413.2458.33423.2457.347P值<0.01<0.01<0.01<0.01<0.01<0.01<0.01

3 討論

國外研究顯示，特異性皮炎(atopicdermatitis，AD)的發生與細菌感染特別是金葡菌感染關系密切，金葡菌分泌的多種外毒素具有超抗原特性，能夠誘發或加重特異性皮炎[9]。研究發現，皮炎濕疹患者皮損部位細菌和真菌也有較高的檢出率，因此認為微生物的定植在皮炎濕疹的發生發展中發揮了重要作用[10]。

本研究中，125例皮炎濕疹患者的皮損處微生物培養陽性者共占66.40%，其中金黃色葡萄球菌檢出率達到33.60%，真菌檢出率49.60%，較該組患者在非皮損部位細菌及真菌檢出率明顯升高，而對照組金葡菌檢出率為0，提示皮炎濕疹與局部微生物感染增加具有關聯。

本研究結果中皮炎濕疹皮損進展情況與微生物檢出率關系密切，皮損進展繼發感染的患者皮損部位細菌總檢出率高達83.33%(25/30)，同時金葡菌檢出率76.67%(20/30)，均顯著高于臨床皮損無進展患者及對照組，但表皮葡萄球菌與馬拉色菌的檢出率各組較為接近。并且皮損進展繼發感染的患者皮損處細菌和金葡菌平均密度均顯著高于皮損無進展組及對照組。這一結果提示患者皮炎濕疹皮損進展繼發感染與皮損部位細菌感染，尤其是金黃色葡萄球菌感染密切相關。細菌感染造成皮炎濕疹疾病進展，而炎性因子的大量分泌則是炎性反應加劇的始動因素。TH17，Th22細胞能夠分泌IL-17及IL-22等炎性因子，IL-17可以誘導單核細胞和組織巨噬細胞合成分泌多種炎性介質、促進補體C3的合成；補體C3可以與IL-22受體相互結合并激活TNF-α的表達。IL-1β屬于炎性反應的刺激物，局部含量降低時可以協同刺激T細胞活化，而Treg細胞的主要通過細胞-細胞接觸抑制和分泌抑制性細胞因子如TGF-β、IL-10 的方式而發揮免疫調節作[11]。在微炎癥診斷是皮膚病的診療技術法陣的新方向[12-14]，SAA對于急性炎癥進程的評價，其敏感度甚至高于CRP，在微炎癥診斷中CRP應用更為普遍[15]。本研究中皮損進展繼發感染患者血清中多種炎性介質的含量明顯高于皮損無進展患者，這可能為皮炎濕疹早期診治、病情評判、預后提供依據。

綜上所述，皮炎濕疹疾病進展與其皮損部位金黃色葡萄球菌感染、金葡菌平均密度密切相關，相關炎性因子可能為皮炎濕疹早期診治、病情評判、預后及治療提供可靠的參考指標。

1 郝飛,宋志強,鐘華.正確認識皮炎濕疹.實用皮膚病學雜志,2010,23:18.

2RingJ.PathophysiologyofAtopicDermatitis/Eczema//AtopicDermatitis.SpringerInternationalPublishing,2016.69-106.

3 中華醫學會皮膚性病學分會免疫學組.濕疹診療指南 (2011年).中華皮膚科雜志,2011,44:5-6.

4RingJ,AlomarA,BieberT,etal.Guidelinesfortreatmentofatopiceczema(atopicdermatitis)partI.JournaloftheEuropeanAcademyofDermatologyandVenereology,2012,26:1045-1060.

5TauberM,BalicaS,HsuCY,etal.Staphylococcusaureusdensityonlesionalandnonlesionalskinisstronglyassociatedwithdiseaseseverityinatopicdermatitis.JournalofAllergyandClinicalImmunology,2015,42:478-481.

6 劉廣仁,韓永智,黃庚史,等.皮炎濕疹 599 例致病因素分析.中國皮膚性病學雜志,2012,26:126-128.

7 王華,唐立,楊國玲,等.皮炎濕疹患者皮膚菌群的測定及其臨床意義分析.中華醫院感染學雜志,2012,22:5574-5576.

8BroccardoCJ,MahaffeyS,SchwarzJ,etal.ComparativeproteomicprofilingofpatientswithatopicdermatitisbasedonhistoryofeczemaherpeticuminfectionandStaphylococcusaureuscolonization.JournalofAllergyandClinicalImmunology,2011,127:186-193.

9HongSW,KimMR,LeeEY,etal.ExtracellularvesiclesderivedfromStaphylococcusaureusinduceatopicdermatitis‐likeskininflammation.Allergy,2011,66:351-359.

10NadaHA,GomaaNIM,ElakhrasA,etal.Skincolonizationbysuperantigen-producingStaphylococcusaureusinEgyptianpatientswithatopicdermatitisanditsrelationtodiseaseseverityandseruminterleukin-4level.InternationalJournalofInfectiousDiseases,2012,16:e29-e33.

11JonesAL,EverettD,LeungDYM.StaphylococcusAureusColonizationIsAssociatedwithIncreasedPeanutAllergySensitizationinChildrenwithAtopicDermatitis(AD).JournalofAllergyandClinicalImmunology,2016,137:AB183.

12 薛汝增,王柳苑,楊斌.銀屑病與代謝綜合征.皮膚性病診療學雜志,2011,18:341-343.

13 李群,譚國珍,石臻睿,等.激肽釋放酶結合蛋白對銀屑病動物模型的治療作用觀察.皮膚性病診療學雜志,2014,21:11-15,25.

14 惠覓宙,郭清,席麗艷,等.小分子透明質酸在老年皮膚粘膜保健及炎癥防御中的應用.皮膚性病診療學雜志,2014,21:346-347,354.

15LioPA,PatelT,PetersNT,etal.AtopicDermatitis(Eczema)//HandbookofIntegrativeDermatology.SpringerInternationalPublishing,2015:111-136.

10.3969/j.issn.1002-7386.2017.06.017

518108 廣東省深圳市寶安區石巖人民醫院

R

A

1002-7386(2017)06-0865-03

2016-10-12)