DNA甲基化酶3b多態性與乳腺癌易感性的關系

迪力夏提·金斯汗 趙 倩 吐魯洪·沙列爾 付子毅

(新疆醫科大學附屬腫瘤醫院乳腺外科,新疆 烏魯木齊 830011)

·腫 瘤·

DNA甲基化酶3b多態性與乳腺癌易感性的關系

迪力夏提·金斯汗 趙 倩 吐魯洪·沙列爾 付子毅

(新疆醫科大學附屬腫瘤醫院乳腺外科,新疆 烏魯木齊 830011)

目的 探討DNA甲基化酶(DNMT)3b基因單核苷酸多態性(SNPs)與乳腺癌易感性的關系。方法 采用直接測序法檢測157例女性乳腺癌患者(疾病組)和同期162例健康女性(對照組)DNMT3b基因rs6119954、rs4911107、rs4911259和rs2424913位點多態性分布情況，采用比值比(OR)及95%可信區間(CI)表示DNMT3b多態性與乳腺癌易感性的關系，同時分析以上位點多態性與臨床病理參數(年齡、腫瘤大小、側別、TNM分期、淋巴結轉移、絕經狀態、乳腺良性病史及HER-2表達)的關系。結果 疾病組和對照組rs6119954、rs4911107、rs4911259和rs2424913位點多態性基因型分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡。兩組DNMT3b rs4911107和rs4911259基因型分布無統計學差異(P<0.05)；兩組DNMT3b rs6119954位點的GG、GA和AA型分布頻率及DNMT3b rs2424913位點的TT、CT和CC型分布頻率均有統計學意義(P<0.05)。DNMT3b rs4911107和rs4911259位點各基因型及等位基因分布與乳腺癌發病風險無關(P>0.05)。DNMT3b rs6119954、rs2424913位點上，攜帶突變等位基因者的乳腺癌風險升高，均有統計學意義(P<0.05)。DNMT3b rs6119954基因型分布與腫瘤大小、TNM分期及淋巴結轉移有關，而DNMT3b rs2424913基因型分布與TNM分期及乳腺良性病史有關(P<0.05)。結論 DNMT3b rs4911107和rs4911259位點多態性與乳腺癌易感性有關，且其突變基因型增加了乳腺癌的發病風險。

DNA甲基化酶3b(DNMT3b)；單核苷酸多態性；乳腺癌；易感性

研究發現某些基因的多態性與惡性腫瘤的易感性有關，如暴露在相同致癌因素的個體間存在患癌差異性〔1,2〕。在乳腺癌中也發現了較多的易感性相關基因,目前已成為乳腺癌研究的熱點〔3～6〕。DNA甲基轉移酶(DNMT)3b是一種重要的DNA甲基轉移酶，主要功能為從頭甲基化，以非甲基化DNA為模板，催化新的甲基化位點，其單核苷酸多態性(SNPs)與多種腫瘤的易感性有關〔7,8〕。目前，DNMT3b SNPs與乳腺癌易感性的關系尚不清楚，本研究探討DNMT3b SNPs與乳腺癌易感性的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2013年2月至2016年2月本院收治的157例女性乳腺癌患者(疾病組)，年齡31～74歲，中位年齡58.5歲，≤50歲75例，>50歲82例；腫瘤大小≤2 cm者64例，>2 cm者93例；TNM分期：Ⅰ期49例，Ⅱ期55例，Ⅲ期53例；腫瘤部位：左側80例，右側77例；絕經狀態：絕經前44例，絕經后113例；82例有淋巴結轉移，96例有乳腺良性病史，69例HER-2陽性。選取同期的162例于本院體檢的健康女性為對照組，年齡33～75歲，中位年齡55.0歲。排除有放、化療史、既往職業暴露史及自身免疫系統疾病者。本研究獲所有患者的知情同意，并獲本院倫理委員會批準。

1.2 樣本收集及處理 入院后第2天于治療前抽取157例乳腺癌患者外周靜脈血3 ml，置于EDTA抗凝管中，靜置4 h后轉入離心管，4 000 r/min離心10 min后分離血漿，使用全血核酸提取試劑盒(Qiagen公司)提取血漿DNA，置-20℃恒溫冰箱中保存備用。

1.3 SNPs基因分型 按照最小等位基因頻率>0.10、r2>0.8的原則選取4個SNPs位點(rs6119954、rs4911107、rs4911259和rs2424913)，針對以上位點設計引物，采用BigDye Terminator Sequencing試劑盒及ABI 3130型DNA測序儀(美國Applied Biosystem公司)進行DNA測序。

1.4 評價指標 (1)分析兩組DNMT3b基因rs6119954、rs4911107、rs4911259和rs2424913位點多態性分布情況，采用比值比(OR)及95%可信區間(CI)表示DNMT3b多態性與乳腺癌易感性的關系；(2)分析以上位點多態性與臨床病理參數(年齡、腫瘤大小、側別、TNM分期、淋巴結轉移、絕經狀態、乳腺良性病史及HER-2表達)的關系。

1.5 統計學分析 采用SPSS22.0軟件進行χ2檢驗、Hardy-Weinberg平衡檢驗。

2 結 果

2.1 Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗 兩組rs6119954、rs4911107、rs4911259和rs2424913位點多態性基因型的實際頻數與理論頻數無統計學意義(P<0.05)，提示兩組以上SNPs基因型分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡。見表1。

2.2 兩組DNMT3b多態性位點基因型分布比較 兩組DNMT3b rs4911107和rs4911259基因型分布無統計學差異(P>0.05)；兩組DNMT3b rs6119954位點的GG、GA和AA型的分布頻率及DNMT3b rs2424913位點的TT、CT和CC型的分布頻率均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

2.3 兩組DNMT3b多態性位點等位基因分布比較 兩組DNMT3b rs4911107和rs4911259等位基因分布無統計學差異(P<0.05)；兩組DNMT3b rs6119954位點的G、A等位基因分布頻率及DNMT3b rs2424913位點的T、C等位基因分布頻率均有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表1 疾病組的Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗

表2 兩組DNMT3b多態性位點基因型分布情況比較〔n(%)〕

表3 兩組DNMT3b多態性位點等位基因分布比較〔n(%)〕

2.4 DNMT3b各基因型及等位基因與乳腺癌發病風險的關系 DNMT3b rs4911107和rs4911259位點各基因型及等位基因分布與乳腺癌發病風險無關(P>0.05)。DNMT3b rs6119954位點上，以野生型GG為參照，GA、AA及GA+AA型顯著增加了乳腺癌的發病風險，以野生型等位基因G為參照，A等位基因顯著增加了乳腺癌的發病風險；DNMT3b rs2424913位點上，以野生型TT為參照，CC及CT+CC型顯著增加了乳腺癌的發病風險，以野生型等位基因T為參照，C等位基因顯著增加了乳腺癌的發病風險(均P<0.05)。見表2、表3。

2.5 DNMT3b rs6119954、rs2424913基因型與乳腺癌臨床病理參數的關系 DNMT3b rs6119954基因型分布與腫瘤大小、TNM分期及淋巴結轉移有關，而DNMT3b rs2424913基因型分布與TNM分期及乳腺良性病史有關(P<0.05)。見表4。

表4 疾病組DNMT3b rs6119954、rs2424913基因型分布與臨床病理參數的關系

3 討 論

DNA甲基化是一種常見的表觀遺傳學修飾，可通過調控基因轉錄過程來影響機體生長發育，其中DNA甲基化酶是調節DNA甲基化的關鍵酶。近年來發現DNA甲基化酶的基因多態性與多種惡性腫瘤的易感性有關，如鮑倩等〔7〕發現DNMT3B基因-579位點G等位基因在結直腸癌發生過程中是一個潛在的保護因素，李菡等〔8〕發現DNMT3B rs16999593和rs2228611位點與食管癌的發生及分化程度有關，但王川等〔9〕發現DNMT3b基因多態性與中國北方漢族人群胃癌發生無關。以上結果提示DNMT3B多態性與惡性腫瘤易感性的關系在不同類型腫瘤中差別較大。DNMT3B多態性位點可影響該酶的活性和水平，繼而影響表觀遺傳學修飾來影響腫瘤的發生發展。

本研究結果表明rs6119954、rs2424913位點多態性與乳腺癌的易感性有關，其余2個SNPs位點基因分布與乳腺癌易感性均無關。rs2424913處于DNMT3b的啟動子區域，此處SNP引起的遺傳突變可導致在距轉錄起始位點-149堿基對的啟動子區含有C→T轉換多態性〔10〕，表現為DNMT3b活性升高〔11〕，繼而通過引發DNA異常甲基化的方式來使抑癌基因失活〔12〕，增加了乳腺癌易感性。盡管rs6119954、rs4911107和rs4911259 均位于內含子區域，但僅rs6119954多態性與乳腺癌易感性有關，考慮可能原因為rs6119954位于DNMT3b基因第1內含子可能并非直接的致病位點，但該位點是DNMT3b基因的標簽SNP位點之一，可代表與其處于連鎖不平衡區域的所有SNP位點。王建軍等〔13〕發現DNMT3b rs6119954多態性分布可影響晚期結直腸癌患者FOLFOX4方案的療效，其中攜帶rs6119954突變基因者的療效較差，表明該SNP多態性可能是一個潛在的風險因素，支持了本研究的結論。下一步將通過實驗分析DNMT3b rs6119954突變是如何增加乳腺癌的發病風險。此外，本研究表明rs6119954、rs2424913兩個SNP可能與乳腺癌的進展有關，在乳腺癌的診斷上有一定潛在價值。本研究為單中心小樣本研究，仍需多中心大樣本量研究來驗證本研究結論。

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〔2016-10-27修回〕

(編輯 滕欣航)

國家自然科學基金資助項目(81302304)

吐魯洪·沙列爾(1963-)，男，主任醫師，碩士生導師，主要從事乳腺腫瘤研究。

迪力夏提·金斯汗(1982-)，男，主治醫師，碩士，主要從事乳腺腫瘤研究。

R73

A

1005-9202(2017)05-1151-04；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.05.051