關于女性生殖道HPV感染的研究進展

吳 楊，王振美

(揚州市中醫院婦科，江蘇 揚州 225000)

人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)屬于嗜上皮性病毒，在人類生殖道內分布較多，其引發的生殖道感染往往在生殖道內潛伏，可能長達數年、數十年，當人體免疫力減弱時，潛伏中的人乳頭瘤病毒受到激活而大量釋放，容易引發生殖道良性腫瘤，存在惡變風險[1-2]。近年來，臨床上發現與女性生殖道HPV感染相關的疾病(如宮頸上皮內瘤變、宮頸癌、外陰癌等)發生率升高，嚴重威脅到廣大女性人群的生殖健康[3]，因此，對女性生殖道HPV感染的發病機理、診治進一步明確十分重要。本文主要就女性生殖道HPV感染的概念、發病機理、常用檢測方法以及常見治療方法等方面進行綜述，以歸納總結女性生殖道HPV感染的發病機理和診治進展。

1 女性生殖道HPV感染的概念

HPV病毒是一種常見的嗜上皮性病毒，無包膜，其DNA基因組為雙鏈閉環，DNA基因組大小約為7.2～8.0 kb，相對分子量為5.0×106，目前，臨床上已經克隆且鑒定出的HPV病毒多達上百種，約有30多種HPV病毒自人類生殖道分離得到[4]。根據HPV病毒的致病能力，臨床上通常將HPV病毒分為高危型、低危型，其中，高危型HPV病毒主要包括HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV51等，在女性生殖道內長期潛伏，多見于高齡婦女，容易引發宮頸上皮內瘤變，且該病變不易治愈，存在發展為宮頸癌的高風險；低危型HPV病毒主要包括HPV6、HPV11、HPV30、HPV39、HPV42、HPV43等，在女性生殖道內分布的低危型HPV感染多見于年輕婦女，容易引發外陰濕疣、扁平濕疣，少數患者會發生低度宮頸上皮內瘤變，其治愈率較高，發展為宮頸癌的風險相對較低[5-6]。

HPV病毒具有嚴格的嗜上皮性，一旦侵入上皮細胞，往往會在上皮基底層細胞中廣泛復制，且隨著上皮基底層細胞的分化和成熟，逐漸進入表層，病毒DNA經包裝形成完整的病毒顆粒，經修飾后往往會快速在上皮細胞表面釋放，并經性、母嬰垂直等方式廣泛傳播[7]。

2 女性生殖道HPV感染的發病機理

HPV病毒通常是經由微小糜爛創面進入上皮細胞基底層，造成生殖道內感染。有研究采用小鼠進行HPV病毒移植感染研究后發現，感染4周后可見小鼠HPV病毒基因組發生早期開放閱讀框架轉錄，6～8周內病毒大量復制，可見晚期開放閱讀框架轉錄，且細胞增生至平臺期，10～12周內形成完整的病毒顆粒，在上皮細胞表層大量復制，形成尖銳濕疣[8]。HPV病毒DNA在上皮細胞表層中的含量增多，尤其是高度分化的上皮細胞表皮層中存在大量病毒DNA復制，病毒DNA受到衣殼蛋白包被后可形成完整病毒顆粒，具有感染性，可通過病毒E4對細胞內細胞角蛋白網進行破壞，并向外釋放，而在低度分化的上皮細胞基底層中，HPV病毒DNA復制和轉錄相對較弱。采用傳統的原位雜交方法無法對潛伏的HPV病毒DNA予以檢出，故目前對潛伏期HPV病毒感染的發生過程尚未明確[9-10]。導致女性生殖道HPV感染的相關因素主要為宿主免疫應答抗體反應以及細胞介導的免疫反應，此外，性行為過早或性伴侶過多、妊娠、人類免疫缺陷病毒等也有可能會引起女性生殖道內HPV感染[11]。

3 女性生殖道HPV感染的常用檢測方法

3.1 實時熒光定量PCR檢測

實時熒光定量PCR檢測是一種較為新型的核酸定量檢測方法，主要是利用Taq酶5’→3’外切酶的活性，通過熒光標記探針與引物序列中的DNA模板結合，使探針的5’端標記熒光對基團FAM予以發射，而靠近3’端標記熒光則對基團TAMRA予以淬滅，延伸期的Taq酶隨著引物的延伸向DNA模板移動至探針結合部位時，充分發揮Taq酶的5’→3’外切酶活性，切斷探針，解除熒光淬滅作用，使熒光信號有效釋放，再采用光電傳導系統對熒光信號變化予以檢測，利用計算機分析系統獲得定量檢測結果[12]。實時熒光定量PCR檢測可有效提高HPV病毒分型的檢測特異性，可對女性生殖道內HPV感染予以有效檢出，但這種檢測方法的成本相對較高，所需設備和試劑均較為昂貴，且需要專人操作，對其臨床應用產生一定程度的限制。

3.2 PCR-ELISA法檢測

PCR-ELISA法主要是先對PCR體系進行擴增，再利用ELISA法對其產物進行定量，選取通用引物，利用引物5’端對地高辛進行標記，采用探針對生物素進行標記，將擴增產物加入預先包被的聚苯乙烯微孔板中，在42℃下持續雜交20～30 min，最后利用酶底物與標記酶進行顯色，通過對其顯色吸光度進行測定，再對其感染情況予以判斷[13]，這種檢測方法具有較高的靈敏度和特異度，且操作相對簡便，可采用全自動化酶標儀進行測定，檢測成本也較低，在臨床上的應用相對廣泛。

3.3 宮頸脫落細胞薄層涂片檢查

目前，臨床上檢測HPV感染應用最廣泛的檢測方法為宮頸脫落細胞薄層涂片技術，該檢測方法主要是通過對宮頸脫落細胞進行涂片，再對其涂片進行計算機快速圖像分析，可對細胞形態是否異常進行有效識別，還可對其他病毒感染引起的細胞異常情況進行有效鑒別，具有較高的靈敏度和特異度，相對于傳統巴氏涂片法，可減少漏診。

4 女性生殖道HPV感染的常見治療方法

目前，臨床上治療女性生殖道HPV感染的方法主要包括局部藥物治療、局部物理治療、手術治療以及免疫治療，其中，局部藥物治療主要是采用5-Fu軟膏、三氯醋酸等外用藥物對患者外陰、陰道內進行涂抹；局部物理治療主要是采用微波、激光或冷凍方法治療，微波適用于微小病變，激光適用面于淺表病變，冷凍適用于平坦病變；手術治療多用于病灶積大且蒂部較長的HPV感染，通過手術對病灶予以切除，但在手術后為減少復發，還應采用藥物治療；免疫治療主要是利用干擾素對患者的免疫功能予以提高，增強其局部或全身抵抗HPV病毒的能力。此外，近幾年，臨床上還對HPV病毒疫苗進行研發，為HPV病毒感染開辟新道路，但其進展緩慢，尚無法廣泛應用于臨床[14]。

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