河北漢族HBV感染者血清IL-10水平及IL-10基因啟動子區-819 C/T、-592 A/C多態性觀察

王春青，侯志平，何培元，尹春英，張冰，李炳慶，劉景華

(1承德醫學院附屬醫院，河北承德067000；2承德醫學院；3承德市中心醫院)

河北漢族HBV感染者血清IL-10水平及IL-10基因啟動子區-819 C/T、-592 A/C多態性觀察

王春青1，侯志平2，何培元，尹春英1，張冰1，李炳慶1，劉景華3

(1承德醫學院附屬醫院，河北承德067000；2承德醫學院；3承德市中心醫院)

目的 觀察河北省漢族慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者血清IL-10水平變化及IL-10基因啟動子區-592 A/C和-819 C/T位點的多態性。方法 慢性HBV感染者122例，其中無癥狀慢性HBV攜帶者56例(病例組1)、慢性乙型肝炎(乙肝)患者24例(病例組2)、慢性乙肝肝硬化患者42例(病例組3)。將88例自限性HBV清除者納入對照組。采用ELISA法檢測各組血清IL-10；采用PCR法及貝克曼SNP分析儀檢測IL-10 基因啟動子區-592 A/C、-819 C/T位點多態性，計算基因型及等位基因分布頻率。結果 病例組1、病例組2、病例組3及對照組血清IL-10水平分別為(8.76±1.54)、(23.65±10.32)、(11.54±5.78)、(4.57±0.22)pg/mL，兩兩組間比較，P均<0.01。病例組2 IL-10基因-819 C等位基因頻率高于對照組，T等位基因頻率低于對照組(P均<0.05)。各病例組IL-10基因-819 TT基因型頻率低于對照組(P均<0.05)。病例組2 IL-10基因-592 CC基因型頻率高于其余三組，病例組1、病例組3 CC基因型頻率低于對照組(P均<0.05)。結論 河北省漢族慢性乙肝患者血清IL-10水平高于HBV攜帶者、慢性乙肝肝硬化患者及自限性HBV清除者；HBV感染者IL-10基因啟動子區-592 A/C和-819 C/T位點存在多態性，其中HBV攜帶者、慢性乙肝患者及慢性乙肝肝硬化患者-819 C/T位點TT基因型頻率升高，慢性乙肝患者-592 A/C位點CC基因型頻率升高；IL-10基因多態性可能與IL-10分泌水平有關，進而影響HBV感染的結局及轉歸。

乙型肝炎；乙型肝炎病毒；白細胞介素10基因；單核苷酸基因多態性；河北地區；漢族

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2010年1月～2012年1月在承德醫學院附屬醫院消化內科就診的河北籍漢族慢性HBV感染者122例，其中無癥狀慢性HBV攜帶者56例(病例組1)、慢性乙肝患者24例(病例組2)、慢性乙肝肝硬化患者42例(病例組3)。病例組1年齡(36.2±10.5)歲，男女比例為1.24∶1，血清HBsAg +、HBeAg -、HBV DNA病毒載量低于檢測下限，1年內連續隨訪3次以上、每次至少間隔3個月，ALT均在正常范圍；病例組2年齡(42.2±17.8)歲，男女比例為1.38:1，血清HBsAg+、HBV DNA+(HBV DNA>1.0×103copies/mL)、HBeAg+，血清ALT升高；病例組3為慢性乙型肝炎發展而來，臨床表現伴有門脈高壓癥，年齡(49.6±19.3)歲，男女比例為1.41∶1。納入88例自限性HBV清除者為對照組，無急性或慢性乙肝病史，未接種過乙肝疫苗，年齡(39.6±14.6)歲，男女比例為1.34∶1，HBsAg+和(或)HBcAg+、HBsAg -及HBeAg -，HBV DNA低于檢測下限，ALT在正常范圍。排除合并其他肝病因素如HCV、HIV或HDV感染，自身免疫性肝病，代謝性肝病，酒精性肝病及藥物性肝病等[11]。各組性別、年齡等一般資料具有可比性。

1.2 血清IL-10檢測 采用ELISA法檢測各組血清IL-10，操作步驟嚴格按照說明書進行。

1.3 IL-10基因啟動子區-819 C/T、-592 A/C多態性觀察 用EDTA抗凝管采集各組患者外周靜脈血2 mL，采用全血基因組DNA提取試劑盒提取總DNA。IL-10基因上下游引物及延伸引物參考文獻[10]，應用Primer Premier5.0軟件設計并由上海生物工程有限公司合成。PCR反應參數：95 ℃預變性10 min，94 ℃ 30 s，退火溫度60 ℃ 1 min，共35個循環，72 ℃延伸10 min。采用單核苷酸檢測試劑盒和貝克曼檢測分析儀檢測并分析各組IL-10基因啟動子區-592 A/C、-819 C/T位點多態性。

1.4 統計學方法 采用SPSS12.0統計軟件。計量資料比采用t檢驗；各組IL-10基因啟子區-819 C/T、-592 A/C基因型及等位基因頻率比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組血清IL-10水平比較 病例組1、病例組2、病例組3及對照組血清IL-10水平分別為(8.76±1.54)、(23.65±10.32)、(11.54±5.78)、(4.57±0.22)pg/mL，兩兩組間比較，P均<0.01。

2.2 各組IL-10啟動子區-819 C/T等位基因及基因型頻率比較 病例組2 IL-10基因-819 C等位基因頻率高于對照組，T等位基因頻率低于對照組(P均<0.05)。各病例組IL-10基因-819 TT基因型頻率低于對照組(P均<0.05)。詳見表1。

表1 各組IL-10啟動子區-819 C/T等位基因及基因型頻率比較(%)

注：與對照組相比，△P<0.05；與病例組1相比，*P<0.05；與病例組2相比，#P<0.05。

2.3 各組IL-10啟動子區-592 A/C等位基因及基因型頻率比較 病例組2 IL-10基因-592 CC基因型頻率高于其余三組，病例組1、病例組3 CC基因型頻率低于對照組(P均<0.05)。詳見表2。

表2 各組IL-10啟動子區-592A/C等位基因及基因型頻率比較(%)

注：與對照組相比，△P<0.05；與病例組1相比，*P<0.05；與病例組2相比，#P<0.05。

3 討論

世界衛生組織報道，約有35億人曾感染HBV[12]，其中2.4億為慢性感染者。每年全球有超過80萬的HBV感染者死于肝硬化和肝癌等并發癥。大量科研資料證明宿主免疫系統對HBV感染的慢性化及其進展程度有明顯影響[13]。細胞因子是免疫原或其他刺激劑誘導多種細胞產生的低分子量可溶性蛋白質，可調節固有免疫和適應性免疫功能，參與人體多種重要的生理活動[13]。IL-10主要由Th2細胞和單核巨噬細胞產生，能夠抑制活化的T細胞產生細胞因子，特別是能抑制Th1細胞產生IL-2和IFN-γ等，從而抑制細胞免疫應答；另一方面，IL-10可刺激B細胞分化增殖，促進抗體生成[14]。本研究結果顯示，各組血清IL-10水平從高到低依次為病例組2、病例組3、病例組1、對照組，提示感染HBV后，機體為清除病毒而處于高免疫狀態，IL-10在機體感染HBV后免疫反應中發揮了重要作用。慢性乙肝患者血清IL-10水平高于無癥狀慢性HBV攜帶患者，慢性乙肝肝硬化患者血清IL-10水平低于慢性乙肝患者，原因可能是IL-10水平增高刺激機體IFN生成或增加外源性IFN對HBV的敏感性，一方面阻止HBV感染慢性化進程，減少肝組織局部炎癥細胞的活化、浸潤從而減輕肝細胞損傷、防止肝纖維化；另一方面IL-10分泌提高了機體免疫功能，使患者臨床表現更加明顯。

有學者認為IL-10水平與個人遺傳背景有關，特別是IL-10基因啟動子區的多態性與其水平密切相關。研究[15,16]表明，位于1號染色體上的IL-10基因啟動子區具有高度多態性，一定程度上調控IL-10 mRNA的生成，從而影響血清IL-10水平，最終影響HBV感染后的結局及轉歸。本研究觀察了不同程度HBV感染者IL-10基因啟動子區-592 A/C和-819 C/T多態性，發現自限性HBV感染者IL-10基因啟動子區-819 TT基因型分布頻率高于無癥狀HBV攜帶者、慢性乙肝患者和慢性乙肝肝硬化者，證實了慢性HBV感染后病毒清除能力因人群中不同的遺傳背景而有所差異，-819 TT基因型可能是HBV感染后的保護性因素。各組IL-10基因啟動子區-592 CC基因型頻率與血清IL-10水平分布趨勢一致，即慢性乙肝患者CC基因型頻率最高，與Cheong等[17,18]報道相近，表明-592 CC基因型者IL-10分泌水平更高，可更好地發揮HBV清除作用。但也有學者[7,19]研究顯示，IL-10基因啟動子區-592 A/C的AA、AC、CC基因型在不同程度HBV感染者間的分布差異無統計學意義。

總之，HBV感染是一個復雜的多因素共同作用的過程，其中宿主的免疫狀態是一個關鍵因素。本研究初步揭示了不同程度HBV感染者IL-10基因啟動子區-592 A/C和-819 C/T位點存在多態性，可能與血清IL-10水平有關，繼而影響HBV感染及轉歸；IL-10基因啟動子區-819 C/T位點TT基因型和-592 A/C位點CC基因型可能是河北漢族人群HBV感染及轉歸的保護性因素。但由于不同人群的遺傳背景不同，相關報道結果也不盡一致，為避免因樣本量不足引起的偏倚，我們后續將在不同人種、種族和地區間增大樣本量進一步深入研究。

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(收稿日期：2016-04-19)

河北省衛生廳基金資助項目(20120162)；河北省臨床優秀人才項目(361008)；河北省高校重點學科建設項目資助[冀教高(2013)4號]。

侯志平(E-mail: zhipinghou@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.03.032

R735.9

B

1002-266X(2017)03-0098-03

2016-04-05)

乙型肝炎病毒(HBV)感染是危及全球的公共衛生問題。我國是乙型肝炎(后簡稱乙肝)高發區，HBV表面抗原攜帶率高達10.34%[1]。感染HBV

的個體因環境差異、病毒類型、宿主免疫狀態等不同轉歸也有所差異[2,3]，其中宿主免疫狀態對HBV感染轉歸至關重要。IL-10主要由Th2細胞分泌，屬抑制性細胞因子，在HBV感染慢性化過程中起著重要作用[4,5]。IL-10基因啟動子區-819 C/T和-592 A/C具有單核苷酸多態性(SNP)，且其轉錄活性與血清中IL-10水平相關[6]。但各實驗室對不同人種和民族IL-10基因啟動子區-819 C/T、-592 A/C多態性的報道結果不盡一致[7～9]。為此，本研究觀察了河北省漢族HBV感染者血清IL-10水平變化及IL-10基因啟動子區-819 C/T、-592 A/C的多態性，現報告如下。