高效液相色譜法檢測(cè)丙泊酚及依托咪酯混合液化學(xué)穩(wěn)定性的研究*

廖 勇，游 艷

(三峽大學(xué)仁和醫(yī)院藥學(xué)部，湖北宜昌 443001)

·技術(shù)與方法·

高效液相色譜法檢測(cè)丙泊酚及依托咪酯混合液化學(xué)穩(wěn)定性的研究*

廖 勇，游 艷

(三峽大學(xué)仁和醫(yī)院藥學(xué)部，湖北宜昌 443001)

目的 采用高效液相色譜法(HPLC)體外模擬體內(nèi)環(huán)境條件確定丙泊酚、依托咪酯混合后的新物質(zhì)生成情況。方法 采用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑(250.0 mm×4.6 mm，5 μm)，以磷酸鹽緩沖液-乙腈(調(diào)至pH7.4)作為流動(dòng)相[磷酸鹽緩沖液∶乙腈=35∶65 (V/V)]，設(shè)定柱溫為30 ℃，流速為1.0 mL/min，進(jìn)樣量為10 μL，全波長(zhǎng)下進(jìn)行紫外光譜檢測(cè)(波長(zhǎng)190～800 nm)，通過(guò)對(duì)比標(biāo)準(zhǔn)品及對(duì)照品圖譜確認(rèn)圖譜中是否有新的特征峰。結(jié)果 通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)品圖譜進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，丙泊酚、依托咪酯二者混合品在體外模擬體內(nèi)環(huán)境條件下無(wú)新的特征峰出現(xiàn)，即未生成第3種物質(zhì)。結(jié)論 所建方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)出丙泊酚、依托咪酯混合后無(wú)新物質(zhì)生成。

丙泊酚；依托咪酯；高效液相色譜法；化學(xué)穩(wěn)定性

丙泊酚乳劑(propofol)是目前臨床上普遍用于麻醉誘導(dǎo)、麻醉維持、ICU危重患者鎮(zhèn)靜的一種新型快速、短效靜脈麻醉藥[1-3]。依托咪酯乳劑(etomidate)系非巴比妥類(lèi)靜脈鎮(zhèn)靜藥，也是目前臨床全身麻醉(簡(jiǎn)稱(chēng)全麻)誘導(dǎo)的常用藥物之一[4-5]。兩種藥物均具有起效快、維持時(shí)間短、蘇醒快的特點(diǎn)。然而，丙泊酚有易致心血管功能抑制而降低血壓和減慢心率，明顯抑制呼吸，注射痛發(fā)生率高等不足；依托咪酯乳劑靜脈注射易致肌陣攣，長(zhǎng)時(shí)間應(yīng)用抑制腎上腺皮質(zhì)功能。兩種藥除起效時(shí)間、維持時(shí)間、蘇醒時(shí)間均快外，半衰期亦相似，溶媒都是中長(zhǎng)鏈脂肪酸乳劑[6]。已有文獻(xiàn)報(bào)道，將兩種藥混合后聯(lián)合應(yīng)用于全麻誘導(dǎo)和門(mén)診短小手術(shù)與操作的全麻[7-9]，將兩種藥混合后應(yīng)用，在減少二者用量的同時(shí)也相對(duì)減輕不良反應(yīng)，作用特點(diǎn)得以發(fā)揮。盡管臨床上將兩種藥混合后顯示出許多優(yōu)點(diǎn)，但仍擔(dān)心兩種藥混用后藥物理化性質(zhì)改變或有新物質(zhì)生成。本實(shí)驗(yàn)利用高效液相色譜法初步了解二者體外混合后的理化性質(zhì)變化，為兩種藥混用應(yīng)用及建立合理易行的全麻用藥方法提供藥學(xué)實(shí)驗(yàn)論據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器設(shè)備 高效液相色譜儀(Dionex Ultimate 3000)；ODS色譜柱(YMC-Pack ODS 250.0 mm×4.6 mm,5 μm)； 1 mL無(wú)菌注射器；過(guò)濾器(d=5 μm)；自動(dòng)進(jìn)樣器；恒溫三用水浴鍋(金壇市醫(yī)療儀器廠)；漩渦混合儀(上海滬西分析儀器廠)；電子分析天平(Mettler Toledo公司)。

1.1.2 藥品與試劑 丙泊酚對(duì)照品(中國(guó)藥檢所，批號(hào)100806，純度為99.8%)，依托咪酯對(duì)照品(中國(guó)藥檢所，批號(hào)101132，純度為99.8%)，乙腈(色譜純)，甲醇(色譜純)，雙蒸水，85%的磷酸溶液，磷酸鹽緩沖液。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 ODS色譜柱為C18柱(250.0 mm×4.6 mm,5 μm)，流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖液∶乙腈=35∶65(V/V)；pH7.4；柱溫即室溫；流速為1.0 mL/min；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：全波長(zhǎng)(190～800 nm)；進(jìn)樣量為10 μL。

1.2.2 溶液的制備

1.2.2.1 磷酸鹽緩沖液的制備 精確稱(chēng)取磷酸二氫鈉水合物2.76 g溶解于900 mL水中，待其溶解完全后定容至1 000 mL，用85%的磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0，0.22 μm濾紙抽濾后4 ℃冰箱保存待用。

1.2.2.2 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備 丙泊酚對(duì)照品：精確稱(chēng)取該品100 mg置于100 mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解至刻度，配制成濃度為1 mg/mL的丙泊酚溶液，密封后4 ℃冰箱保存，使用前放至室溫。依托咪酯對(duì)照品：精確稱(chēng)取該品100 mg置于100 mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解至刻度，配制成濃度成1 mg/mL的依托咪酯溶液，密封后4 ℃冰箱保存，使用前放至室溫。

1.2.2.3 供試品溶液的制備 丙泊酚和依托咪酯混合品(10∶1)：精確量取20 mL丙泊酚及2 mL依托咪酯充分混合均勻，即配制成10∶1的混合溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2.3 專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn) 取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液，按1.2.1方法進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。

1.2.4 精密度實(shí)驗(yàn) 精密量取1.2.2.3方法制得的供試品溶液10 μL，按照1.2.1的色譜洗脫條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定丙泊酚和依托咪酯的峰面積。

1.2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取1.2.2.3項(xiàng)下方法制備的供試品溶液6份，分別吸取10 μL進(jìn)樣，測(cè)定相應(yīng)峰面積。

1.2.6 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 分別精密配置不同濃度比例的丙泊酚及依托咪酯混合液[16.0∶1.6，20∶2.0，24.0∶2.4(mg/mg)]各3份，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，按上述色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。

1.2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 準(zhǔn)備丙泊酚和依托咪酯供試品液5份，用磷酸調(diào)節(jié)pH至7.35～7.45，分別置于37 ℃恒溫水浴0、4、8、12、24 h，水浴完成后分別進(jìn)樣10 μL，并分別記錄色譜圖。

2 結(jié) 果

2.1 專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn) 輔料不干擾測(cè)定，供試品溶液的主峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)品一致；丙泊酚及依托咪酯標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間分別為7.657 min和3.617 min，見(jiàn)圖1。

A:丙泊酚標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖；B：依托咪酯標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖；C：供試品色譜圖。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)品高效液相色譜圖

2.2 精密度實(shí)驗(yàn) 丙泊酚峰面積的標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation，RSD)為0.42%，依托咪酯峰面積的RSD為0.34%，表明該實(shí)驗(yàn)儀器的精密度良好。

2.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 根據(jù)測(cè)定相應(yīng)峰面積，按外標(biāo)法測(cè)定標(biāo)示含量，計(jì)算得丙泊酚平均值標(biāo)示量為99.50%，RSD為0.50%，依托咪酯平均值標(biāo)示量為99.80%，RSD為0.20%。

2.4 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 計(jì)算回收率，結(jié)果表明丙泊酚、依托咪酯平均加樣回收率分別為99.52%和98.94%，RSD分別為0.48%和1.23%，見(jiàn)表1。

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 根據(jù)記錄色譜圖可知，在不同混合時(shí)間條件下、全波長(zhǎng)檢測(cè)范圍內(nèi)與對(duì)照品相比，二者的保留時(shí)間幾無(wú)變化，也無(wú)新的特征峰出現(xiàn)，表示在此混合過(guò)程中無(wú)新物質(zhì)生成；丙泊酚峰面積的RSD為0.24%，依托咪酯峰面積的RSD為0.58%，見(jiàn)圖2。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=9)

A:丙泊酚和依托咪酯混合0 h；B：丙泊酚和依托咪酯混合4 h；C：丙泊酚和依托咪酯混合8 h；D：丙泊酚和依托咪酯混合12 h；E：丙泊酚和依托咪酯混合24 h。

圖2 不同混合時(shí)間下的高效液相色譜圖

3 討 論

丙泊酚注射液麻醉誘導(dǎo)起效快[10]、蘇醒迅速且功能恢復(fù)完善[11]，術(shù)后惡心嘔吐發(fā)生率低；且能抑制咽喉反射，有利于插管，很少發(fā)生喉痙攣。但其易致血壓劇烈下降，明顯抑制呼吸，注射痛發(fā)生率高[12-13]。依托咪酯注射液是麻醉誘導(dǎo)常用的藥物之一[14-15]；但一次性劑量可使腎上腺皮質(zhì)對(duì)緊張刺激的反應(yīng)明顯減慢約4～6 h；持續(xù)使用本藥可能出現(xiàn)暫時(shí)性腎上腺皮質(zhì)功能低下。沒(méi)有接受過(guò)適當(dāng)前驅(qū)給藥的患者，使用單劑量后可能出現(xiàn)肌陣攣，導(dǎo)致惡心、嘔吐。Saricaoglu等[7]報(bào)道將兩種藥混合后在全麻誘導(dǎo)中的應(yīng)用，研究結(jié)果顯示二者混合后用于全麻誘導(dǎo)有有其明顯的優(yōu)勢(shì)，表現(xiàn)為血流動(dòng)力學(xué)比單純使用丙泊酚更穩(wěn)定；注射痛和肌陣攣的發(fā)生率降低；達(dá)到相同麻醉深度所需要的時(shí)間更短。鑒于二者藥理學(xué)作用互補(bǔ)，藥動(dòng)學(xué)特點(diǎn)相似，兩種藥的溶媒都是中長(zhǎng)鏈飽和脂肪乳。本文將二者體外模擬體內(nèi)條件進(jìn)行混合后，采用全波長(zhǎng)高效液相色譜法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)不同混合時(shí)間下的保留時(shí)間無(wú)明顯差異，說(shuō)明二者混合后無(wú)第3種物質(zhì)生成。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明丙泊酚注射液和依托咪酯注射液模擬條件下的混合品未發(fā)生化學(xué)變化。本實(shí)驗(yàn)建立了簡(jiǎn)單、快速的高效液相色譜法，為兩藥混合應(yīng)用或制成復(fù)方制劑、建立合理易行的全麻用藥方法提供藥學(xué)實(shí)驗(yàn)論據(jù)。

[1]Patten D,Foxon GR,Martin KF,et al.An electrophysiological study of the effects of propofol on native neuronal ligand-gated ion channels[J].Clin Exp Pharmacol Physiol,2001,28(5/6):451-458.

[2]徐學(xué)武，許文秀，王寶寧，等．丙泊酚復(fù)合不同濃度利多卡因預(yù)防注射痛的臨床研究[J]．臨床麻醉學(xué)雜志，2012，28(4)：378-380．

[3]王洪，涂生芬，柏林，等．不同劑量丙泊酚對(duì)兒童麻醉深度和應(yīng)激反應(yīng)的影響[J]．重慶醫(yī)學(xué)，2012，41(4)：327-329．

[4]周金鋒，王朋，類(lèi)維富．依托咪酯用于腹部手術(shù)患者全身麻醉的臨床觀察[J]．臨床麻醉學(xué)雜志，2011，27(4)：385-387．

[5]Weiss-Bloom LJ,Reich DL.Haemodynamic responses to tracheal intubation following etomidate and fentanyl for anaesthetic induction[J].Can J Anaesth,1992,39(8):780-785.

[6]劉楨干．乳劑依托咪酯對(duì)老年患者麻醉中心血管穩(wěn)定性的臨床觀察[J]．山西醫(yī)藥雜志，2007，36(9)：846-847．

[7]Saricaoglu F,Uzun S,Arun O,et al.A clinical comparison of etomidate-lipuro,propofol and admixture at induction[J].Saudi J Anaesth,2011,5(1):62-66.

[8]林高翔，蔣奕紅，王華，等．靶控輸注依托咪酯對(duì)圍術(shù)期腎上腺皮質(zhì)功能的影響[J]．醫(yī)學(xué)研究雜志，2008，37(12)：38-41．

[9]鄒學(xué)軍，簡(jiǎn)道林，羅興均，等．依托咪酯復(fù)合丙泊酚用于無(wú)痛人工流產(chǎn)術(shù)[J]．臨床麻醉學(xué)雜志，2013，29(11)：1122-1123．

[10]周發(fā)春，徐昉．ICU機(jī)械通氣病人的丙泊酚鎮(zhèn)靜治療[J]．重慶醫(yī)學(xué)，2005，34(4)：578-579．

[11]劉新霞．芬太尼、瑞芬太尼復(fù)合丙泊酚用于人工流產(chǎn)麻醉的臨床比較與分析[J]．中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2011，6(36)：138-139．

[12]Schaub E,Kern C,Landau R.Pain on injection:a double-blind comparison of propofol with lidocaine pretreatment versus propofol formulated with long- and medium-chain triglycerides[J].Anesth Analg,2004,99(6):1699-1702.

[13]Canbay O,Celebi N,Arun O,et al.Efficacy of intravenous acetaminophen and lidocaine on propofol injection pain[J].Br J Anaesth,2008,100(1):95-98.

[14]Mayer M,Doenicke A,Nebauer AE,et al.Propofol and etomidate-Lipuro for induction of general anesthesia.Hemodynamics,vascular compatibility,subjective findings and postoperative nausea[J].Anaesthesist,1996,45(11):1082-1084.

[15]朱嬋，顧明紅，李浪平，等．依托咪酯復(fù)合丙泊酚在老年患者無(wú)痛胃鏡檢查的應(yīng)用[J]．蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，37(6)：702-704．

HPLC for determinating the pharmacy changes of propofol and etomidate solution after mixing*

LiaoYong，YouYan

(DepartmentofPharmacy,RenheHospital,ThreeGorgesUniversity,Yichang,Hubai443001,China)

Objective To establish a high performance liquid chromatography (HPLC) method for determinating the related substances of propofol and etomidate after mixing.Methods With octadecylsilane chemically bonded silica as the filler (250 mm×4.6 mm,5 μm),the mixture of phosphate buffer-acetonitrile(phosphate buffer:acetonitrile =35:65(V/V)) was acted as the mobile phase,and adjusting PH to 7.4.The UV detection wavelength:190-800 nm.The column temperature:30 ℃.The flow rate:1.0 mL/min.The injection volume:10 μL.The comparison result of standard substance and reference substance were used to confirm whether there was a new sabstance in the spectrum.Results There was no new substance generated.Conclusion There was no new substance generated of propofol and etomidate mixture by this simple,rapid and accurate method.

propfol；etomidate;HPLC;chemical stability

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.03.027

湖北省宜昌市科技局計(jì)劃項(xiàng)目(A13301-40)。 作者簡(jiǎn)介：廖勇(1972-)，副主任藥師，本科，主要從事臨床藥學(xué)方面研究。

R917

A

1671-8348(2017)03-0373-03

2016-07-22

2016-10-10)