分泌型卷曲相關蛋白5與2型糖尿病大血管病變相關性研究

李蘭芳 曾姣娥

(1.長江大學醫學院臨床醫學系，湖北 荊州 434020；2.荊州市中心醫院內分泌科，湖北 荊州 434020)

分泌型卷曲相關蛋白5與2型糖尿病大血管病變相關性研究

李蘭芳1曾姣娥2

(1.長江大學醫學院臨床醫學系，湖北 荊州 434020；2.荊州市中心醫院內分泌科，湖北 荊州 434020)

目的 觀察2型糖尿病大血管病變患者血清分泌型卷曲相關蛋白5(Sfrp5)、白介素-10(IL-10)水平的變化，探討其在T2DM大血管病變中的臨床意義。方法 150例T2DM患者分為實驗組和對照組，實驗組為T2DM合并大血管病變(IMT≥0.90 mm)患者100例；對照組為T2DM無大血管病變(IMT<0.90 mm)患者50例。另選取50例正常健康人作為正常組。分別檢測各組血清Sfrp5、IL-10含量，同時測定各組空腹血糖(FBG)、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、糖化血紅蛋白(HbA1c)等指標。結果 與正常組相比，實驗組、對照組血清Sfrp5、IL-10水平顯著降低(P<0.01，P<0.05)，且實驗組低于對照組，差異具有統計學意義(P<0.05)。相關分析顯示，Sfrp5、IL-10分別與TC、TG、LDL-C、FBG、HBA1c、糖尿病病程、BMI呈不同程度負相關(r=-0.336、-0.256、-0.293、-0.455、-0.653、-0.667、-0.72，P均<0.01；r=-0.219、-0.242、-0.208、-0.417、-0.543、-0.305、-0.392，P均<0.01 )，而Sfrp5、IL-10之間呈正相關(r=0.347P<0.01)。結論 T2DM大血管病變患者的血清Sfrp5、IL-10水平降低，并與T2DM大血管病變呈負相關。檢測Sfrp5、IL-10水平可作為診斷T2DM大血管病變的新指標。

2型糖尿病大血管病變 ； 分泌型卷曲相關蛋白5； 白介素-10

2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大血管病變主要是指腦動脈、頸動脈、冠狀動脈、下肢動脈等大血管粥樣硬化，是T2DM致死、致殘的主要原因。其病理學變化基礎是動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)。AS是多種因素參與的慢性炎癥反應過程。分泌型卷曲相關蛋白5(secreted frizzled related protein 5,Sfrp5)是Ouchi等[1]于2010年發現的一種抗炎脂肪因子, 作為wnt信號通路的抑制劑，可通過競爭結合wnt信號胞外配體wnt5α蛋白，調節脂肪細胞分化、減輕肥胖、改善脂代謝紊亂及胰島素抵抗、抵抗炎癥反應等起到抗AS的作用。近年來，白細胞介素-10(interleukin-10,IL-10)被認為是一種抗炎細胞因子，在粥樣硬化病變形成和穩定方面有重要作用。本研究通過觀察T2DM大血管病變患者血清中Sfrp5和IL-10水平變化，探討其在T2DM大血管病變中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選擇2015年3月至2015年7月于華中科技大學同濟醫學院附屬荊州醫院內分泌科門診及住院部收治的T2DM患者150例，其中男性75例，女性75例；年齡25～70歲，平均(53.98±10.27)歲。根據IMT檢測結果分為兩組：實驗組為T2DM合并大血管病變(IMT≥0.90 mm)100例，年齡26～70歲，平均(56.30±9.16)歲；對照組為T2DM無大血管病變(IMT<0.90 mm)50例，年齡25～70歲，平均(49.34±10.88)歲。納入標準：(1)符合2型糖尿病診斷標準(按1999年WHO專家委員會公布的糖尿病診斷和分型標準)；(2)年齡25～70歲，性別不限；(3)病程5～20年；(4)糖化血紅蛋白7%～11%；(5)BMI20～30kg/m2；(6)無吸煙史。排除標準： 1型糖尿病及繼發性糖尿病；糖尿病急性并發癥；育齡期或哺乳期婦女；嚴重心肝腎功能不全；精神行為障礙；有腫瘤、器官移植及獲得性免疫缺陷綜合征病史；糖尿病及大血管病變外的其它潛在炎性反應相關因素：各種急、慢性感染。另選取來自華中科技大學同濟醫學院附屬荊州醫院體檢中心健康體檢者50名作為正常組，性別不限，年齡25～63歲，平均(45.12±8.53)歲，無糖尿病、高血壓病、冠心病等其它慢性病史和吸煙史，IMT檢測正常。實驗組、對照組、正常組平均年齡差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 指標檢測

1.2.1 一般指標檢測 固定專人采用同一測量工具測量身高、體質量,并計算體質量指數BMI(BMI=體質量/身高2)，根據2000年 WHO 推薦的亞洲成年人肥胖診斷標準，BMI≥25為超重，BMI≥28為肥胖，BMI<25為正常。研究對象禁食8～12 h，于次日清晨抽肘靜脈非抗凝血5 mL。標本送我院檢驗科應用全自動生化分析儀測定FBG、HbAlC、TC、TG、LDL-C水平，其中TC、TG、LDL-C采用酶法測定，HbA1C采用高效液相色譜法測定。

1.2.2 Sfrp5、IL-10指標檢測 研究對象禁食8～12 h，于次日清晨抽肘靜脈5 mL放入常規試管靜置1 h，3 000r/min離心10 min后取血清2 mL，測定Sfrp5、IL-10含量。Sfrp5采用ELISA法測定(美國TSZ公司試劑盒，日本西門子BEP3全自動酶標儀)，IL-10采用電化學發光法(美國TSZ公司試劑盒，羅氏電化學發光分析儀 cobas e601)。

1.2.3 影像學指標檢測 采用美國西門子S2000型彩色多普勒超聲儀行頸動脈超聲檢查，探頭頻率8.0 MHz，所有入選人員均由同一超聲檢查醫師檢查。受檢者取平臥頭仰位，頭偏向對側，充分暴露受檢者頸動脈部位。對受檢者雙側頸動脈進行測量，縱向觀察包括左右兩側頸總動脈主干段(分叉前2 cm處)、頸動脈分叉部及頸內動脈(分叉前l cm處)；動脈后壁表現為“雙線型”圖像，內線為內膜與管腔的分界線，外線為中外膜分界線，其間距離即為內膜中層厚度。左右兩側共6點的平均值作為頸動脈內膜中層厚度(carotid intima-media thickness IMT)，結果進入數據分析。根據2010年《中國高血壓防治指南》，將數值≥0.90 mm診斷為IMT增厚，≥1.3 mm定義為斑塊形成，<0.90 mm為正常，測量3次，取平均值。

1.3 統計學處理

2 結 果

2.1 一般指標比較

實驗組、對照組FBG、TG、TC、LDL-C、HbAlc水平均高于正常組(P<0．01)；實驗組FBG水平高于對照組(P<0.01)，實驗組與對照組相比TG、TG、TC、HbAlc、BMI水平差異無統計學意義(P>0.05)，結果見表1。三組實驗對象中，超重或肥胖患者血清Sfrp5水平低于正常患者血清Sfrp5水平(P<0.01)，結果見表2。

表1 各組一般指標比較

注：與正常組比較，aP<0.01；與對照組相比，bP>0.05，cP<0.01。

表2 BMI不同受試者Sfrp5、IL-10水平比較

2.2 三組Sfrp5、IL-10水平比較

實驗組血清Sfrp5、IL-10水平均低于正常組(P<0．01)，對照組血清Sfrp5、IL-10水平均低于正常組(P<0．05),實驗組血清Sfrp5、IL-10水平均低于對照組(P<0.01)。見表3。

表3 三組Sfrp5、IL-10水平比較

注：與正常組比較，aP<0.05；與正常組比較，bP<0.01；與對照組比較，cP<0.01。

2.3 相關性分析

數據整理后發現，Sfrp5水平與TC、TG、LDL-C、FBG、HBA1c、糖尿病病程、BMI呈不同程度負相關(r值分別為-0.336、-0.256、-0.293、-0.455、-0.653、-0.667、-0.72，P均<0.01)；IL-10與TC、TG、LDL-C、FBG、HBA1c、糖尿病病程、BMI呈不同程度負相關(r值分別為-0.219、-0.242、-0.208、-0.417、-0.543、-0.305、-0.392，P均<0.01)；Sfrp5與IL-10呈正相關(r=0.347，P<0.01)。

3 討 論

T2DM大血管病變是多重因素相互作用的結果。T2DM患者的肥胖、糖脂代謝異常、胰島素抵抗、炎癥反應等均是T2DM大血管病變的促發因素，其中通過調節因子增強炎癥信號表達而觸發的血管炎癥反應是引起大血管病的關鍵環節。

Sfrp5是繼脂聯素后被發現的又一重要的具有抗炎作用的脂肪因子，其生物學作用主要是通過與wnt相互作用或與Frizzled受體競爭結合wnt蛋白形成無功能的復合體實現的[2-3]。研究顯示，Sfrp5在肥胖動物模型脂肪組織中表達水平下調[1]。肥胖患者體質量減輕后血清Sfrp5含量明顯升高[4]。Lv等[5]發現，高胰島素水平能抑制Sfrp5表達。本研究結果顯示，在實驗組和對照組中，BMI≥25患者血清Sfrp5水平明顯低于BMI<25患者血清Sfrp5水平(P<0.01)，說明肥胖患者血清Sfrp5水平是降低的，這與前人研究結果一致。同時，與正常組相比，實驗組、對照組血清Sfrp5水平均降低(P<0.01，P<0．05)，說明2型糖尿病患者的胰島素抵抗能抑制Sfrp5表達，亦與前人研究結果一致。本研究還發現，與對照組相比，實驗組血清Sfrp5水平降低(P<0．05)，進一步相關性分析顯示Sfrp5與糖尿病病程、BMI、FBG、HbAlC、高脂血癥呈不同程度負相關，說明Sfrp5的變化與糖尿病大血管病變相關。它可能是通過肥胖、胰島素抵抗、高胰島素血癥、脂代謝紊亂、炎癥反應等機制引起或加重糖尿病大血管病變。推測其可能的分子學機制是Sfrp5拮抗wnt5參與的Wnt/Ca2+/pkC信號通路的激活，降低炎癥因子的表達，減輕血管內皮細胞的損傷而發揮抗AS的作用[6]。

IL-10是一類由活化的單核細胞、T2型T細胞和B細胞等分泌的多功能高活性蛋白質多肽分子，是細胞因子網絡的樞紐之一。研究[7]已證實IL-10在人類AS斑塊中定位及表達，且能有效阻斷AS的發生發展。它能從以下幾個方面調節和控制炎癥反應, 減輕炎癥損傷, 從而發揮對血管內皮和心臟的保護作用:(1)抑制單核細胞、巨噬細胞等炎癥細胞產生IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ、MCP-1等促炎細胞因子[8]；(2)通過下調黏附分子CD18和CD62L表達，從而抑制單核黏附血管內皮細胞[9]；(3)下調IL-6誘發的前凝血劑活性劑，抑制外周血單核細胞組織因子(TF)的表達及活性, 從而防止血栓形成[10]；(4)抑制巨噬細胞分泌的基質金屬蛋白酶(MMPS)9活性, 增加基質金屬蛋白酶組織抑制劑1(T1MP-1)水平,起到穩定斑塊的作用[9]。本研究結果顯示，與正常組相比，實驗組、對照組血清IL-10水平顯著降低(P<0.01，P<0.05)，且實驗組低于對照組(P<0.05)；相關分析顯示IL-10與TC、TG、LDL-C、FBG、HBA1c、糖尿病病程、BMI呈不同程度負相關。說明血清IL-10水平與T2DM大血管病變的發生密切相關，而Sfrp5與IL-10之間呈正相關。

綜上所述，Sfrp5、IL-10在T2DM大血管病變的形成過程中具有重要作用，均參與了T2DM大血管病變的發生、發展，T2DM患者血清Sfrp5、IL-10水平的降低促進了T2DM大血管病變的進程。因而聯合測定Sfrp5、IL-10有可能成為預測T2DM大血管病變的新指標，為臨床有效防治T2DM患者的大血管病變提供依據；但還需大樣本進一步研究證實。

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[5] Lv C,Jiang Y,Wang H,et al.Sfrp5 expression and secretion in adipocytes are up-regulated during the differentiation and are negatively correlated with insulin resistance[J].Cell Biol Int,2012,36(9):851-855.

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Correlative research between Sfrp5 and macroangiopathy in type 2 diabetes

LiLanfang1,ZengJiaoe2.

1.ClinicalMedicalCollege,YangtzeUniversity,Jingzhou434020,China. 2.DepartmentofEndocrinology,JingzhouCentralHospital,Jingzhou434020,China.

Objective To investigate the expression levels of serum Secreted frizzled related protein 5(Sfrp5), interleukin-10 (IL-10) in type 2 diabetes mellitus (T2DM) with macroangiopathy, and to carry out clinical significance. Methods 150 patients with type 2 diabetes were selected. According to carotid intima-media thickness (IMT)examination, which were divided into xperimental group (IMT≥0.90mm)100 cases and control group(IMT<0.90mm)50 cases. Other 50 normal persons were normal group. The levels of Sfrp5, IL-10, fasting plasma glucose (FBG), cholesterol (TC), triglycerides (TG), Low density lipoprotein (LDL), glycated hemoglobin (HbA1c) were investigated. Statistical comparison was performed by single-factor analysis of variance and linear correlation analysis. Results The levels of serum Sfrp5 and IL-10 in xperimental group and control group were significantly lower than those of control group(P<0.01,P<0.05). The levels of serum Sfrp5 and IL-10 in xperimental group were significantly lower than those of normal group (P<0.01). Correlation analysis showed that plasma levels of sfrp5 and IL-10 were negatively correlated with TC, TG, LDL-C, FBG, HBA1c, the courses of T2DM and BMI(r=-0.336, -0.256, -0.293, -0.455, -0.653, -0.667, -0.72，P<0.01；r=-0.219, -0.242, -0.208, -0.417, -0.543, -0.305, -0.392，P<0.01). Sfrp5 was positively correlated with IL-10(r=0.347P<0.01). Conclusion The levels of serum Sfrp5 and IL-10 in T2DM macroangiopathy are significantly decreased, and they are negatively correlated with T2DM macroangiopathy. The measurement of them may be a new indicator of T2DM macroangiopathy, the therapy foucs on these two cytokines can provide new clinical evidence for the prevation and treatment of macroangiopathy in T2DM.

T2DM macroangiopathy; Secreted frizzled related protein 5; Interleukin-10

R587.1

A

1000-744X(2016)02-0149-04

2015-11-13)

△通信作者,E-mail:nfmzeng@163.com