丹紅注射液對糖尿病腎病患者血小板CD62p、PAC-1表達及腎功能的影響

王曉蕾，孟莉莉，吳煒，姜明德，李明霞，任衛(wèi)東

(1張家口市下花園區(qū)煤礦醫(yī)院，河北張家口075000；2河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院)

丹紅注射液對糖尿病腎病患者血小板CD62p、PAC-1表達及腎功能的影響

王曉蕾1，孟莉莉1，吳煒1，姜明德1，李明霞2，任衛(wèi)東2

(1張家口市下花園區(qū)煤礦醫(yī)院，河北張家口075000；2河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院)

目的 探討丹紅注射液對糖尿病腎病(DN)患者血小板活化依賴性顆粒表面膜蛋白(CD62p)和血小板激活復(fù)合物-1(PAC-1)表達的影響，探討丹紅注射液改善DN患者腎功能的作用機制。方法 選取病程10年以上的DN患者95例，隨機分為觀察組50例、對照組45例。對照組給予常規(guī)降糖、降壓、降脂藥物治療，觀察組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上應(yīng)用丹紅注射液30 mL溶入生理鹽水250 mL靜脈滴注治療，1次/d。治療2周后評價兩組臨床療效。治療前后抽取兩組晨起空腹靜脈血，檢測空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2 hPG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、BUN及Cr水平，行流式細胞術(shù)檢測血小板CD62p、PAC-1的表達。治療前后留取24 h尿液，采用免疫法行24 h尿白蛋白定量檢測尿蛋白排泄率(UAER)。結(jié)果 對照組、觀察組總有效率分別為64.4%、90.0%，治療組總有效率高于對照組(P<0.01)。與治療前比較，對照組治療后FPG、2 hPG、BUN及Cr水平均降低(P<0.05或0.01)，UAER增高(P<0.05)；觀察組治療后FPG、2 hPG、HbA1c、BUN及Cr水平均降低(P<0.05或0.01)，UAER增高(P<0.05)。與對照組治療后比較，觀察組治療后HbA1c、BUN及Cr水平均降低，UAER增高(P均<0.05)。與治療前比較，觀察組治療后血小板CD62p、PAC-1陽性表達率均降低(P均<0.05)。與對照組治療后比較，觀察組治療后血小板CD62p、PAC-1陽性表達率均降低(P均<0.05)。結(jié)論 丹紅注射液可明顯抑制DN患者血小板CD62p、PAC-1的表達，可能是其改善DN患者腎功能的機制之一。

糖尿病腎??；丹紅注射液；血小板；活化依賴性顆粒表面膜蛋白；血小板激活復(fù)合物-1；腎功能

糖尿病腎病(DN)是糖尿病常見的慢性微血管并發(fā)癥。據(jù)統(tǒng)計，20%的2型糖尿病患者合并DN，極易進展為慢性腎功能衰竭等終末期腎病，甚至導(dǎo)致患者死亡[1,2]。DN的發(fā)生、發(fā)展除與遺傳因素、糖代謝異常、氧化應(yīng)激等多種因素有關(guān)，血小板活化引起的微血栓形成也是重要因素之一[3]。近年研究發(fā)現(xiàn)，血小板活化依賴性顆粒表面膜蛋白(CD62p)和血小板激活復(fù)合物-1(PAC-1)在DN發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用。CD62p是選擇素家族黏附分子，定位于血小板-?顆粒膜表面，血小板活化后，其質(zhì)膜上的糖蛋白發(fā)生分子構(gòu)象改變，促進血小板間的黏附及聚集[4]。PAC-1是GPⅡb/Ⅲa特異性單克隆抗體，可與活化血小板上的GPⅡb/Ⅱa特異性結(jié)合，是反映血小板活化的重要早期標志物[5]。丹紅注射液主要包含丹參和紅花黃素，丹參有較強的抗血小板凝集和促進纖維蛋白溶解作用，可有效改善微循環(huán)；紅花黃素能抑制血小板黏附和凝集，改善血液黏稠度，減少組織缺血，抑制DN的進一步發(fā)展。2014年12月～2015年12月，我們對DN患者應(yīng)用丹紅注射液治療，觀察對患者血糖、腎功能及血小板CD62p、PAC-1表達的影響，探討丹紅注射液改善DN患者腎功能的作用機制。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取同期河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院、張家口市下花園區(qū)煤礦醫(yī)院住院的病程10年以上的DN患者95例，男55例、女40例，年齡(55.0±7.8)歲，糖尿病病程(15.0±4.6)年，伴高血壓病(1～2級)、高脂血癥，均符合2006年WHO制定的糖尿病診斷標準：空腹血糖(FPG)均>7.0 mmol/L，葡萄糖耐量試驗(OGTT)試驗餐后2 h血糖(2 hPG)≥11.1 mmol/L。均符合2007年中華中醫(yī)藥學(xué)會腎病分會制定的DN診斷標準[6]：6個月內(nèi)至少連續(xù)兩次以上尿蛋白排泄率(UAER)維持在20～200 μg/min，并排除因其他原發(fā)性腎臟病、心力衰竭、腫瘤等引起的蛋白尿排泄增加因素。排除標準：合并慢性心力衰竭、心肌梗死、急性腦血管病、嚴重肝功能異常、尿毒癥、庫欣綜合征、惡性腫瘤等患者。將患者隨機分為觀察組50例、對照組45例，兩組一般資料有可比性。本研究經(jīng)我院倫理委員會批準，患者均知情同意。

1.2 治療方法 對照組給予常規(guī)藥物治療，包括應(yīng)用二甲雙胍降糖，應(yīng)用硝苯地平、依那普利等降壓，應(yīng)用阿托伐他汀等降脂治療。觀察組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上應(yīng)用丹紅注射液30 mL溶入生理鹽水250 mL靜脈滴注，1次/d。兩組均治療2周。

1.3 臨床療效評價 治療后參照《中藥臨床研究的指導(dǎo)原則》[8]評價臨床療效。顯效為臨床癥狀明顯改善，24 h尿蛋白下降≥70%；有效為臨床癥狀有改善，24 h尿蛋白下降30%～70%；無效為癥狀無改善，24 h尿蛋白下降≤30%。以顯效+有效計總有效率。

1.4 血糖及腎功能指標檢測 治療前后抽取兩組晨起空腹靜脈血3 mL，肝素抗凝，3 000 r/min離心后檢測血FBG、2 hPG、糖化血紅蛋白(HbA1c)、BUN及Cr水平。

1.5 血小板CD62p、PAC-1表達檢測 治療前后抽取兩組空腹靜脈血3 mL，置于2%EDTA抗凝試管，行流式細胞術(shù)檢測血小板CD62p、PAC-1的陽性表達率。

1.6 24 h尿白蛋白定量檢測 治療前后留取24 h尿液，采用免疫法行24 h尿白蛋白定量檢測UAER。

2 結(jié)果

2.1 兩組臨床療效比較 對照組顯效12例、有效17例、無效16例、總有效率64.4%(29/45)，觀察組分別為19、26、5例及90.0%(45/50)，治療組總有效率高于對照組(P<0.01)。

2.2 兩組治療前后血糖、腎功能指標比較 與治療前比較，對照組治療后FPG、2hPG、BUN及Cr水平均降低(P<0.05或0.01)，UAER增高(P<0.05)；觀察組治療后FPG、2hPG、HbA1c、BUN及Cr水平均降低(P<0.05或0.01)，UAER增高(P<0.05)。與對照組治療后比較，觀察組治療后HbA1c、BUN及Cr水平均降低，UAER增高(P均<0.05)。見表1。

2.3 兩組治療前后血小板CD62p、PAC-1表達比較 與治療前比較，觀察組治療后血小板CD62p、PAC-1陽性表達率均降低(P均<0.05)。與對照組治療后比較，觀察組治療后血小板CD62p、PAC-1陽性表達率均降低(P均<0.05)。見表1。

表1 兩組治療前后血糖、腎功能指標及血小板CD62p、PAC-1表達比較

注：與同組治療前比較，#P<0.05，△P<0.01；與對照組治療后比較，*P<0.05。

3 討論

近年來，DN的發(fā)病率和患病率逐年升高，且有年輕化趨勢。據(jù)統(tǒng)計，2012年在美國透析患者中1/3的原發(fā)病是糖尿病，我國糖尿病患者中因糖尿病引起的終末期腎病、慢性腎衰竭的比例也逐年提高[7]。在DN的發(fā)展過程中，一旦出現(xiàn)腎功能損害，發(fā)生持續(xù)性蛋白尿和腎小球濾過率降低，則病情難以逆轉(zhuǎn)。因而，及早干預(yù)治療對于抑制DN進展、改善腎功能具有非常重要的意義。

丹紅注射液內(nèi)含丹參和紅花等提取物，有活血化瘀、通絡(luò)止痛之功效。丹參有肝素樣作用，能抑制血小板聚集，激活纖溶，抗微血栓形成，促進血管內(nèi)皮細胞修復(fù)；能糾正脂代謝紊亂，降低內(nèi)皮素水平，升高NO含量，有效改善血液流變學(xué)指標[8]。紅花內(nèi)含紅花黃素，能通過抑制由二磷酸腺苷(ADP)誘導(dǎo)的血小板聚集，抑制凝血；通過增強纖溶酶的活性促進纖維蛋白原溶解而發(fā)揮抗血栓的功效[9]。研究顯示，丹紅注射液可通過抑制核因子κB(NF-κB)、下調(diào)TNF-α、IL-6等炎性因子減緩DN的進展，從而保護腎臟功能。丹紅注射液也可通過降低DN患者血漿血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)水平，緩解腎血管張力，增加腎血流量，減少尿白蛋白排泄率，延緩DN病程的進展[10]。本研究發(fā)現(xiàn)，與對照組治療后比較，觀察組治療后HbA1c、BUN及Cr水平均降低，UAER增高，提示在常規(guī)降糖治療基礎(chǔ)上，給予丹紅注射液治療能更有效地控制血糖、改善腎功能，抑制DN的進一步發(fā)展。

CD62p系選擇素家族黏附分子重要成員，定位于血小板α顆粒和血管內(nèi)皮細胞中。正常情況下，CD62p僅少量表達于血小板，當(dāng)長期處于高血糖狀態(tài)時，CD62p可快速、大量、穩(wěn)定地表達在血小板膜表面，通過凝集素等細胞表面糖復(fù)合物相互作用，使細胞黏附力增強，介導(dǎo)活化的內(nèi)皮細胞與中性粒細胞、單核細胞亞群等的黏附，參與血栓形成和炎癥反應(yīng)[11]。PAC-1是血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受體，是Ca2+依賴性異構(gòu)二聚體。正常情況下PAC-1與配體結(jié)合力較低，在高血糖刺激下，血小板活化，PAC-1在質(zhì)膜上表達增加，構(gòu)象發(fā)生改變，與纖維蛋白原及相應(yīng)配體親和力增加，誘導(dǎo)促血小板黏附及相互聚集，促進血栓形成，因而二者表達增加成為血小板活化的早期特異性標志物[12]。李穎等[11]研究發(fā)現(xiàn)，血清細胞黏附分子、CD62P、PAC-1在尿蛋白正常、微量蛋白尿、高量蛋白尿的糖尿病患者中的表達依次升高，證實血清細胞黏附分子、CD62P、PAC-1與DN的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。李云婷等[13]研究發(fā)現(xiàn)，早期DN患者血清CD62P、PAC-1表達高于單純糖尿病患者，而單純糖尿病患者則高于健康人群，證實CD62P、PAC-1可早期預(yù)測糖尿病患者腎臟微血管病變的發(fā)生、發(fā)展，認為二者可成為糖尿病早期腎病微血管病變的診斷及治療靶點。本研究發(fā)現(xiàn)，與對照組治療后比較，觀察組治療后血小板CD62p、PAC-1陽性表達率均降低，提示丹紅注射液能明顯抑制血小板活化，可能與其改善腎功能、抑制DN進一步發(fā)展有關(guān)。

總之，丹紅注射液治療DN臨床療效較好，其改善腎功能作用可能與抑制血小板CD62p、PAC-1表達，從而抑制血小板活化有關(guān)。

[1] Arora MK, Singh UK. Molecular mechanisms in the pathogenesis of diabetic nephropathy:An update[J]. Vascular Pharmacology,2013,58(4):259-271.

[2] Collins AJ, Foley RN, Herzog C, et al. US renal data system 2012 annual data report[J]. Am J Kidney Dis, 2013,61(suppl 1):471-476.

[3] 曹煜隆,趙海玲,嚴美花,等.中國漢族人群PPARγ2基因Prol2Aa多態(tài)性與糖尿病腎病相關(guān)性Meta分析[J].中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志,2015,16(9):798-801.

[4] Hou M, Yu J, Zhang L, et al .Changes and significance of P selectin and PAC-1 in coronary heart disease before and after stenting[J]. Chin Medi J,2014,94(10):766-768.

[5] 彭宇生,王鵬,鄧劍.急性腦梗死患者活化血小板的檢測及臨床價值[J]. 檢驗醫(yī)學(xué),2011,26(8):512-514.

[6] 中華中醫(yī)藥學(xué)會腎病分會.糖尿病腎病診斷、辯證分型和療效評定標準[J]. 上海中醫(yī)藥雜志,2007,41(7):7-8.

[7] Yang W, Lu J, Weng J, et al. China National Diabetes and Metabolic Disorders Study Group prevalence of diabetes among men and women in china[J]. N Engl J Med, 2010,362(12):1090-1101.

[8] 蘇弘薇,康省,龍艷,等.糖尿病腎病與血糖波動和炎性因子的關(guān)系探討[J]. 中華老年心腦血管病雜志2015,17(3):273-276.

[9] Velcheva L, Danlianov P, Mantarova S, et al. Lelnorheolog and heart rate variability ill patients with diabetes nlellitus type 2[J]. Clin Llemorheol Microcirc, 2011,49(1):513-518．

[10] 羅貽春,玄麗慧,朱艷,等.丹紅注射液輔助治療大動脈粥樣硬化型急性腦梗死效果觀察[J]. 山東醫(yī)藥,2014,54(24):52-54.

[11] 李穎,黃偉.糖尿病腎病患者血清細胞黏附分子、CD11b、CD62P、CD63的表達及其臨床意義[J]. 國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2014,35(9):1207-1209.

[12] 王齊國,龍訓(xùn)輝,徐測梁.慢性心力衰竭患者血小板PAC-1與NT proBNP 的相關(guān)性分析[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志,2013,13(14):1650-1652.

[13] 李云婷,張雷雷,張巧麗.血小板活化標志物CD62P、CD63在糖尿病患者早期腎臟微血管病變中的表達[J]. 河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2015,36(5):551-553.

河北省衛(wèi)生計生委醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點課題計劃項目(20150055)。

任衛(wèi)東(E-mail: yfynfmrwd@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.46.012

R587.1；R289

B

1002-266X(2016)46-0044-03

2016-04-10)