炎癥對(duì)高磷所致大鼠血管平滑肌細(xì)胞鈣化的影響及機(jī)制探討

馮靈，張藝，姜慧玲，馮志強(qiáng)，盤強(qiáng)文

(西南醫(yī)科大學(xué)，四川瀘州646000)

炎癥對(duì)高磷所致大鼠血管平滑肌細(xì)胞鈣化的影響及機(jī)制探討

馮靈，張藝，姜慧玲，馮志強(qiáng)，盤強(qiáng)文

(西南醫(yī)科大學(xué)，四川瀘州646000)

目的 探討炎癥對(duì)高磷所致大鼠血管平滑肌細(xì)胞鈣化的影響及可能機(jī)制。方法 原代培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細(xì)胞，分為空白對(duì)照組、高磷組、炎癥組及高磷+炎癥組。高磷組、高磷+炎癥組在加入4.8 mmol/L磷的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，建立高磷誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞鈣化模型。高磷+炎癥組加入10 μg/mL細(xì)菌脂多糖(LPS)，炎癥組只加入10 μg/mL細(xì)菌脂多糖(LPS)，空白對(duì)照組在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中培養(yǎng)。各組均培養(yǎng)48 h后，檢測(cè)培養(yǎng)液C反應(yīng)蛋白(CRP)水平、細(xì)胞堿性磷酸酶(ALP)活性及鈣沉積量；Realtime-PCR法檢測(cè)細(xì)胞骨形成蛋白-2(BMP-2)、腫瘤抑制基因4(Smad4)、肌肉片段同源盒2(Msx2)及成骨細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子(Osterix)mRNA相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果 高磷組、炎癥組及高磷+炎癥組培養(yǎng)液中CRP水平、細(xì)胞ALP活性及鈣沉積量均高于空白對(duì)照組(P均<0.05)，且高磷+炎癥組培養(yǎng)液中CRP水平、細(xì)胞ALP活性及鈣沉積量均高于高磷組及炎癥組(P均<0.05)，炎癥組培養(yǎng)液中CRP水平和細(xì)胞鈣沉積量均低于高磷組(P均<0.05)。高磷組、炎癥組及高磷+炎癥組細(xì)胞中BMP-2、Smad4、Msx2及Osterix mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于空白對(duì)照組(P均<0.05)，且高磷+炎癥組細(xì)胞中BMP-2、Smad4、Msx2及Osterix mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于高磷組及炎癥組(P均<0.05)，炎癥組細(xì)胞中Smad4、Msx2及Osterix mRNA相對(duì)表達(dá)量均低于高磷組(P均<0.05)。結(jié)論 炎癥可顯著加重高磷所致的大鼠血管平滑肌細(xì)胞鈣化，其作用機(jī)制可能與上調(diào)BMP-2、Smad4、Msx2、Osterix表達(dá)及ALP活性等有關(guān)。

炎癥；高磷；平滑肌細(xì)胞；血管鈣化；終末期腎病

心血管疾病(CVD)是終末期腎病(ESRD)常見的并發(fā)癥，ESRD誘發(fā)的心血管鈣化又是導(dǎo)致CVD發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。ESRD患者發(fā)生血管鈣化的危險(xiǎn)因素有高血壓、糖尿病、脂質(zhì)代謝異常、鈣磷代謝紊亂及慢性炎癥等。研究發(fā)現(xiàn)，ESRD患者血管鈣化與骨的礦化過程類似，由血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)參與，且受多種因子和信號(hào)通路調(diào)控[1]。目前研究證實(shí)，參與調(diào)節(jié)VSMCs轉(zhuǎn)分化為成骨樣細(xì)胞的骨形成相關(guān)因子有骨形成蛋白-2(BMP-2)和腫瘤抑制基因4(Smad4)等[2]。研究證實(shí)，高磷導(dǎo)致VSMCs鈣化的機(jī)制是使平滑肌細(xì)胞向成骨樣細(xì)胞轉(zhuǎn)變、細(xì)胞外基質(zhì)重塑及平滑肌細(xì)胞凋亡等，而炎癥對(duì)血管中膜平滑肌細(xì)胞鈣化影響的研究則較少。高血磷、慢性炎癥作為兩種普遍存在于ESRD患者體內(nèi)對(duì)血管鈣化起主要促進(jìn)作用的因素，是否通過促進(jìn)VSMCs向成骨樣細(xì)胞轉(zhuǎn)變而導(dǎo)致血管鈣化，其機(jī)制尚不明確。2015年3月～2016年1月，我們通過體外原代培養(yǎng)大鼠VSMCs，用高磷培養(yǎng)基建立VSMCs鈣化模型，并加入細(xì)菌脂多糖(LPS)引發(fā)炎癥，觀察培養(yǎng)液中C反應(yīng)蛋白(CRP)水平、細(xì)胞堿性磷酸酶(ALP)活性和細(xì)胞鈣沉積量的改變及細(xì)胞BMP-2、Smad4、肌肉片段同源盒2(Msx2)和成骨細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子(Osterix) mRNA的表達(dá)變化，探討炎癥對(duì)高磷所致血管鈣化的影響，為ESRD患者血管鈣化的防治提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、試劑及儀器 雄性SD大鼠60只，體質(zhì)量(150±10)g，由西南醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。胰蛋白酶、青鏈霉素、RIPA裂解液、BCA蛋白定量檢測(cè)試劑盒(江蘇海門碧云天生物技術(shù)有限公司)；M199培養(yǎng)基、胎牛血清(HyClone，賽默飛世爾生物化學(xué)制品北京有限公司)；DAB試劑盒(ZLI-9017，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)；ALP測(cè)試盒(A059-2，南京建成生物工程研究所)；大鼠CRP酶聯(lián)免疫分析試劑盒(F15232，上海西唐生物科技有限公司)；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(K1622，F(xiàn)ermentas，加拿大)；CO2培養(yǎng)箱(MCO-15AC，Sanyo，日本)；倒置相差顯微鏡(CKX41SF，Olympus，日本)；多功能酶標(biāo)儀(SpectraMax M3，Molecular Devices，美國)；PCR 擴(kuò)增儀(2720，Applied Biosystems，美國)；實(shí)時(shí)定量PCR 儀(Rotor-Gene 3000，Corbett Research，澳大利亞)等。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng) 采用組織貼塊法原代培養(yǎng)大鼠VSMCs，待VSMCs爬出并增殖至皿底面積的80%左右時(shí)傳代。將VSMCs以0.5×105/mL、2 mL/孔接種于20塊6孔板中，待細(xì)胞長滿70%時(shí)，換含100 U/mL青霉素、0.1 mg/mL鏈霉素及0.5%牛血清白蛋白(BSA)的M199細(xì)胞培養(yǎng)基同步化處理24 h。

1.3 高磷誘導(dǎo)的VSMCs鈣化模型構(gòu)建及鑒定 將VSMCs分別加入含磷1.01、2.4、3.6及4.8 mmol/L的培養(yǎng)基，均培養(yǎng)48 h，構(gòu)建高磷誘導(dǎo)的VSMCs鈣化模型構(gòu)建。茜素紅鈣染色發(fā)現(xiàn)，48 h時(shí)含磷濃度為4.8 mmol/L培養(yǎng)基中的細(xì)胞有明顯的橘紅色染液附著，而含磷濃度為1.01、2.4及3.6 mmol/L的培養(yǎng)基中細(xì)胞橘紅色染料附著不明顯。鄰甲酚酞絡(luò)合酮(OCPC)法檢測(cè)細(xì)胞鈣沉積量，結(jié)果示含磷3.6及4.8 mmol/L時(shí)的細(xì)胞鈣沉積量均高于含磷1.01及2.4 mmol/L時(shí)(P均<0.05)。故選擇含磷4.8 mmol/L時(shí)的細(xì)胞模型進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.4 細(xì)胞分組、模型制備及干預(yù)方法 將VSMCs以0.5×105/mL于6孔板內(nèi)傳代培養(yǎng)，同步化處理24 h后，分為空白對(duì)照組、高磷組、炎癥組及高磷+炎癥組。高磷組、高磷+炎癥組在加入4.8 mmol/L磷的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，建立高磷誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞鈣化模型。高磷+炎癥組加入10 μg/mL LPS；炎癥組只加入10 μg/mL LPS；空白對(duì)照組在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中培養(yǎng)。各組均培養(yǎng)48 h。

1.5 各組培養(yǎng)液中CRP水平、細(xì)胞ALP活性及鈣沉積量檢測(cè) 吸取培養(yǎng)液，2 000 r/min離心20 min，吸取上清液裝入無菌管后，按CRP酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書進(jìn)行操作，測(cè)得各組培養(yǎng)液中CRP含量。棄細(xì)胞培養(yǎng)上清，用RIPA裂解細(xì)胞，取適量已裂解細(xì)胞按ALP測(cè)試盒說明書進(jìn)行操作，檢測(cè)細(xì)胞ALP活性。OCPC比色法檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)鈣濃度，BCA法檢測(cè)蛋白含量以標(biāo)化鈣含量，最終得出各組細(xì)胞鈣沉積量。

1.6 各組細(xì)胞中骨形成相關(guān)基因mRNA表達(dá)檢測(cè) 采用Realtime-PCR法檢測(cè)各組細(xì)胞中骨形成相關(guān)基因mRNA表達(dá)，包括BMP-2、Smad4、Msx2及Osterix。由上海生工生物工程股份有限公司合成各引物。大鼠BMP-2引物序列：正義鏈5′-GGGACCCGCTGTCTTCTA-3′，反義鏈5′-CAGCCTCAACTCAAACTC-3′。大鼠Smad4引物序列：正義鏈5′-CACTATGAGCGGGTTTC-3′，反義鏈5′-GTGGGTAAGGATGGCTGT-3′。大鼠Msx2引物序列：正義鏈5′-CGCCGTGGATACAGGA-3′，反義鏈5′-GCTGGGACGTGGTGAA-3′。大鼠Osterix引物序列：正義鏈5′-GCCTACTTACCCGTCTGACTTT-3′，反義鏈5′-GCCCACTATTGCCAACTGC-3′。內(nèi)參β-actin：正義鏈5′-CACGATGGAGGGGCCGGACTCATC-3′，反義鏈5′-TAAAGACCTCTATGCCAACACAGT-3′。提取總RNA，細(xì)胞總RNA質(zhì)量鑒定，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，以2-ΔΔCt得到mRNA相對(duì)表達(dá)量。

2 結(jié)果

2.1 各組培養(yǎng)液中CRP水平、細(xì)胞ALP活性及鈣沉積量比較 高磷組、炎癥組及高磷+炎癥組培養(yǎng)液中CRP水平、細(xì)胞ALP活性及鈣沉積量均高于空白對(duì)照組(P均<0.05)，且高磷+炎癥組培養(yǎng)液中CRP水平、細(xì)胞ALP活性及鈣沉積量均高于高磷組及炎癥組(P均<0.05)。炎癥組培養(yǎng)液中CRP水平和細(xì)胞鈣沉積量均低于高磷組(P均<0.05)。見表1。

表1 各組培養(yǎng)液中CRP水平、細(xì)胞ALP活性及細(xì)胞鈣沉積量比較

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.05；與高磷組比較，#P<0.05；與炎癥組比較，△P<0.05。

2.2 各組細(xì)胞中骨形成相關(guān)基因mRNA表達(dá)比較 高磷組、炎癥組及高磷+炎癥組細(xì)胞中BMP-2、Smad4、Msx2及Osterix mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于空白對(duì)照組(P均<0.05)，且高磷+炎癥組細(xì)胞中BMP-2、Smad4、Msx2及Osterix mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于高磷組及炎癥組(P均<0.05)。炎癥組細(xì)胞中Smad4、Msx2及Osterix mRNA相對(duì)表達(dá)量均低于高磷組(P均<0.05)。見表2。

表2 各組細(xì)胞中骨形成相關(guān)基因mRNA表達(dá)比較

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.05；與高磷組比較，#P<0.05；與炎癥組比較，△P<0.05。

3 討論

ESRD患者體內(nèi)廣泛存在高磷血癥，而高磷血癥引起ESRD發(fā)生血管鈣化的機(jī)制復(fù)雜，可能通過以下途徑觸發(fā)血管鈣化：①高磷通過鈉/磷共轉(zhuǎn)運(yùn)體致使細(xì)胞內(nèi)磷升高，促進(jìn)成骨相關(guān)的蛋白表達(dá)，從而引起鈣化；②高磷誘導(dǎo)VSMCs發(fā)生凋亡，凋亡小體為鈣化提供基礎(chǔ)；③高磷刺激ALP、基質(zhì)小泡、鈣結(jié)合蛋白等潛在的礦化成核分子分泌；④高磷激活致炎信號(hào)途徑，使血管平滑肌向成骨/成軟骨樣細(xì)胞轉(zhuǎn)化[3]。ESRD患者血清中磷及鈣水平是動(dòng)脈硬化的一個(gè)重要因素，血磷增高可增加血清中礦物質(zhì)水平、誘導(dǎo)血管平滑肌轉(zhuǎn)化成為類成骨細(xì)胞，也可使鈣磷乘積增高，形成不溶的磷酸鈣，沉積于血管壁，導(dǎo)致血管鈣化[4]。本課題組前期研究[5]證實(shí)，ESRD所致高磷血癥可引起大鼠主動(dòng)脈的鈣化。高磷血癥和慢性炎癥常共存于大部分ESRD患者體內(nèi)，其發(fā)生血管鈣化的風(fēng)險(xiǎn)較大，而臨床防治更注重改善這類患者的礦物質(zhì)代謝紊亂，對(duì)其慢性炎癥則不夠重視。若能做到二者并重，也許會(huì)有更好的防治效果。Raggi等[6]研究發(fā)現(xiàn)，高磷血癥是維持性血液透析患者發(fā)生血管鈣化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。劉翻利等[7]研究發(fā)現(xiàn)，維持性血液透析患者使用低鈣透析液后血清成纖維細(xì)胞生長因子23(FGF-23)水平下降，提示低鈣透析液可能通過降低血清FGF-23水平，從而減少血管鈣化的發(fā)生。研究[8]發(fā)現(xiàn)，使用無鈣的磷酸鹽結(jié)合劑治療尿毒癥大鼠能有效控制血管鈣化的發(fā)展。

血管鈣化是一個(gè)主動(dòng)、可調(diào)節(jié)、有炎癥參與的復(fù)雜過程。炎癥反應(yīng)與血管鈣化密切相關(guān)，其部位涉及到血管內(nèi)膜、中層和外膜。血管鈣化的中心環(huán)節(jié)是VSMCs向成骨細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)化，而動(dòng)脈壁炎癥細(xì)胞激活及炎癥因子釋放引發(fā)的氧化級(jí)聯(lián)反應(yīng)，可通過改變VSMCs的表型等啟動(dòng)程序化的骨生成過程，最終導(dǎo)致并加速動(dòng)脈鈣化。Agharazii等[9]研究發(fā)現(xiàn)，慢性腎臟病(CKD)大鼠在發(fā)生胸主動(dòng)脈鈣化過程中，VSMCs向成骨樣細(xì)胞轉(zhuǎn)分化伴BMP-2和骨鈣素表達(dá)增加的同時(shí)，IL-1β、IL-6和TNF-α的表達(dá)也明顯增加。TNF-α是已被證實(shí)的在體內(nèi)外可促進(jìn)血管鈣化的炎癥因子。炎癥和高磷均是誘導(dǎo)血管鈣化的重要因素，且高磷飲食可誘發(fā)系統(tǒng)炎癥，促進(jìn)TNF-α表達(dá)增加，誘導(dǎo)成骨標(biāo)志物表達(dá)，從而共同促進(jìn)血管鈣化。研究顯示，血液透析患者的CRP顯著升高，表明體內(nèi)的炎癥反應(yīng)亢進(jìn)，而降低血磷則可顯著降低CRP的水平，可見高血磷與炎癥反應(yīng)關(guān)系密切[10]。然而，高磷引起炎癥反應(yīng)的具體機(jī)制尚不完全清楚。Yamada等[11]研究發(fā)現(xiàn)，炎癥反應(yīng)可能與炎性因子的活化及氧化應(yīng)激有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，高磷組、炎癥組及高磷+炎癥組鈣含量均高于空白對(duì)照組，且高磷+炎癥組鈣含量高于高磷組、炎癥組，提示高磷和炎癥均可促使VSMCs鈣化，若二者同時(shí)存在則其促進(jìn)作用更強(qiáng)。

CRP是一種炎癥介質(zhì)，參與炎癥和免疫反應(yīng)過程[12]。CRP與慢性腎衰竭患者動(dòng)脈粥樣硬化和心血管病變等并發(fā)癥密切相關(guān)。李相等[13]研究發(fā)現(xiàn)，作為炎癥特異性敏感指標(biāo)的CRP與橈動(dòng)脈鈣化程度顯著相關(guān)。劉小峰等[14]發(fā)現(xiàn)，高磷可通過增加線粒體膜電位，促進(jìn)線粒體氧自由基產(chǎn)生增加，激活致炎信號(hào)途徑NF-κB，使VSMCs向成骨/成軟骨樣細(xì)胞轉(zhuǎn)化，是導(dǎo)致血管鈣化的重要環(huán)節(jié)之一。本研究發(fā)現(xiàn)，高磷組、炎癥組及高磷+炎癥組培養(yǎng)液中的CRP含量高于空白對(duì)照組，提示高磷和LPS均可誘發(fā)VSMCs發(fā)生炎癥反應(yīng)，且高磷和炎癥可通過增強(qiáng)CRP的表達(dá)促使VSMCs向成骨樣細(xì)胞轉(zhuǎn)化,進(jìn)而發(fā)生鈣化。

ALP是反映成骨細(xì)胞活性增強(qiáng)的重要標(biāo)志，任何引起成骨細(xì)胞增生和活動(dòng)旺盛的因素都可以使血清ALP活性增高。Murshed等[15]研究發(fā)現(xiàn)，除骨組織和牙齒外，只要能表達(dá)ALP或其他焦磷酸酶、細(xì)胞外基質(zhì)纖維的任何組織都能出現(xiàn)鈣化。同時(shí)，ALP還可以通過經(jīng)典的Wnt信號(hào)通路和Msx2來增強(qiáng)其活性，從而加快血管鈣化的發(fā)生發(fā)展。本研究發(fā)現(xiàn)，高磷組、炎癥組及高磷+炎癥組ALP活性明顯高于空白對(duì)照組，提示高磷和炎癥可能通過提高ALP活性促進(jìn)VSMCs鈣化。

BMP-2是目前較明確的血管鈣化促進(jìn)因子，是一種強(qiáng)效的骨形成因子，其機(jī)制可能是通過激活Smads信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，上調(diào)其下游基因Msx2表達(dá)，增強(qiáng)經(jīng)典的Wnt3a/β連環(huán)信號(hào)通路從而促進(jìn)成骨過程。Buendía等[16]研究發(fā)現(xiàn)，用TNF-α刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞后，可引起B(yǎng)MP-2和內(nèi)皮微粒出現(xiàn)高表達(dá)，導(dǎo)致VSMCs成骨和鈣化。Msx2是膜內(nèi)成骨形成的必需成分，在成骨細(xì)胞分化、軟骨形成及新生血管形成的過程中有重要作用，可通過上調(diào)Osterix表達(dá)以促進(jìn)成骨作用[17]。而Osterix則是成骨細(xì)胞分化的一個(gè)關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄因子，在Osterix基因缺失的小鼠體內(nèi)可發(fā)現(xiàn)成骨細(xì)胞形成障礙。Smads是TGF-β信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中重要的基因家族，其中Smad4在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起瓶頸作用。Zeini等[18]研究發(fā)現(xiàn)，Smad4的核移位可直接誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，VSMCs來源的凋亡小體可提供鈣化核從而導(dǎo)致血管鈣化。本研究發(fā)現(xiàn)，高磷組和炎癥組BMP-2、Smad4、Msx2和Osterix mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于空白對(duì)照組，結(jié)合高磷組和炎癥組的鈣含量也高于空白對(duì)照組的結(jié)果，考慮炎癥及高磷都能通過這一途徑促使VSMCs向成骨樣細(xì)胞轉(zhuǎn)化形成鈣化；同時(shí)高磷+炎癥組BMP-2、Smad4、Msx2和Osterix mRNA相對(duì)表達(dá)量及鈣含量也高于高磷組和炎癥組，提示炎癥與高磷的結(jié)合可加速VSMCs鈣化進(jìn)程。

綜上所述，高磷與炎癥均可誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的大鼠VSMCs鈣化，炎癥若結(jié)合高磷可顯著加重體外培養(yǎng)的大鼠VSMCs鈣化，其作用機(jī)制可能與上調(diào)BMP-2、Smad4、Msx2、Osterix和ALP等骨形成相關(guān)因子的表達(dá)有關(guān)。

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Effects and mechanisms of inflammation on the calcification of rat vascular smooth muscle cells caused by high phosphate

FENGLing,ZHANGYi,JIANGHuiling,FENGZhiqiang,PANQiangwen

(SouthwestMedicalUniversity,Luzhou646000,China)

Objective To study the effects and possible mechanisms of inflammation on the calcification of rat vascular smooth muscle cells (VSMCs) primarily caused by high phosphate.Methods Rat VSMCs were primarily cultured and then were divided into the control (Ctr) group, high phosphate (Pi) group, inflammation (LPS) group, high phosphate and inflammation (Pi+LPS) group. Rat VSMCs in the Pi group and Pi+LPS group were cultured in basal medium containing 4.8 mmol/L Pi to establish the calcification models successfully. Rat VSMCs in the Pi + LPS group were cultured in basal medium containing 4.8 mmol/L Pi and 10 μg/mL LPS. Rat VSMCs in the LPS group were cultured in basal medium only containing 10 μg/mL LPS. Rat VSMCs in the Ctr group were cultured in basal medium. The C-reactive protein (CRP) level of culture medium, alkaline phosphatase (ALP) activity and calcium deposition of cells in each group were respectively measured after 48-hour culture; real-time PCR was used to detect the relative mRNA expression of bone morphogenetic protein-2 (BMP-2), Smad4, Msx2 and Osterix.Results The CRP level of culture medium, ALP activity and calcium deposition of cells in the Pi group, LPS group and Pi+LPS group were higher than those of the Ctr group (allP<0.05). The CRP level of culture medium, ALP activity and calcium deposition of cells in the Pi+LPS group were higher than those in the Pi group and LPS group (allP<0.05). The CRP level of culture medium and calcium deposition of cells in the LPS group were lower than those of the Pi group (allP<0.05). The relative mRNA expression of BMP-2, smad4, msx2, and Osterix in the Pi group, LPS group and Pi+LPS group was higher than that of the Ctr group (allP<0.05). The relative mRNA expression of BMP-2, smad4, msx2 and Osterix in the Pi+LPS group was higher than that of the Pi group amd LPS group (allP<0.05). The relative mRNA expression of smad4, msx2 and Osterix in the LPS group was lower than that of the Pi group (allP<0.05).Conclusions The calcification of rat VSMCs cultured in vitro could be induced by both high phosphate and inflammation. Inflammation combined with high phosphate could aggravate the calcification of rat VSMCs cultured in vitro significantly. The mechanisms may be ralted with the up-regulation of BMP-2, Smad4, Msx2, Osterix expression and the ALP activity.

inflammation; high phosphate; smooth muscle cells; vascular calcification; end-stage renal disease

四川省教育廳項(xiàng)目基金資助項(xiàng)目(09ZC118)。

馮靈(1982-)，女，本科，助教，主要研究方向?yàn)榇x紊亂與器官損害。E-mail: 272227751@qq.com

簡介：盤強(qiáng)文(1971-)，男，碩士，教授，主要研究方向?yàn)榇x紊亂與器官損害。E-mail: qwpan@swmu.edu.cn

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.46.004

R364.3；R692.5

A

1002-266X(2016)46-0015-05

2016-05-17)