PTEN在急性白血病中的表達意義

摘要：目的 研究急性白血病中PTEN表達意義，分析PTEN在急性白血病發病機制中作用。方法 收集2012年3月～2013年3月我院血液內科20例初治急性白血?。ǔ饧毙栽缬琢＜毎籽。┎±?4例骨髓正常造血（脾功能亢進、缺鐵性貧血）病例。通過免疫組化實驗方法半定量分析兩組病例PTEN表達水平。結果 急性白血病組中PTEN表達水平明顯低于正常組（P<0.05），具有統計學差異。結論 PTEN異常表達可能有參與了急性白血病發生發展。

關鍵詞：急性白血??；PTEN；免疫組化

急性白血病是一種造血干細胞惡性克隆導致正常骨髓造血異常的惡性血液腫瘤[1]。PTEN基因是已知抑癌基因，本文將通過免疫組化半定量分析PTEN在急性白血病中表達，從而研究PTEN在急性白血病發病中的作用。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究選取2012年2月～2013年2月我院收治的20例初治急性白血?。ǔ饧毙栽缬琢＜毎籽。┗颊咦鳛檠芯繉ο螅?4例，女6例，年齡25～86歲；包括6例急性髓系白血病M1型、8例急性髓系白血病M2型、4例急性髓系白血病M5型；所有病例均符合 MICM診斷標準。14例正常對照組包括9例缺鐵性貧血、5例脾功能亢進病例。

1.2方法

1.2.1標本 所有標本均為骨髓活檢組織石蠟，切成4μm組織切片

1.2.2 免疫組化 二甲苯（I、II）中脫蠟，濃度由高到低的乙醇脫苯，3% H2O2內源性過氧化物酶阻斷，枸櫞酸鈉修復液高壓修復5 min，一抗PTEN（北京中杉金橋，工作液），4℃冰箱孵育過夜，復溫45 min后加通用型二抗，室溫孵育15 min，滴加DAB顯色液，顯色10 s，自來水沖洗，滴加蘇木素染色，使用1%鹽酸酒精分化1～3 s，低濃度至高濃度酒精進行脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.3結果判定 PTEN蛋白表達于胞漿。采用半定量法分析免疫組化結果，每張骨髓病理切片隨機挑選10個高倍視野（10×40），每個視野計數超過100個有核細胞，陽性細胞的數N/100即為陽性細胞百分比。根據陽性細胞所占比例及顯色強度綜合評分。A分為陽性細胞百分比：0～10%顯色為0分，11%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～100%為3分；B分為陽性細胞顯色強度：未顯色或藍色為0分，淺黃色為1分， 棕黃色為2分，棕褐色為3分。A分+B分為標本積分，積分≥3分視為高表達，積分<3分視為低表達。

1.4統計學方法 用SPSS 19.0軟件分析所有數據，計數資料以均數±標準差（x±s）表示，組間通過t檢驗分析PTEN在急性白血病組、正常表達差異。

2 結果

顯微鏡下觀察PTEN表達陽性細胞的細胞胞漿內淡黃色至棕褐色顆粒。正常組及急性白血病組PTEN表達，見表1。計數兩組PTEN表達積分，對兩組平均值進行統計t檢驗，見表1。

急性白血病組病例PTEN表達積分平均值與標準差（0.8300±0.1865）與正常對照組（2.7670±0.4259）相比明顯較低，P<0.05，兩者在統計學上有顯著性差異。

3 討論

急性白血病是血液內科常見惡性腫瘤，是造血干細胞惡性克隆影響骨髓正常造血，從而引起感染、貧血、出血、外周浸潤等癥狀。急性白血病平均生存期3個月左右。PTEN（phosphatase and tensin）基因是1997年被發現，是一個抑癌基因[1]。磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸（PIP3）是PTEN的底物蛋白。PTEN具有蛋白磷酸酶和脂質磷酸酯酶雙重活性，PTEN蛋白通過脂質磷酸酶活性使 PIP3去磷酸化為磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸（PIP2）從而抑制AKT介導磷脂酰肌醇三磷酸激酶（PI3K）信號通路活化，從而抑制細胞增殖[2]。有報道指出白血病中出現PTEN基因突變[3]。在對PTEN突變的斑馬魚研究發現，PTEN基因突變使斑馬魚中PTEN蛋白失活，造血干細胞可增殖但無法分化為成熟血細胞[4]。人類白血病發病可能與PTEN有關，本實驗通過免疫組化發現PTEN在急性白血病表達較正常組低，支持PTEN失活參與急性白血病發病。PTEN可能可以幫助臨床對急性白血病的診斷，同時為找出新的治療提供新思路。

參考文獻：

[1]Cristofano A D，Pesce B，Cordon-Cardo C，et al.Pten is essential for embryonic development and tumour suppression[J].Nature genetics，1998，19（4）：348-355.

[2]Cully M，You H，Levine A J，et al.Beyond PTEN mutations：the PI3K pathway as an integrator of multiple inputs during tumorigenesis[J].Nature Reviews Cancer，2006，6（3）：184-192.

[3]Zhang J，Grindley J C，Yin T，Jayasinghe S，et al.PTEN maintains haematopoietic stem cells and acts in lineage choice and leukaemia prevention[J].Nature，2006，441（7092）：518-522.

[4]Choorapoikayil S，Kers R，Herbomel P，et al.Pivotal role of Pten in the balance between proliferation and differentiation of hematopoietic stem cells in zebrafish[J].Blood，2014，123（2）：184-190.

編輯/肖慧