免疫組化聯(lián)合抗體在腹膜間皮瘤與卵巢漿液性癌鑒別中的應(yīng)用

摘要：目的 研究CK5/6、CK8/18、CEA、Vimentin（Vim）、Calretinin（Cal）、D2-40、ER、PR、CA125在腹膜間皮瘤與卵巢漿液性癌中的表達(dá)情況，尋找后穹隆穿刺活檢標(biāo)本中鑒別二者最有效的抗體組合。方法 選取我院2013年1月～2014年12月盆腔腫瘤手術(shù)標(biāo)本66例，按照不同病種分為二組，卵巢低級別漿液性癌40例，腹膜上皮型惡性間皮瘤26例，采用常規(guī)HE染色觀察二者形態(tài)學(xué)特點(diǎn)，并應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測CK5/6、CK8/18、CEA、Vim、Cal、D2-40、ER、PR、CA125的表達(dá)情況。結(jié)果 上皮型惡性間皮瘤與低級別卵巢漿液性癌組織學(xué)形態(tài)極其相似，常規(guī)HE切片中鑒別非常困難。免疫組織化學(xué)顯示上皮型惡性間皮瘤CK5/6、CK8/18、CEA、Vim、Cal、D2-40、ER、PR、CA125陽性率分別為100%、100%、3.8%、76.9%、85%、95.2%、3.8%、0%、7.7%；而在卵巢漿液性癌中的陽性率分別為0%、100%、87.5%、0%、0%、0%、80%、85%、95%，二者對9種抗體的陽性率差異顯著。結(jié)論 CK5/6、Cal、D2-40在間皮瘤中具有較強(qiáng)的敏感性和特異性，而卵巢癌在ER、PR、CA125中高表達(dá)，采用形態(tài)學(xué)和免疫組化相結(jié)合的方法，對活檢標(biāo)本中卵巢漿液性癌和上皮型惡性間皮瘤的鑒別診斷有極大的幫助，對指導(dǎo)臨床的準(zhǔn)確診斷和正確治療具有重大意義。

關(guān)鍵詞：細(xì)針穿刺；卵巢癌；上皮型間皮瘤；免疫組織化學(xué)；聯(lián)合抗體

腹膜惡性間皮瘤（PMM）與低級別卵巢漿液性癌（OSA）細(xì)胞學(xué)形態(tài)極其相似，單純依靠組織學(xué)鑒別二者非常困難，尤其是經(jīng)后穹隆盆腔腫瘤穿刺標(biāo)本，由于取材困難，穿刺過程中組織損傷，診斷更加困難，只能依靠免疫組織化學(xué)方法進(jìn)行鑒別診斷。目前標(biāo)記間皮瘤的抗體較多，但敏感性和特異性差異很大，找到一組簡單可靠的抗體組合正成為目前研究的熱點(diǎn)。本研究選取我院2013年1月～2014年12月卵巢低級別漿液性癌40例，腹膜上皮型惡性間皮瘤26例，應(yīng)用CK5/6、CK8/18、CEA、Vim、Cal、D2-40、ER、PR、CA125九種抗體對盆腔上皮型惡性間皮瘤和卵巢漿液性癌進(jìn)行檢測，希望找到鑒別二者較好的抗體組合。

1資料與方法

1.1一般資料 選用我院2013年1月～2014年12月盆腔腫瘤手術(shù)標(biāo)本66例，其中上皮型惡性間皮瘤26例，男性17例，女性9例，16例有石棉接觸史，年齡35～72歲，平均（52.8±5.6）歲。卵巢低級別漿液性癌40例，年齡40～75歲，平均（50.5±12.4）歲。

1.2 SP法免疫組化試劑盒來源（表1）

1.3方法 所有標(biāo)本均經(jīng)4%中性甲醛固定，常規(guī)4μm厚度連續(xù)切片，HE染色。免疫組化采用SP法，嚴(yán)格按照使用說明書操作，DAB顯色，蘇木精復(fù)染、脫水、透明和封固。以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4結(jié)果判定 免疫組化染色陽性信號呈棕褐色或棕黃色，ER、PR定位在細(xì)胞核；CK5/6、CK8/18、Cal、Vim定位在細(xì)胞漿；D2-40、CEA、CA125定位在細(xì)胞漿/膜，陽性細(xì)胞數(shù)<10%為陰性，≥10%為陽性。

2結(jié)果

2.1病理組織學(xué)形態(tài) 40例卵巢癌病例均為低級別漿液性癌，呈腺管狀、乳頭狀排列，瘤細(xì)胞單層或復(fù)層，呈矮柱狀或立方型，相似于間皮細(xì)胞，乳頭結(jié)構(gòu)較寬，可見多級分枝，有的間質(zhì)內(nèi)可見砂粒體（圖1，圖2）。26例上皮型惡性間皮瘤光鏡下組織結(jié)構(gòu)多樣，表現(xiàn)為管狀、乳頭狀、實(shí)性巢狀等（圖3）。細(xì)胞圓形或卵圓形，核通常為單個，居中或稍偏位，核仁1～2個，核分裂像少見，少數(shù)病例可伴有砂粒體形成。上皮型惡性間皮瘤在CK5/6、Cal、D2-40中高表達(dá)（圖4～圖6），而卵巢癌在ER、PR、CA125中高表達(dá)（圖7～圖9）。

2.2免疫組化表達(dá)情況（表2）

3討論

盆腔腫瘤中，腹膜惡性間皮瘤和卵巢癌為最常見的2種腫瘤，由于組織來源不同，治療方法也不相同，因此組織學(xué)的分型對指導(dǎo)臨床的治療、腫瘤的分期及預(yù)后的判斷有著重要的意義。有文獻(xiàn)報(bào)道惡性間皮瘤90%發(fā)生于胸膜[1]，3%～12%發(fā)生于腹膜[2]。

腹膜間皮瘤是腹腔內(nèi)惡性度極高的腫瘤，目前尚無有效的治療方法，大多數(shù)死于診斷后的1～2年內(nèi)，男性發(fā)病多于女性，發(fā)生于兒童的病例罕見報(bào)道[3]。根據(jù)國內(nèi)資料統(tǒng)計(jì)，間皮瘤的發(fā)病率為0.04%，且多與石棉接觸有關(guān)[4]，其他原因包括職業(yè)和周圍環(huán)境的接觸[5]。近年其發(fā)病率有逐年增多的趨勢。有研究表明，惡性間皮瘤的潛伏期為35～40年[6]，目前發(fā)病率增高的原因，可能與20世紀(jì)70年代我國大面積手紡石棉加工有關(guān)。

由于間皮細(xì)胞的組織學(xué)形態(tài)多樣，在光鏡下與卵巢分化好的腺癌很難鑒別，尤其是卵巢低級別漿液性癌，光鏡下幾乎無法鑒別。所以尋找一組有效的抗體能夠鑒別惡性間皮瘤與卵巢癌的組織學(xué)類型，對病人的準(zhǔn)確診斷和正確治療尤為必要。由于單一抗體的敏感性、特異性不同，往往達(dá)不到鑒別診斷的作用，因此，國際間皮瘤小組建議至少同時(shí)使用2種間皮標(biāo)記和2種其他癌的標(biāo)記[7]。

3.1 CK5/6 通常標(biāo)記鱗狀上皮和導(dǎo)管上皮的基底細(xì)胞、部分前列腺基底細(xì)胞以及部分鱗狀上皮生發(fā)層細(xì)胞，腺上皮細(xì)胞不表達(dá)。在肉瘤樣惡性間皮瘤中陽性率較低，而在上皮型間皮瘤中高表達(dá)，本結(jié)果中，CK5/6在PMM中的陽性率極高（100%），而卵巢癌全部陰性。可以作為PMM的可靠標(biāo)記物用于PMM和OSA的鑒別診斷中。

3.2 CK8/18 是單層腺上皮來源腫瘤的首選標(biāo)記物，鱗狀上皮不表達(dá)，由于間皮細(xì)胞多潛能分化的特性，CK8/18在間皮腫瘤也高表達(dá)，通常和CK5/6聯(lián)合使用標(biāo)記間皮細(xì)胞。

3.3 CEA 是腺癌常用的標(biāo)記物，在少部分間皮瘤中有局灶弱的陽性表達(dá)，腺癌細(xì)胞分化越低則CEA含量越高。本結(jié)果CEA在OSA中表達(dá)（87.5%）明顯高于PMM中的表達(dá)（3.8%），因此CEA是鑒別腺癌和間皮瘤的重要標(biāo)記物，可作為二者鑒別的一線抗體使用。

3.4 Vim 在梭形細(xì)胞為主型惡性間皮瘤呈陽性表達(dá)，國外的研究也表明，Vim在間皮瘤的陽性率較高，而在腺癌為陰性，雖然Vim在本結(jié)果中的表達(dá)率僅為76.9%。而在卵巢腺癌中全部為陰性表達(dá)，二者之間陽性率差異仍十分顯著。

3.5 Calretinin是一種鈣結(jié)合蛋白，表達(dá)于神經(jīng)組織、脂肪組織、間皮細(xì)胞，腺癌極少表達(dá)，因此，Calretinin是上皮樣間皮瘤最敏感和特異的抗體，在鑒別腺癌和間皮瘤中有較強(qiáng)的特異性。

3.6 D2-40 是一種分子量為40kDa的糖蛋白，主要存在于胚胎睪丸和睪丸生殖細(xì)胞腫瘤中，近幾年的研究表明，D2-40在上皮型間皮瘤中亦高表達(dá)，本研究D2-40在間皮瘤中表達(dá)率為95.2%，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。因此可作為間皮瘤鑒別診斷有用的標(biāo)記物。

3.7 ER 雌激素受體存在于正常子宮內(nèi)膜、平滑肌細(xì)胞以及正常乳腺的上皮細(xì)胞中 ，在間皮瘤中陰性表達(dá)，在卵巢漿液性腫瘤中陽性表達(dá)，此抗體識別雌激素受體的N端功能區(qū)（A/B區(qū)），研究表明ER表達(dá)陽性的病人對其進(jìn)行激素治療往往有效，預(yù)后較好。

3.8 PR 孕激素受體表達(dá)有兩個異構(gòu)體PRA（94KDa）和PRB（114 Kda），其功能是作為配體活化后轉(zhuǎn)錄因子存在于子宮內(nèi)膜、卵巢及乳腺上皮細(xì)胞中，間皮瘤陰性表達(dá)。PR也可作為鑒別間皮瘤的有用標(biāo)記物之一。

3.9 CA125 幾乎在所有的卵巢漿液性癌中陽性表達(dá)，宮頸、子宮內(nèi)膜、乳腺、胃腸道及甲狀腺腺瘤均有少數(shù)表達(dá)。而卵巢粘液性腫瘤和間皮瘤陽性率很低，對鑒別診斷有重要的參考價(jià)值。單純的形態(tài)學(xué)診斷間皮瘤非常困難，目前對于間皮瘤的診斷基本依賴于免疫組化的輔助診斷，迄今為止尚無一種抗體對間皮瘤完全特異，都是依靠一組抗體的聯(lián)合應(yīng)用。以往用于間皮瘤的抗體組還有HBME、WT1、P-CK等，但由于抗體昂貴或敏感性、特異性、穩(wěn)定性差等原因沒有廣泛的推廣使用。本研究抗體組試劑便宜、操作簡單，特異性、敏感性較高，使間皮瘤的診斷與鑒別診斷水平有了很大提高。

綜上所述，由于惡性間皮瘤的病理形態(tài)多樣，對于臨床影像學(xué)和組織學(xué)鑒別困難的病例，需要依賴于免疫組織化學(xué)抗體的聯(lián)合檢測。抗體組CK5/6、Vim、D2-40和 Cal對間皮瘤具有較強(qiáng)的敏感性和特異性，而CK8/18、CEA、ER、PR、CA125對腺癌敏感，兩組抗體的聯(lián)合應(yīng)用對PMM和OSA的鑒別診斷有重要意義。

參考文獻(xiàn)：

[1]夏海玲，張幸.惡性間皮瘤生物標(biāo)志研究進(jìn)展[J].中華勞動衛(wèi)生職業(yè)病雜志，2014，32（5）：397-400.

[2]李媛，吳人亮.兒童胸膜惡性小細(xì)胞型間皮瘤一例[J].中華小兒外科雜志，2002，23（5）：480-481.

[3]魏思忱，鄭國啟，王志剛，等.滄州地區(qū)162例腹膜惡性間皮瘤臨床資料回顧性分析[J].中華內(nèi)科雜志，2013，52（4）：335-336

[4]倪燦榮.免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)新技術(shù)及應(yīng)用[M].北京：北京科學(xué)技術(shù)出版社，1993：326.

[5]胡余昌，阮秋容.惡性上皮性間皮瘤免疫組化特征及其鑒別診斷[J].診斷病理學(xué)雜志，2003，10（5）：264-266.

[6]鄧群益.間皮瘤相關(guān)特異性抗體的研究進(jìn)展[J].診斷病理學(xué)雜志，2000，7：67.

[7]王靜，朱江.女性腹膜惡性間皮瘤的臨床病理及預(yù)后研究[J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2013，18（3）：238-241.編輯/申磊