CIP2A在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義

摘要：目的 通過(guò)檢測(cè)CIP2AmRNA在乳腺纖維腺瘤、非浸潤(rùn)性乳腺癌、浸潤(rùn)性乳腺癌中的表達(dá)情況，探討CIP2A在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法 選取纖維腺瘤、非浸潤(rùn)性乳腺癌、浸潤(rùn)性乳腺癌標(biāo)本各40份。采用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶反應(yīng)方法檢測(cè)40例乳腺纖維腺瘤，40例乳腺原位癌和40例浸潤(rùn)性乳腺癌中的CIP2A mRNA的表達(dá)情況，并比較它們的差異。結(jié)果 在40例浸潤(rùn)性乳腺癌組織中，31例有CIP2A mRNA表達(dá)，陽(yáng)性率77.5%；在40例非浸潤(rùn)性乳腺癌組織中有23例表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為57.5%；在40例乳腺纖維腺瘤組織中有11例表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為27.5%，表達(dá)有顯著差異。CIP2A在浸潤(rùn)性乳腺癌中的相對(duì)表達(dá)水平為1.249±0.689，非浸潤(rùn)性乳腺癌的相對(duì)表達(dá)水平為0.785±0.685，乳腺纖維腺瘤的相對(duì)表達(dá)水平為0.257±0.434；采用單因素方差分析，發(fā)現(xiàn)CIP2A在乳腺纖維腺瘤、非浸潤(rùn)性乳腺癌、浸潤(rùn)性乳腺癌中的相對(duì)表達(dá)水平依次升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.005）。結(jié)論 CIP2AmRNA在乳腺癌中過(guò)表達(dá)，其在乳腺纖維腺瘤、非浸潤(rùn)性乳腺癌、浸潤(rùn)性乳腺癌中的相對(duì)表達(dá)水平依次升高，CIP2A在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中可能起到了重要的作用。

關(guān)鍵詞：CIP2A；RT-PCR；乳腺癌

乳腺癌是女性常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在我國(guó)占全身各種惡性腫瘤的7%～10%，僅次于子宮頸癌。CIP2A是2007年被識(shí)別的與PP2A、c-myc具有相互作用的內(nèi)源性蛋白；CIP2A通過(guò)抑制PP2A對(duì)c-myc蛋白第62位絲氨酸脫磷酸化作用，從而增強(qiáng)c-myc穩(wěn)定性，抑制PP2A的抑癌作用，從而起到致癌作用[1]。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2010年7月～2015年8月江西省人民醫(yī)院、南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院、南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的乳腺纖維腺瘤、非浸潤(rùn)性乳腺癌、浸潤(rùn)性乳腺癌的新鮮組織各40例（所有納入研究的患者術(shù)前均未行放化療）。本研究已獲本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法 ①提取總RNA；②檢測(cè)RNA濃度、純度以及完整性；③按照試劑盒說(shuō)明書(shū)逆轉(zhuǎn)錄成cDNA4、進(jìn)行PCR擴(kuò)增：④CIP2A引物序列為：5'-CCATATGC TCACTCAGATGATGT-3'（forward），5'-GTGTATCATCTCCACAGAGAGTT-3'（reverse）

內(nèi)參照β2-microglobin（β2-MG）引物序列為：5'-ACCCCCACTGAAAAAGAT GA-3'（forward），5'-GCATCTTCAAACCTCCATGAT-3'（reverse）；⑤瓊脂糖凝膠電泳；⑥6、使用ImageJ測(cè)定電泳圖DNA擴(kuò)增帶灰度值。將CIP2A和內(nèi)參（β-actin）的灰度值進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。

1.3統(tǒng)計(jì)方法 所有的數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，正態(tài)分布的計(jì)量資料以（x±s）表示，采用χ2檢驗(yàn)檢測(cè)其表達(dá)陽(yáng)性率是否存在差異。采用單因素方差分析檢測(cè)CIP2A在乳腺纖維腺瘤、非浸潤(rùn)性乳腺癌、浸潤(rùn)性乳腺癌中的相對(duì)表達(dá)水平是否存在差異。以P<0.05視為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

在40例浸潤(rùn)性乳腺癌組織中，31例有CIP2A mRNA表達(dá)，陽(yáng)性率77.5%；在40例非浸潤(rùn)性乳腺癌組織中有23例表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為57.5%；在40例乳腺纖維腺瘤組織中有11例表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為27.5%，表達(dá)有顯著差異。采用χ2檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，表達(dá)陽(yáng)性率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。

采用ImageJ軟件對(duì)各條帶的灰度值進(jìn)行分析，以每個(gè)組織CIP2A與β-catin掃描灰度值之比作為統(tǒng)計(jì)參數(shù)，CIP2A在浸潤(rùn)性乳腺癌中的相對(duì)表達(dá)水平為1.249±0.689，非浸潤(rùn)性乳腺癌中的相對(duì)表達(dá)水平為0.785±0.685，乳腺纖維腺瘤中的相對(duì)表達(dá)水平為0.257±0.434；采用單因素方差分析，發(fā)現(xiàn)CIP2A在乳腺纖維腺瘤、非浸潤(rùn)性乳腺癌、浸潤(rùn)性乳腺癌中的相對(duì)表達(dá)水平依次升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.005）。

3 討論

CIP2A又稱(chēng)P90是最近被識(shí)別的致癌因子，能抑制PP2A對(duì)c-myc蛋白第62位絲氨酸脫磷酸化作用，增強(qiáng)c-myc穩(wěn)定性，從而抑制PP2A的抑癌作用。其基因定位于染色體3q13.13，DNA長(zhǎng)度約為38.8kb，mRNA長(zhǎng)為4284bp，含有21個(gè)外顯子，有一個(gè)編碼905個(gè)氨基酸的開(kāi)放讀碼框。研究表明CIP2A在多種惡性腫瘤中過(guò)表達(dá)，且對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)化有促進(jìn)作用[2-6]。已研究表明，CIP2A過(guò)表達(dá)能加速乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化和增殖。因此，我們認(rèn)為CIP2A在包括乳腺癌在內(nèi)的多個(gè)癌腫的發(fā)生發(fā)展中起到了重要的作用。本研究表明CIP2AmRNA在乳腺纖維腺瘤、非浸潤(rùn)性乳腺癌、浸潤(rùn)性乳腺癌中的相對(duì)表達(dá)水平依次升高，其在乳腺癌中過(guò)表達(dá)。

綜上所述，CIP2A在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中可能起到了重要的作用，有可能成為乳腺癌的腫瘤標(biāo)志物之一。

參考文獻(xiàn)：

[1]KhannaA，Bockelman C，Hemmes A，et a1.MYC-dependent regulation and prognostic role of CIP2A in gastric cancer[J].J Natl Cancer Inst，2009，101（11）：793-805.

[2]Khanna A，Okkeri J，Bilgen T，et al.ETS1 mediates MEK1/2-dependent overexpression of cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A（CIP2A）in human cancer cells[J].PloS one，2011，6（3）：e17979.

[3]Laine A，Sihto H，Come C，et al.Senescence sensitivity of breast cancer cells is defined by positive feedback loop between CIP2A and E2F1[J].Cancer discovery，2013，3（2）：182-197.

[4]Seth A，Watson D K.ETS transcription factors and their emerging roles in human cancer[J].European Journal of Cancer，2005，41（16）：2462-2478.

[5]Pallai R，Bhaskar A，Sodi V，et al.Ets1 and Elk1 transcription factors regulate cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A expression in cervical and endometrial carcinoma cells[J].Transcription，2012，3（6）：323.

[6]Liu C Y，Shiau C W，Kuo H Y，et al.Cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A determines bortezomib-induced apoptosis in leukemia cells[J].haematologica，2013，98（5）.

編輯/周蕓霏