肌肉刺激性試驗中藥物誘導的骨骼肌毒性病變實例

摘要：目的 因注射給藥可能對注射部位產生刺激性反應，因此肌肉刺激性試驗是靜脈注射劑和肌肉注射劑藥物安全性評價研究中的主要檢測項目之一。而病理學診斷是評價肌肉刺激性試驗中藥物誘導的骨骼肌毒性病變的重要依據。方法 取注射部位的新西蘭兔的股四頭肌進行石蠟切片、HE染色，光學顯微鏡觀察。結果 組織病理學觀察可見骨骼肌內藥物沉積、骨骼肌變性、壞死、再生和修復等病理改變。結論 分析肌肉組織切片可能用于確定外源性物質所致的神經源性或肌病性改變、特定的肌肉結構的改變或特定的肌肉代謝變化的過程的一部分。

關鍵詞：肌肉刺激性試驗；骨骼肌毒性；組織病理學；安全性評價

因注射類藥物能引起神經肌肉功能障礙，這會引起越來越多的人對骨骼肌毒性的關注。這類藥物所誘導的神經肌肉疾病主要包括藥源性肌病和藥源性周圍神經病。藥源性肌病中，某些藥物如抗生素類、氯喹、氯丙嗪、哌替定（ 度冷?。?、苯海拉明、曲安西龍等肌肉注射會引起局部肌肉纖維化、組織攣縮；靜注或肌肉注射一些外源性物質可能產生局部毒性。肌肉注射麻醉性鎮痛藥和土霉素可引起局灶性損傷。藥物如噴他佐辛和哌替啶可造成嚴重的纖維化反應[1]。皮質類固醇也是最常見的導致肌病的藥物。研究顯示60% 接受地塞米松治療的癌癥患者出現肌病。

非臨床研究中，肌肉刺激性試驗是保證注射藥劑臨床安全用藥的主要刺激性試驗之一[2-4]。其中病理學診斷是評價肌肉刺激性試驗中藥物誘導的骨骼肌毒性病變的重要依據。肌肉的常規石蠟切片可檢測到一些病理性肌肉改變。分析肌肉組織切片可能用于確定外源性物質所致的神經源性或肌病性改變、特定的肌肉結構的改變或特定的肌肉代謝變化的過程的一部分。

1資料與方法

1.1動物來源 動物來源：普通級新西蘭兔，體重2.5kg左右。由濟南西嶺角養殖繁育中心提供[合格證號：SCXK（魯）20140005]。

1.2方法

1.2.1給藥部位及方法 本試驗采用新西蘭兔左右兩腿股四頭肌。注射時，將新西蘭兔用固定器固定后將左側股四頭肌注射部位被毛剪去，酒精棉球消毒后，右手持注射器，使注射器與肌肉成約60度角，一次刺入肌肉中。

1.2.2 給藥部位及剖檢取材觀察 給藥期間每次給藥前和給藥后觀察，非給藥日觀察1次/d。觀察注射部位外觀有無紅腫、壞死、硬結等異常變化。末次藥后48h取4只，恢復期結束取2只。解剖取出股四頭肌，縱向切開，肉眼觀察注射局部毒性反應，取注射部位的股四頭肌，其它部位有肉眼可見變化一并剪取。觀察注射部位肌肉的顏色、質地、有無充血、壞死等。將所取標本放入盛有10%福爾馬林溶液的廣口瓶中固定。

1.2.3 切片及染色 組織固定6h后進行常規脫水、包埋、切片，并根據說明書步驟進行HE染色。

1.2.4 組織病理學診斷內容 肌肉組織的病理學診斷內容包括肌纖維、肌束、肌束間質及血管、神經的觀察。觀察有無肌纖維的變性，壞死、溶解，有無炎細胞浸潤，有無出血灶，病變的分布是局限于少數肌纖維，還是多發小灶狀，抑或累及較大面積；觀察肌纖維的病變是局限在一個肌束內，還是發生于多個肌束，并注意觀察各肌束的病變程度。觀察肌束間質有無間質水腫、間質增寬的改變，以及有無炎細胞浸潤，出血灶等病變；血管、神經纖維觀察有無充血或出血，血管內皮至外膜各層有無病變，以及有無血栓形成等。還應觀察神經纖維有無損傷。

2結果

2.1 光學顯微鏡觀察 顯微鏡下觀察可見受損纖維腫脹和嗜酸性增強伴橫紋消失（圖1 B、C）。改變后的收縮物質通常破碎成大塊或盤狀，沿肌纖維的外膜\"管\"散在分布。24h內，受損的區域被少量多形核白細胞和大量的巨噬細胞浸潤。外膜\"管\"持續存在引導再生過程，并可被局灶性破壞以便巨噬細胞的進入（圖1 D）。

注：圖1A： 正常家兔股四頭肌橫切面。肌漿紅染，橫紋清晰，細胞核位于肌纖維周邊部（10×）。圖1B： 肌纖維凝固性壞死。肌漿紅染均質化，橫紋及細胞核消失（箭頭所示）。局部肌纖維壞死，肌漿崩解，呈不規則顆粒狀（三角形所示）（10×）。圖1C： 肌纖維凝固性壞死。局部肌纖維壞死，肌漿崩解，呈不規則顆粒狀（三角形所示）。間質有多量炎細胞浸潤（箭頭所示）（10×）。圖1D： 肌纖維外膜\"管\"存在，受損肌纖維破碎成大塊或盤狀，沿肌纖維的外膜\"管\"散在分布。內有巨噬細胞浸潤（箭頭所示）。間質增寬，多量炎細胞浸潤（40×）。

3討論

在常規尸檢中一般不詳細研究骨骼肌系統。事實上，解剖人員往往忽視了檢查骨骼肌系統，而主要注意暴露問題和內臟器官的觀察。另外，從骨骼肌的結構和功能分析。首先，骨骼肌是人體最大的器官，起身體的支持和運動作用。骨骼肌肉系統的質量較大，占身體重量的40～50%[5]。由于許多物質傾向于結合到骨骼肌上可能提高其對有毒藥物的敏感性，可通過直接和間接機制引起骨骼肌功能障礙或損傷。其次，骨骼肌纖維對高能量要求和高代謝水平，這種新陳代謝特點，可能使這些細胞受到某些化學品和藥品損傷。某些藥物具有骨骼肌纖維選擇性，因為有些情況下，某種或其他纖維類型可能被優先影響。區分纖維類型在評價肌毒性中是有用的。試驗中，我們可以根據纖維各自獨特的代謝和功能特點，利用組織化學染色程序識別幾種纖維類型。

但對于骨骼肌這一組織，還存在以下幾點值得探討。首先，現今開發的治療\"現代\"疾病如肥胖，糖尿病的化學品和藥品，可能影響骨骼肌纖維的代謝，從而導致損傷。其次，通過藥物對肌肉的組織病理學觀察，我們觀察到骨骼肌的修復能力較強，肌組織可通過再生的方式進行修復。在動物毒理研究中發現的藥物所致的骨骼肌病變，我們推測毒性是否可能也會在人骨骼肌中出現。最后，如何最佳的監測到藥物的骨骼肌毒性，我們可結合其他骨骼肌評價方法，如骨骼肌生物標志物這一指標，對骨骼肌是否發生病變有較為良好的預測。因此，我們有必要通過初步研究肌肉刺激性試驗中骨骼肌局部毒性的病理變化特點來引起人們對骨骼肌毒性的重視。

參考文獻：

[1]邱小弟，佘守章，黃煥森.噴他佐辛臨床鎮痛的應用研究進展[J].廣東醫學，2010，31（10）：1219-1221.

[2]《中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術指導原則》課題研究組.中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術指導原則[M].藥物研究技術指導原則.北京：中國醫藥科技出版社， 2006：227-242.

[3]《化學藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術指導原則》課題研究組.化學藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術指導原則[M].藥物研究技術指導原則.北京：中國醫藥科技出版社， 2006：116-122.

[4]全國人民代表大會.中華人民共和國藥品管理法（修訂）[S]. 中華人民共和國主席令第四十五號.2001.

[5]Wanda M.Haschek， Colin G.Rousseaux，et al.毒理病理學基礎[M].劉克劍，王和枚等主譯.2版.北京：軍事醫學科學出版社，2014.

編輯/孫杰