哮喘大鼠呼吸道、腸道微生態變化研究

摘要：目的 從微生態角度探討\"肺與大腸相表里\"的機制。方法 選取SPF級Wistar大鼠30只采用隨機數字表法分為正常對照組和哮喘模型組。采用1%卵白蛋白超聲霧化吸入建立哮喘模型。建模成功后取肺泡灌洗液及腸粘液進行菌落計數及細菌種類檢測。結果 哮喘組和空白對照組比較，肺泡灌洗液中需氧菌顯著多于對照組（P<0.05），厭氧菌顯著少于對照組（P<0.05），真菌顯著多于對照組（P<0.05）。腸粘液菌群結果可以看出哮喘組的需氧菌顯著多于空白對照組（P<0.05），厭氧菌顯著少于對照組（P<0.05），真菌顯著多于對照組（P<0.05），雙歧桿菌顯著少于對照組（P<0.05），而兩組大腸桿菌之間無顯著差異性（P>0.05）。結論 支氣管哮喘大鼠呼吸道菌群及腸道菌群均發生變化，為\"肺與大腸相表里\"提供部分微生態學實驗依據。

關鍵詞：哮喘；動物模型；腸道；微生態

支氣管哮喘（簡稱\"哮喘\"）是一種嚴重威脅人類健康的慢性呼吸系統疾病。發病率在世界范圍內呈增加趨勢，發展中國家的患病率呈更為顯著的上升趨勢[1]。越來越多的研究結果顯示，細菌感染是誘發哮喘的危險因素[2，3]，\"肺與大腸相表里\"，最早源于《內經》\"肺與大腸相合\"的論述。中醫認為，肺與大腸通過經脈聯系，一陰一陽表里相對，臟腑陰陽表里相偶[4]。故本文通過建立哮喘動物模型，研究模型大鼠的呼吸道及腸道微生態變化，觀察微生物種群分布差異及菌群活性在哮喘發病中的相互關聯，現報道如下：

1資料與方法

1.1實驗動物 選取SPF級Wistar大鼠30只 （新疆醫科大學實驗動物中心提供），體重（200±20）g，雌雄各半，分籠并常規飼養。

1.2造模方法 30只大鼠雌雄不限，采用隨機數字表法分為正常對照組，哮喘模型組。模型組每只大鼠均于實驗的第1d、第8d和第14d共3次在腹腔分2點注射含15 mgOVA和10mg Al（OH）3的生理鹽水1ml，于致敏第15d，每日以1%卵白蛋白生理鹽水對動物放入自制的密閉有機玻璃箱中進行超聲霧化吸入，連續激發3d，正常對照組予生理鹽水代替抗原進行致敏和激發。

1.3肺泡灌洗液實驗 第19d兩組大鼠處死后開胸分離氣管及肺臟，夾閉右主支氣管，以0.9%生理鹽水3 mL灌洗左肺，抽出1.5 mL左右，共灌洗3次，收集支氣管灌洗液4～5 mL左右。將BALF于4℃離心，取上清液待檢測。

1.4腸黏液采集 取靠近回盲部15cm的腸段，平鋪于濾紙上，縱行剖開，用生理鹽水反復沖洗腸腔表面，用載玻片輕刮黏膜表面黏液置EP管內，加入0.5 ml 0.01 mol/LPBS充分混勻，1000 r/min離心15 min，取上清液置4℃冰箱待測。

1.5微生態檢測 菌落計數： 計數培養皿表面的菌落數并乘以稀釋倍數，得到菌落形成單位（CFU）數據。由于數據較大，將此原始數據轉換成對數值，完成統計運算。

種類鑒定：根據細菌形態學、菌落、菌細胞和菌落形態、染色性及生化實驗鑒定。

2結果

2.1小鼠肺部微生態比較結果 通過對小鼠支氣管肺泡灌洗液菌群進行分析，可以看出哮喘組和空白對照組比較哮喘組的需氧菌顯著多于空白對照組（P=0.000），厭氧菌顯著少于對照組（P=0.003），真菌顯著多于對照組（P=0.000），見表1。

2.2小鼠腸道微生態比較結果通過對小鼠腸粘液菌群進行分析，可以看出哮喘組和空白對照組比較哮喘組的需氧菌顯著多于空白對照組（P=0.000），厭氧菌顯著少于對照組（P=0.000），真菌顯著多于對照組（P=0.000），哮喘組的雙歧桿菌顯著少于對照組（P=0.003），而兩組大腸桿菌之間無顯著差異性（P=0.268），見表2。

3討論

正常狀況下，機體與正常菌群之間保持著動態的微生態平衡，常駐菌與宿主的微環境形成一個相互依賴又相互作用的微生態系統[5]。一旦這種微生態平衡受到破壞，就有可能導致機體疾病的發生。

本次研究結果顯示，在哮喘狀態下，大鼠的肺部和腸道菌群變化均存在顯著性差異，整體表現為需氧菌增多，厭氧菌減少，真菌增多的表現形式，而肺部的菌群變化與腸道的菌群變化具有相似性，也體現了中醫\"肺與大腸相表里\"\"肺病及腸\"的理論觀點。

由此可見，支氣管哮喘患者在發病中不僅出現了呼吸道均群的失調，同時腸道菌群也發生了紊亂，因此，在支氣管哮喘的治療中同時重視對腸道菌群平衡的調整也可能起到治療支氣管哮喘的作用。

參考文獻：

[1]Santos MA， Fernandes AL， Amorim MM， et al. Evaluation of diagnostic criteria for severe asthma described in a public health directive regulating the free distribution of medications for the maintenance treatment of asthma[J].J Bras Pneumol，2009，35（4）：310-317.

[2]Pole JD，Mustard CA，To T，et al.Antenatal steroid therapy for fetal lung maturation：is there an association with childhood asthma？[J].J Asthma，2009，46（1）：47-52.

[3]Wu P， Dupont WD， Griffin MR， et al. Evidence of a causal role of winter virus infection during infancy in early childhood asthma[J].Am J Respir Crit Care Med， 2008，178（11）：1123-1129.

[4]龔盟.\"肺與大腸相表里\"理論文獻整理與實驗研究[D]，北京中醫藥大學，2010.

[5]陶方明.人體的微生態平衡[J].檢驗醫學與臨床，2007，03：204-205.

編輯/丁一