兩種不同的檢驗方法檢測乙型肝炎病毒標志物的臨床比較

摘要：目的 對比時間分辨免疫熒光分析法（TRFIA）、化學發光免疫分析法（CLIA）檢測乙型肝炎病毒標志物效用。方法 對272例對象進行有關于HBV血清標志物TRFIA、CLIA檢測。結果 TRFIA檢驗HBcAb陽性率高于ECLIA，TRFIA檢測HBsAb特異度、檢測HBeAg與HBcAb靈敏度低于ECLIA方法，TRFIA檢測HBeAg特異度、檢測HBcAb特異度高于ECLIA，差異具有統計學意義（P<0.05）。結論 TRFIA、CLIA檢測各有優劣。

關鍵詞：乙型肝炎；病毒標志物；化學發光免疫；時間分辨熒光免疫分析

乙型病毒性肝炎（以下簡稱乙肝），是一種嚴重威脅人類生命健康的病毒性傳染病，保守估計全世界約20億人感染過乙型肝炎病毒（HBV），現存慢性HBV感染者約3.5億人。我國乙肝表面抗原攜帶率高達8%～10%[1]。乙肝危害極大，約50%～70%的慢性HBV感染者進展為慢性肝炎，其中多數又進展為肝硬化、肝癌，年死亡約100萬例[2]。檢測HBV病毒標志物是乙肝防治基礎工作之一，可反映乙肝發展、轉歸以及預后。HBV標志物檢測主要可分為定性分析與定量分析，定量分析主要包括酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、TRFIA、CLIA等，國內常用Elecsys Ⅱ系統、Architect系統，ELISA法應用最廣[3]。CLIA、TRFIA靈敏度高，特異性好，可進行定量分析，但目前在臨床上應用較少，關于兩種方法優劣尚無明確定量。

1 資料與方法

1.1一般資料 以2014年1月～2015年1月，醫院開展HBV 血清標志物定量檢測受檢者作為研究對象。納入標準：①知情同意；②嚴格質控。共納入對象272例，其中男150例、女122例，年齡1～84歲、平均（41.3±5.2）歲。50例診斷為肝炎，已知FQ-HBV-DNA定量檢測結果。其余均為日常檢驗樣本。

1.2方法 采用CLIA雙抗夾心法檢測HbsAg、雙抗原夾心法檢測HbsAb、雙抗體夾心法檢測HbeAg、競爭法檢測HbeAb、HbcAb。檢查儀器，檢測HBsAg四項血清標志物配套試劑，讀取試劑盒上條形信息。先檢測2份質控品，若檢測值在要求范圍內，開始檢測待測樣品，否則需排除失控原因再檢測。

TRFIL雙抗體夾心法檢測HBsAg、雙抗原夾心法檢測HbsAb/雙抗體夾心法檢測HbeAg、競爭法檢測HBeAb與HbcAb。采用銪標志，將稀釋液按1：50配置成為事項HBV血清標注物標記物工作液，同時將相應的微孔反應板、空白板，按順序放置在時間分娩熒光分析儀固定的反應板位置，將配套的校準液、質控品等放置于預設位置。復融血清標本，吸取500μl，采用EFFICUTA全自動樣本處理系統加樣，儀器緩慢振動孵育40min，洗板，加入銪標志物工作液，加增強液，儀器自動根據校準品濃度與熒光值，采用擬合方式計算標準曲線，而后求出待測樣本濃度，進而判斷結果。

以熒光PCR定量檢測為金標準，抽提HBV-DNA模板，配置PCR反映液，并向每個PCR反應管中加入20μl，加入DNA模塊液，進行PCR擴增。

1.3判斷標準 CLIA法：HBsAg、HBeAg≥1.0 COI者為陽性，否則為陰性；HBeAb、HBcAb<1.0COI為陽性，否則為陰性；HBsAb≥10mIU/ml者為陽性，否則為陰性。

TRFIL法：HBsAg≥0.2ng/ml者為陽性，否則為陰性；HBsAb≥10mIU/ml者為陽性，否則為陰性；HBeAg≥0.5PEIU/ml者為陽性，否則為陰性；HBeAb≥0.2PEI U/ml者為陽性，否則為陰性；HBcAb≥0.9PEI U/ml者為陽性，否則為陰性。

1.4統計學處理 WPS收集錄入數據資料，以SPSS18.0軟件包統計處理，計量資料采用均數±標準差（x±s）表示，若服從正態分布采用t檢驗，否則采用非參數檢驗，計數資料以數（n）或率（%）表示，比較采用χ2檢驗，以P<0.05表示檢驗水平，一致性檢驗采用Kappa分析，Kappa>0.75表示有較好的一致性。

2 結果

2.1兩種方法檢驗結果分布 TRFIA檢驗HBcAb陽性率高于ECLIA，差異具有統計學意義（P<0.05）；TRFIA與ECLIA方法檢測HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb陽性率差異無統計學意義（P>0.05）（見表1）。兩種方法一致性檢驗，HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb一致性Kappa值分別為0.932、0.805、0.890、0.844、0.450，其中HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb具有較好的一致性。

2.2檢測HBV血清標志物效用 以PCR檢測結果為金標準，HBsAb陽性147例、HBeAg陽性31、HBeAb陽性150例、HBcAb陽性195例。TRFIA檢測HBsAb特異度、檢測HBeAg與HBcAb靈敏度低于ECLIA方法，TRFIA檢測HBeAg特異度、檢測HBcAb特異度高于ECLIA，差異具有統計學意義（P<0.05），見表2。

3 討論

目前，臨床普遍采用ELISA檢測HBV血清標志物，近年來TRFIA與ECLIA法迅速發展，并逐漸得到推廣應用，普遍認為兩種方法并無優劣之分，都可有效對HBV血清標志物水平，進行定量分析。但從本次研究來看，兩種技術對不同類型HBV血清標志物敏感性、特異度不盡相同，TRFIA法對HBeAg與HBcAb敏感性、對HBeAb特異度偏低，ECLIA法對HBeAb于HBcAb特異度偏低。TRFIA以銪為示蹤劑，可明顯排除非特異性熒光的干擾，當具有雙功能基團的銪標記抗原或抗體與病毒血清抗體與抗原結合時，可在特定的激發光下發出特定波長的熒光。CLIA技術是目前最先進的化學發光免疫測定系統之一，從方法學角度來看，但該法檢測效用易受血清稀釋比例、操作步驟影響。ECLIA、TRFIA檢測不同HBV血清標志物效用差異具體原因尚不清楚，可能與技術實現特定、步驟差異、材料質量等因素有關，實驗室應據、檢測水平，制定合適的血清標志物篩查診斷HBV感染流程步驟。

綜上所述，TRFIA、CLIA檢測各有優劣，對HBsAb敏感度較高。

參考文獻：

[1]中華醫學會感染病學分會，中華醫學會肝病學分會.慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）[J].中國預防醫學雜志，2011，12（1）：1-15.

[2]林宇，李頌華，王如偉.日本對慢性乙型肝炎和肝硬化的治療研究概述[J].中國藥學雜志，2012，47（18）：1444-1449.

[3]馬曉燕，韓濤，裴彥禎，等.乙肝肝硬化患者血清乙肝病毒表面抗原定量水平的研究[J].中國現代醫學雜志，2011，21（34）：4375-4277.

編輯/金昊天