酵素水溶液在冰凍切片中的應用

摘要：目的 分析探討酵素水溶液在冰凍切片中的應用，探索能提高冰凍切片質量的方法。方法 選用我院臨床科室提供的各種系統組織100例，采用抽簽分組法分為實驗組（n=50）和對照組（n=50）。實驗組采用酵素水溶液作為分化液，對照組采用1%鹽酸乙醇溶液作為分化液，分析比較兩組分化液的使用時間、所制切片質量及其穩定性。結果 實驗組的酵素水溶液使用時間明顯大于對照組，比較差異有統計學意義（P<0.05）；實驗組四種組織冰凍切片質量評分差異無統計學意義（P>0.05），酵素水溶液為分化劑制作冰凍切片質量穩定；實驗組冰凍切片的質量高于對照組冰凍切片的質量，差異顯著，有統計學意義（P<0.05）。結論 酵素水溶液作為分化液制作冰凍切片能顯著提高切片質量且質量穩定，值得推廣使用。

關鍵詞：酵素水溶液；分化液；冰凍切片；切片質量

冰凍切片作為一種能將新鮮組織在低溫環境下快速冷凍至一定程度再進行切片的方法，是病理診斷和進行科學研究的重要手段之一，高質量的冰凍切片能幫助醫師快速準確地對患者病情做出評估和判斷[1]，為合理的制定治療方案提供了科學依據。為探索能提高冰凍切片質量的方法，本文研究對比了酵素水溶液和1%鹽酸乙醇溶液作為分化液制作的冰凍切片質量，現報道如下。

1資料與方法

1.1切片組織材料 選取我院臨床科室提供的系統組織100例，采用抽簽分組法分為實驗組（n=50）和對照組（n=50）。實驗組組織中包含甲狀腺組織14例，乳腺組織17例，淋巴結組織9例，小腿皮膚組織10例；對照組組織中包含甲狀腺組織16例，乳腺組織13例，淋巴結組織11例，小腿皮膚組織10例。兩組組織來源差異比較無統計學意義，具有可比性（P>0.05）。

1.2分化液制備

1.2.1酵素水溶液制作材料[2] 紅糖100g，蘋果300g，無菌水1000g于密封容器內混合保存，每天打開容器一次釋放發酵產生的氣體直至無氣體產生，之后靜置至水溶液顏色變成棕黃色，調整pH=3～4，再將酵素原溶液與無菌水以1：1質量比混合得到酵素水溶液。

1.2.2 1%鹽酸乙醇溶液[3] pH=1的鹽酸0.5ml與100ml的75%乙醇混合，得到1%鹽酸乙醇溶液。

1.2.3切片制作[4] 制片前詳細了解患者的臨床狀況和相關的既往病理檢查史。選用我院ThermoFisher CC07335C1304冰凍切片機，將切片機預冷至相應溫度（乳腺、卵巢等部位溫度控制在：-20℃；甲狀腺、淋巴結、腎等部位溫度控制在：-15℃；皮膚組織溫度控制在：-18～℃-20℃），再將新鮮組織按0.3cm厚，1.5cm長切片，切好的組織置于預先放置了包埋劑的組織托上，放入冰凍切片機凍結。凍結好的組織修剪成規則形狀，使用切片機將組織分割為5μm厚，取2片切片分別貼附在載玻片并放于甲醇固定液中，固定1min后取出，無菌水沖洗10s。再分別使用兩種分化液染色：①1%鹽酸乙醇溶液做分化液：切片使用蘇木精染色60s后水洗10s，1%鹽酸乙醇溶液分化2s后水洗10s，溫水返藍5s，伊紅染色3s，水洗，最后使用梯度乙醇脫水，二甲苯、中性樹膠封固；②酵素水溶液做分化液：切片使用蘇木精染色60s后水洗10s，酵素水溶液分化2s后水洗10s，溫水返藍5s，伊紅染色3s，水洗，最后使用梯度乙醇脫水，二甲苯、中性樹膠封固。切片使用制片時我院留存的分化液制備。

1.3切片質量評價指標[5] ①3級：切片組織背景干凈、細胞清晰度高、染色鮮艷、紅藍對比度高。記為3分。②2級：切片的染色鮮艷度偏灰或偏紅、細胞清晰度不高、組織背景干凈度欠佳、紅藍對比度較差。記為2分。③1級：組織背景較臟，細胞模糊且染色較差，紅藍對比度低，切片無診斷價值。記為1分。切片質量由我院病理科主任評定。

1.4分化液使用時間 計算兩組溶液可供使用的時間，取平均值計算。

1.5統計學 采用SPSS17.0軟件對數據進行統計分析，計量資料用x±s表示，采用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1比較兩組分化液使用時間 實驗組酵素水溶液使用一段時間后，表面形成保護膜，去膜之后繼續使用，平均使用時間（6.95±1.09）w。對照組1%鹽酸乙醇溶液使用一段時間后分化能力下降，共可使用（3.87±0.59）w。實驗組的酵素水溶液使用時間明顯大于對照組，比較差異有統計學意義（P<0.05）。

2.2比較實驗組組織切片的質量穩定性 實驗組甲狀腺組織冰凍切片質量評分為（2.01±0.01）分，乳腺組織冰凍切片質量評分為（2.57±0.41）分，淋巴結組織凍切片質量評分為（2.65±0.00）分，小腿皮膚組織凍切片質量評分為（1.57±0.63）分，四種組織冰凍切片質量評分差異無統計學意義（P>0.05）。酵素水溶液為分化劑制作冰凍切片質量穩定。

2.3比較兩組冰凍切片質量評分 實驗組冰凍切片質量評分為（2.53±0.24）分高于對照組冰凍切片質量評分為（1.67±0.54）分，差異有統計學意義（P<0.05）。

3討論

冰凍切片在臨床病理檢查中有重要的指導意義，其質量直接影響到診斷報告的準確度[6]。分化是切片染色的重要步驟，其決定著切片質量的好壞。分化液在制作過程中主要將蘇木精染色過的細胞胞質中多余的顏色去除，便于伊紅上色。

酵素又稱酶，是一種具有催化、凈化等作用的活性蛋白質，作為分化液制作冰凍切片，能有效中和堿性蘇木精溶液，與其發生反應形成可溶性物質使染色細胞脫色，同時使用酵素溶液能破壞蘇木精溶液與組織細胞的結合，有助于細胞的再次上色。酵素作為活性蛋白質，相對于生化試劑鹽酸乙醇溶液，對細胞傷害更小，能保持組織細胞完整性，利于保持切片組織背景干凈。且1%鹽酸乙醇溶液中的乙醇與水表面張力不同，易導致組織收縮，影響切片質量。本實驗結果顯示，使用酵素溶液作為分化劑的冰凍切片，其質量（2.43±0.24）遠高于采用1%鹽酸乙醇溶液作為分化劑的冰凍切片質量（1.67±0.54），差異顯著，有統計學意義（P<0.05）。酵素溶液使用周期大于對照組的1%鹽酸乙醇溶液，差異顯著，有統計學意義（P<0.05）。并且酵素水溶液為分化劑制作冰凍切片質量穩定。最后本文所用酵素溶液是使用蘋果、紅糖發酵后制成，與鹽酸乙醇液相比，更具環保性。

綜上所述，使用酵素溶液作為分化液能有效提高冰凍切片質量，且切片質量穩定，分化液使用周期較長，值得推廣使用。

參考文獻：

[1]高寶蓮，錢萍，沈志煒，等.酵素水溶液在冰凍切片染色分化中的應用[J].臨床與實驗病理學雜志，2015，31（6）：709-710.

[2]葉敏，劉盡國，趙蘭香，等.冰凍切片常見問題與解決方法[J].臨床與實驗病理學雜志，2013，29（9）：1030-1031.

[3]張同海，黃文斌.冰凍切片操作方法探討[J].臨床與實驗病理學雜志，2013，29（10）：1144-1145.

[4]施昀，馬世榮，惠延平，等.手術中快速冰凍切片病理診斷分析[J].中華病理學雜志，2013，42（1）：48-49.

[5]馮家成，楊靜，張柏輝，等.三種不同固定液和固定方法對腦組織冰凍切片的影響[J].臨床與實驗病理學雜志，2015，31（5）：593-594.

[6]胡錦林，王燦銘，郭振英，等.固定液對冰凍切片質量的影響[J].臨床與實驗病理學雜志，2015，31（6）：706-707.編輯/孫杰