胎兒骨骼染色透明標本的設計與制作

摘要：目的 通過透明標本的制作，對胎兒體內整體骨骼結構的位置關系及形態進行觀察和分析。方法 應用氫氧化鉀溶液先對預先處理好的胎兒標本進行透明處理，再應用茜素紅對胎兒硬骨及骨鈣化點進行染色，最后通過各級甘油的應用來脫去肌肉浮色，使組織透明。結果 經過一系列的處理后，胎兒機體軟組織呈現無色透明特點，其中硬骨及骨鈣化點均被成功的染成紅色，而且骨骼界限也尤為清晰。結論 胎兒骨骼染色透明標本的設計與制作，是當前通過非傳統解剖法對胎兒體內整體骨骼結構的位置關系及形態進行直接觀察和分析的有效手段，在臨床有著廣泛的應用和意義。

關鍵詞：胎兒；透明標本；骨骼染色；設計；制作

透明標本的制作，就是在對機體組織處理過程中，通過一些物理方法和化學藥品的應用，使組織的折射率達到與周圍介質和透明劑相似的要求，從而達到透明的目的。而胎兒骨骼染色標本的設計與制作，也就是通過應用相應的物理方法和化學制劑，實現在保證胎兒完整外形結構的前提下，使其軟組織的折光率能夠同周圍介質與透明劑相近。胎兒骨骼染色透明標本，為現代醫學教學提供出了一套最直觀的標本資料，在對胎兒各期骨骼發育情況進行觀察和學習的過程中發揮出了重要的參考意義。

1 資料與方法

1.1材料 在制作過程中主要應用的材料有：以濃度系數為10%的甲醛溶液為固定液；濃度為6%的過氧化鈉溶液為漂白劑，并用濃度系數分別為50%、70%、90%、95%的酒精為脫水劑；透明劑采用濃度系數為4%的氫氧化鉀溶液，其中應用的染色液有2g氫氧化鉀、0.04g的茜素紅以及100g的蒸餾水。同時在制作過程中還需一孕育4w左右的男性新鮮胎兒尸體。

1.2清洗 在正是操作之前，首先對胎體表面的血跡、污垢利用清水做清潔處理，并在沖洗過程中同時對胎兒的胸腔和腹腔進行擠壓，以便存在于胎兒體內的內容物都能順利排出，但為了保證胎兒整體的完整性，在操作過程中要保留胎兒的內臟及腦組織。

1.3排血 在整個標本制作過程中，排血操作做為了一項最重要的基礎環節。在排血操作過程中，首先在胎兒的胸骨柄處切開一口，以成功找到胎兒的心臟及各大出入血管，切開下腔靜脈，促使胎兒排血；而后對胎兒肺動脈和主動脈起始端進行結扎，在動脈中進行肝素溶液的連續注射，直到胎兒靜脈流出的肝素溶液呈現無色即可停止注射操作。

1.4固定 固定好胎兒姿勢，并將其保持該姿勢置入濃度為10%的甲醛溶液中進行固定浸泡，浸泡時間為5d。

1.5漂白 將經過浸泡的胎兒標本取出，并用清水進行連續12h的沖洗，再將沖洗過后的胎兒標本放置到濃度為6%的過氧化氫溶液中進行為期3～4d的浸泡，進行漂白處理，進而成功去除胎兒組織中的污物和色素。

1.6脫水 經過漂白處理之后，再將胎兒標本用清水進行12h的清洗，隨后再將清洗后的標本置入不同濃度的酒精中進行脫水處理，從低濃度等級向高濃度等級依次進行，每一濃度等級中進行5d的浸泡。在脫水處理過程中可用針頭扎標本，以利于胎兒脫水的更有效進行，也便于標本的透明。

1.7透明 利用濃度為4%的氫氧化鉀溶液，并在結合胎兒標本具體大小的基礎上進行透明處理，溶液每隔2～3d進行一次更換，直至胎兒組織完全透明。

1.8染色 將完全透明的標本置入染色液中進行為期3～5d的染色處理，直到胎兒硬骨及骨鈣化點被成功著色后即可立即取出標本，以避免出現肌肉的過度染色。

1.9軟組織脫色 將處理好的胎兒標本放置入各級甘油中進行軟組織脫色處理，同脫水處理一樣，從低濃度向高濃度依次進行，每一濃度級進行為期2d左右的脫色，直至機體軟組織浮色成功去除即可完成。

1.10二次透明 將經過軟組織脫色處理后的胎兒標本放入甘油中進行二次透明處理，在處理過程中對于肌肉較厚的部位可采取人工注入甘油的方法來強化透明效果。

1.11保存 最后，對處理好的胎兒骨骼染色透明標本進行整理和修飾，所有整理工作結束后，將其放入冬青油中進行密封保存。

2 結果

經過一系列的處理過程而完成的胎兒染色透明標本，胎兒機體軟組織呈現無色透明特點，其中硬骨及骨鈣化點均被成功的染成紅色，而且骨骼界限也尤為清晰，更加便于觀察和識別。實現了在保證胎兒整體外部結構完整的情況下，能夠更加精準直觀的觀察其內部的骨骼結構位置和形態特征。

3 討論

3.1 在標本制作過程中的注意事項

3.1.1在制作過程中所應用到的胎兒材料要確保足夠新鮮，便于透明和排血處理。因為如果胎兒標本放置時間過長，都會由于凝血原因導致血管堵塞，進而對沖洗機排血等過程帶來極大地不便[1-4]。

3.1.2漂白和脫水作為標本制作過程中的兩大關鍵環節，在具體的實施過程中要確保標本不被破壞的前提下進行充分的漂白；另外，漂白液濃度的提高，雖然會縮短漂白時間，但也會造成組織損傷，因此為更好的確保標本外形的完整性，通常會采取較低濃度的漂白液。對于脫水處理過程，經過脫水處理后的胎兒標本，能夠更好地實現透明劑的滲入，進而達到透明充分的目的。但同時由于較高濃度酒精所具備的滲透速度快、脫水能力強等特點，會導致標本出現明顯的收索硬化進而損壞胎兒外形，因此在脫水環節，通常采取逐級脫水的方法，以此有效的避免了標本的外形改變，并充分的保證了胎兒的外部形態的完整性。

3.1.3由于胎齡越大，質量越重，身體結實度越強，相應的溶液融入也就越困難，因此在透明處理過程中要結合胎兒的具體年齡、質量以及堅實程度等特點進行透明劑氫氧化鉀的選取，避免由于溶液濃度過高而造成標本的腐蝕。

3.1.4染色液濃度和染色時間也要根據材料的大小進行確定。在染色過程中要保持緊密的觀察，對于染色時間及染色程度進行準確的把握，避免染色過度現象的發生。

3.2胎兒骨骼染色透明標本的作用分析 在傳統的教學模式中，只是單純的局限于對傳統理論及解剖實驗的講解，對于在保持機體完整狀態下進行的骨骼結構形態觀察嚴重缺乏，因此對學生的學習帶來了極大地不便。胎兒骨骼染色透明標本的設計及制作，為現代胚胎學的醫學影像學研究和骨骼學研究以及解剖學研究等方面，提供出了一套直觀真實的形態學資料。并在實踐教學中，通過同臨床影像學資料的對比，使得教學手段得到了極大的豐富，有效的提高學生們的學習積極性，并促使其對于胎兒骨骼結構的位置關系和形態有了一更為直觀的認識，有效的提高了教學效果；除此之外，該透明標本還能夠長期保存，可供展覽使用。

參考文獻：

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[3]涂甸珍，楊兵，涂勤.淺談一種制作透明胎兒標本的方法[J].四川解剖學雜志，2014，02：67-69.

[4]劉萬勝，黃明輝，劉力華.新生兒骨骼染色透明標本的制作方法[J].衛生職業教育，2004，14：92.編輯/金昊天