膀胱尿路上皮癌組織中E盒結(jié)合鋅指蛋白2、E-鈣黏附蛋白的表達(dá)變化及其意義

鐘曉健，黃洪才，葉東明，韓躍輔，方海林，彭瀲，陳清江，潘斌

( 1粵北人民醫(yī)院，廣東韶關(guān)512000；2 暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院)

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膀胱尿路上皮癌組織中E盒結(jié)合鋅指蛋白2、E-鈣黏附蛋白的表達(dá)變化及其意義

鐘曉健1，黃洪才1，葉東明1，韓躍輔1，方海林1，彭瀲1，陳清江1，潘斌2

( 1粵北人民醫(yī)院，廣東韶關(guān)512000；2 暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院)

目的 觀察膀胱尿路上皮癌組織中E盒結(jié)合鋅指蛋白2(ZEB2)和 E-鈣黏附蛋白(E-cadherin)的表達(dá)變化，并探討其意義。方法 選取57例份膀胱尿路上皮癌患者的腫瘤組織標(biāo)本為觀察組,15例份正常膀胱組織標(biāo)本為對(duì)照組，采用免疫組化SP法檢測兩組ZEB2和E-cadherin蛋白。分析ZEB2、E-cadherin蛋白表達(dá)與膀胱尿路上皮癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系及二者表達(dá)的相關(guān)性。 結(jié)果 觀察組、對(duì)照組ZEB2蛋白表達(dá)陽性率分別為50.9%(29/57)、13.3%(2/15)，二者相比，P<0.05。觀察組、對(duì)照組E-cadherin蛋白表達(dá)陽性率分別為33.3%(19/57)、80%(12/15)，二者相比，P<0.05。ZEB2蛋白表達(dá)與膀胱尿路上皮癌患者TNM分期、是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)，P均<0.05。E-cadherin 蛋白表達(dá)與膀胱尿路上皮癌患者病理分級(jí)、TNM分期有關(guān)，P均<0.05。Spearman等級(jí)相關(guān)性分析表明膀胱尿路上皮癌組織中ZEB2、E-cadherin蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0. 611，P=0.000)。結(jié)論 膀胱尿路上皮癌組織中ZEB2蛋白高表達(dá)、E-cadherin蛋白在膀胱尿路上皮癌組織中低表達(dá)。ZEB2、E-cadherin的異常表達(dá)可能與膀胱尿路上皮癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。

膀胱尿路上皮癌；膀胱腫瘤；E盒鋅指結(jié)合蛋白2；E-鈣黏附蛋白

膀胱尿路上皮癌是最常見的膀胱癌類型[1,2]。膀胱癌的生物學(xué)特性為易復(fù)發(fā)、侵襲及轉(zhuǎn)移。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)[3]在腫瘤細(xì)胞侵襲和遷移有著重要作用E-cadherin在維持正常上皮組織完整性及抑制細(xì)胞離散等方面起重要作用，可促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。E盒鋅指結(jié)合蛋白2(ZEB2)通過與E-cadherin啟動(dòng)子區(qū)的E盒結(jié)合，抑制E-cadherin蛋白的表達(dá)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲[4,5]。有報(bào)道顯示ZEB2 在多種腫瘤組織(結(jié)腸癌、胃癌、乳癌等)中促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移[6,7]。但ZEB2蛋白在膀胱尿路上皮癌組織中的表達(dá)相關(guān)研究報(bào)道較少。本研究觀察了膀胱尿路上皮癌組織中ZEB2和 E-cadherin的表達(dá)變化，并分析其與膀胱尿路上皮癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系，為膀胱尿路上皮癌的早期診斷、預(yù)后判斷和治療提供新思路。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇我院2012年5月～2014年6月間收治住院的57例膀胱尿路上皮癌患者，患者中男50 例、女7 例；年齡 33～88 (57.4 ±14.3)歲；腫瘤分期Ta-121例，T2～436例，57例患者根據(jù)分化程度分為低分化者(G1期)23例、高分化者(G2、G3期)34 例。分別取膀胱尿路上皮癌組織標(biāo)本57例份為觀察組，另選擇15例臨床診斷為良性前列腺增生患者，男7例、女8例，年齡56～81(68.2 ± 7.2)歲；取15例份正常膀胱組織標(biāo)本為對(duì)照組。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2 ZEB2和E-cadherin蛋白檢測方法 所有標(biāo)本均經(jīng)4%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，5 μm連續(xù)切片。采用SP法檢測標(biāo)本中ZEB2和E-cadherin蛋白，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。ZEB2蛋白以細(xì)胞的胞核和(或)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性；E-cadherin以細(xì)胞胞膜和(或)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。每張切片隨機(jī)取5個(gè)400倍視野，陽性判定以陽性細(xì)胞數(shù)及染色強(qiáng)度綜合判定。陽性細(xì)胞百分比積分按視野內(nèi)陽性細(xì)胞所占總細(xì)胞數(shù)的比例計(jì)分，無陽性細(xì)胞計(jì)0分，1%～25%計(jì)1分， 26%～50%計(jì)2分，51%～75%計(jì)3分，76%～100%計(jì)4分；染色強(qiáng)度無著色計(jì)0分，淺黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，棕褐色計(jì)3分；二者相加，<2分為陰性，≥2分為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料采用表示，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，Spearman等級(jí)相關(guān)分析法進(jìn)行相關(guān)性分析。 P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組ZEB2和E-cadherin蛋白表達(dá)比較ZEB2蛋白染色主要位于細(xì)胞質(zhì)，也可出現(xiàn)細(xì)胞核，呈淺黃色至棕褐色顆粒。觀察組、對(duì)照組ZEB2蛋白表達(dá)陽性率分別為50.9%(29/57)、13.3%(2/15)，二者相比，P<0.05。E-cadherin蛋白染色主要位于細(xì)胞膜，觀察組、對(duì)照組E-cadherin蛋白表達(dá)陽性率分別為33.3%(19/57)、80%(12/15)，二者相比，P<0.05。

2.2ZEB2和E-cadherin蛋白表達(dá)與膀胱尿路上皮癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系ZEB2蛋白表達(dá)與膀胱尿路上皮癌患者腫瘤TNM分期、是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)，P均<0.05；而與年齡、性別差異均無關(guān)，P均>0.05。E-cadherin蛋白表達(dá)與膀胱尿路上皮癌患者病理分級(jí)、TNM分期有關(guān)，P均<0.05；而與年齡、性別差異、是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況均無關(guān)，P均>0.05。見表1。

表1 ZEB2、E-cadherin蛋白表達(dá)與膀胱尿路上皮癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 ZEB2和及E-cadherin蛋白表達(dá)的相關(guān)性 Spearman等級(jí)相關(guān)性分析表明膀胱尿路上皮癌組織中ZEB2、E-cadherin蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.611，P=0.000)。

3 討論

ZEB2基因?qū)儆贓盒結(jié)合鋅指蛋白基因家族，該家族參與脊椎動(dòng)物的胚胎發(fā)育，其通過調(diào)控EMT過程而參與腫瘤發(fā)生和發(fā)展。已證實(shí)EMT參與腫瘤細(xì)胞的浸潤，并在腫瘤轉(zhuǎn)移中起著關(guān)鍵作用。EMT受轉(zhuǎn)錄抑制子如(ZEBl、ZEB2、Snail和Slug)等調(diào)控，ZEB2與E-cadherin基因啟動(dòng)子上[CACCT(G)]結(jié)合，抑制其轉(zhuǎn)錄和翻譯，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生EMT，促進(jìn)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移[4, 8]。有報(bào)道顯示ZEB2 在多種腫瘤組織(結(jié)腸癌、胃癌、乳腺癌等)中促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移[6,7]。然而，ZEB2蛋白在膀胱尿路上皮癌組織中的表達(dá)相關(guān)研究報(bào)道尚少。

E-cadherin蛋白是EMT中的關(guān)鍵因子，對(duì)維持正常上皮細(xì)胞極性、組織完整性及抑制細(xì)胞離散起重要作用，其表達(dá)下降促進(jìn)EMT的進(jìn)展，導(dǎo)致惡性腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移[9～10]。本研究結(jié)果顯示，E-cadherin蛋白的表達(dá)在膀胱癌組織分化程度、TNM臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即隨惡性腫瘤的有淋巴結(jié) 轉(zhuǎn)移、臨 床 分 期 越 晚 和 分 化 程 度 越 差，E-cadherin蛋白陽性表達(dá)率明顯下調(diào)或缺失，與陳梅香等[11]報(bào)道E-cadherin蛋白的表達(dá)下調(diào)或缺失與膀胱癌的分化程度和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的觀點(diǎn)一致。

本研究結(jié)果顯示,ZEB2蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì)，在正常膀胱組織及膀胱癌組織中的陽性表達(dá)率分別為13.3%(2/15)和50.9%(29/57)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與國內(nèi)學(xué)者報(bào)道ZEB2在卵巢癌組織中高表達(dá)結(jié)果一致[10]，其發(fā)現(xiàn)在卵巢癌和正常卵巢組織中ZEB2蛋白的陽性表達(dá)率分別為49.2%和30.8%，ZEB2 蛋白的表達(dá)與 EOC 病理分型、FIGO 分期、T 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，認(rèn)為其促進(jìn)卵巢癌的發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移。

另有研究發(fā)現(xiàn)在肺癌、肝癌等腫瘤，淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移灶中ZEB1和ZEB2表達(dá)升高，E-cadherin表達(dá)降低，兩者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，亦認(rèn)為促進(jìn)轉(zhuǎn)移瘤生長[12]。本研究中，ZEB2蛋白與E-cadherin蛋白兩者在膀胱癌組織表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，我們認(rèn)為可能原因?yàn)閆EB2通過與E-cadherin啟動(dòng)子區(qū)的E-box結(jié)合，調(diào)控E-cadherin等細(xì)胞黏附分子表達(dá)，抑制其表達(dá)，降低膀胱正常細(xì)胞與細(xì)胞之間、膀胱癌細(xì)胞與組織基質(zhì)之間黏附力，而促進(jìn)膀胱癌浸潤和轉(zhuǎn)移[4,6]。

本組57例膀胱癌組織中，ZEB2蛋白和E-cadherin 蛋白表達(dá)與腫瘤侵襲、TNM分期有關(guān)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，肌層浸潤性膀胱癌表達(dá)顯著高于非肌層浸潤性膀胱癌；轉(zhuǎn)移性膀胱癌(包括淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和/或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移)組織中ZEB2蛋白表達(dá)要顯著高于無轉(zhuǎn)移性膀胱癌，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的膀胱癌中組織ZEB2蛋白高表達(dá)，說明其表達(dá)有可能促進(jìn)腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，與既往相關(guān)研究報(bào)道相符[6, 13]。王慶海等[14]研究發(fā)現(xiàn)卵巢癌臨床分期增加，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者陽性表達(dá)率遠(yuǎn)高于無淋巴轉(zhuǎn)移者。ZEB2在膀胱癌中過表達(dá)，與膀胱癌轉(zhuǎn)移和臨床分期密切相關(guān)，表明ZEB2在膀胱癌轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用，促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，有可能成為評(píng)價(jià)膀胱癌發(fā)展、轉(zhuǎn)移的一個(gè)新的指標(biāo)。另有學(xué)者[13]研究發(fā)現(xiàn)ZEB2在膀胱癌過表達(dá)與患者預(yù)后有關(guān)，認(rèn)為其可介導(dǎo)腫瘤發(fā)生EMT，另有抗癌細(xì)胞調(diào)亡作用。我們認(rèn)為ZEB2作為轉(zhuǎn)錄因子，參與了膀胱癌發(fā)生、發(fā)展，并可作為預(yù)后評(píng)判指標(biāo)及膀胱癌治療新的干預(yù)靶點(diǎn)，為臨床診治膀胱癌提供嶄新的思路。

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Expression and significance of ZEB2 and E-cadherin protein in urothelial carcinoma of urinary bladder

ZHONGXiaojian1,HUANGHongcai,YEDongming,HANYuefu,FANGHailin,PENGLian,CHENQingjiang,PANBin

(1YuebeiPeople′sHospital,Shaoguan512000,China)

Objective To investigate the expression and clinical significance of E-box binding zinc finger protein 2 (ZEB2) and E-cadherin in urothelial carcinoma of urinary bladder. Methods The protein expression of ZEB2 and E-cadherin from 57 cases of tumor tissue specimens in patients with bladder urothelial carcinoma (observation group) and 15 cases of normal bladder tissue specimens (control group) was detected by immunohistochemistry, and the relationships between the expression of ZEB2 and E-cadherin and clinicopathological features of bladder urothelial carcinoma as well as the correlation between them were investigated.Results The positive expression rates of ZEB2 in the observation group and the control group were 50.9%(29/57)and 13.3% (2/15), respectively (P<0.05). The positive expression rates of E-cadherin in the observation group and the control group were 80% (12/15) and 33.3% (19/57), respectively (P<0.05). The expression of ZEB2 protein was correlated with TNM staging and lymph node metastasis of bladder urothelial carcinoma, and the expression of E-cadherin protein was correlated with pathological grade and TNM stages of bladder urothelial carcinoma (allP<0.05). Spearman rank correlation analysis showed that the expression of ZEB2 and E-cadherin protein in bladder urothelial carcinoma was negatively correlated (r=-0. 611,P=0.000).Conclusion ZEB2 protein is highly expressed and E-cadherin protein is low expressed in patients with urothelial carcinoma of urinary bladder, and the abnormal expression of ZEB2 and E-cadherin may be related to the occurrence and development of bladder urothelial carcinoma.

urothelial carcinoma of urinary bladder; urinary bladder neoplasms; E-box binding zinc finger protein; 2E-cadherin

廣東省自然科學(xué)基金-博士啟動(dòng)項(xiàng)目(2015A030310250)；廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)研究基金項(xiàng)目(A2015557)； 韶關(guān)市醫(yī)藥衛(wèi)生科研計(jì)劃項(xiàng)目(Y14018)。

鐘曉健(1982-)，男，碩士學(xué)位，主要研究方向?yàn)榘螂装┗A(chǔ)研究。E-mail: zhongxiaojian2016@126.com

簡介：潘斌(1983-)，男，博士學(xué)位，主要研究方向泌尿系腫瘤基礎(chǔ)與臨床研究。E-mail： urol8518@126.com

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.39.003

R737

A

1002-266X(2016)39-0009-03

2016-07-23)