Fn14-shRNA慢病毒載體的制備

于 濤，楊云峰，李 兵，陳 凱，朱 輝，張明珠，趙有光，俞光榮

同濟大學附屬同濟醫院骨科，上海 200065

Fn14-shRNA慢病毒載體的制備

于 濤，楊云峰，李 兵，陳 凱，朱 輝，張明珠，趙有光，俞光榮

同濟大學附屬同濟醫院骨科，上海 200065

目的 構建Fn14-shRNA慢病毒載體，以進一步進行動物實驗，研究Fn14在骨肉瘤中的表達和作用。方法 使用RNA干擾技術，構建Fn14干擾載體、病毒包裝、感染細胞，并進行鑒定。結果 Fn14-shRNA干擾質粒單酶切驗證陽性，測序結果與設計完全一致，干擾組Fn14在穩轉細胞株中表達下調。結論 成功構建了Fn14-shRNA慢病毒載體，為進一步從分子水平探討Fn14在骨肉瘤中的生物學作用奠定了基礎。

骨肉瘤；細胞表面受體成纖維細胞生長因子誘導14；RNA干擾；慢病毒

細胞表面受體成纖維細胞生長因子誘導14 （Fn14）是一種Ⅰ型跨膜蛋白，最初以腫瘤壞死因子樣細胞凋亡弱誘導劑（TWEAK）受體的身份被人們發現。經證實，TWEAK與Fn14結合后可激活下游通路，進而誘導某些腫瘤細胞凋亡[1]，促進腫瘤細胞生存和增殖[2]，提高腫瘤細胞侵襲力[3]，誘導腫瘤血管的形成[4]，促炎性反應并藉此通過炎性遞質的調控促進腫瘤播散和轉移[5-6]。Fn14在乳腺癌、神經膠質瘤、腸腺癌和肝癌等多種惡性腫瘤中異常表達[7-10]，且在其配體TWEAK表達量很低甚至不表達的情況下亦可激活下游通路[11]，發揮其生物學作用，故Fn14是一個與很多惡性腫瘤發生相關的關鍵分子。因此它可能也在骨肉瘤的發生、發展中發揮重要作用，是一種潛在的治療骨肉瘤的新型分子靶向。然而，Fn14在骨肉瘤中是否表達異常、具有何種生物學作用等卻未見報道。……