SNCA基因多態性與帕金森病認知障礙的相關性分析*

宋天琦，白 洋，閆 旭

(1.北華大學附屬醫院神經內三科，吉林吉林 132011；2.吉林大學第一醫院超聲科，長春 130021；3.吉林大學第一醫院病理科，長春 130021)

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SNCA基因多態性與帕金森病認知障礙的相關性分析*

宋天琦1，白 洋2，閆 旭3

(1.北華大學附屬醫院神經內三科，吉林吉林 132011；2.吉林大學第一醫院超聲科，長春 130021；3.吉林大學第一醫院病理科，長春 130021)

目的 對帕金森病(PD)患者α-突觸核蛋白(SNCA)rs356200和rs356165位點的多態性進行研究，探討SNCA基因多態性與PD認知障礙的相關性。方法 選擇2014年6月至2015年12月該院神經內科120例PD患者(PD組)和120例健康者(對照組)作為研究對象，PD患者根據是否有認知功能障礙分為認知障礙組和非認知障礙組。對各組患者rs356200及rs356165等位基因頻率和基因型進行研究。結果 PD組和對照組rs356200等位基因頻率比較差異有統計學意義(P<0.05)，PD組和對照組rs356200 G/G、A/A和A/G基因型比較差異有統計學意義(P<0.05)。PD組和對照組rs356165等位基因頻率比較差異無統計學意義(P>0.05)，PD組和對照組rs356165 G/G、A/A和A/G基因型比較差異有統計學意義(P<0.05)。PD認知障礙組和非認知障礙組rs356200及 rs356165等位基因頻率和基因型比較差異均無統計學意義(P>0.05)。結論 PD的發病和SNCA基因rs356200和rs356165位點的多態性有關，PD患者的認知功能障礙和SNCA基因rs356200和rs356165位點的多態性沒有顯著相關性。

α-突觸核蛋白；基因多態性；帕金森病；認知功能障礙

帕金森病(Parkinson′s disease,PD)的發病機制尚不十分清楚，目前認為PD的發病可能和免疫/炎癥、氧化應激、氨基酸毒性以及線粒體功能異常等多種機制有關，是在年齡老化的情況下遺傳因素和環境因素共同作用引起的[1-2]。在遺傳方面，發現了一系列的PD致病基因，α-突觸核蛋白(α-synuclein gene polymorphism,SNCA)基因是PD的致病基因之一，PD的病理改變是由SNCA蛋白聚集而成的小體構成，家族性的PD的發病和SNCA基因的重復突變和點突變有關，散發性的PD和SNCA基因關系也比較密切[3-4]，SNCA基因的多態性和PD患者的認知功能也有一定關系[5-6]。SNCA基因的多個多態位點(rs3822086、rs1372525、rs356165等)和PD的發病有關，但研究結果不盡相同。本文對PD患者SNCA基因rs356200和rs356165位點的多態性進行研究，探討SNCA基因rs356200和rs356165位點的多態性與PD認知障礙的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年6月至2015年12月北華大學附屬醫院神經內科120例PD患者(PD組)和體檢中心健康體檢的120例健康者(對照組)作為研究對象，PD組根據是否有認知功能障礙分為認知障礙組和非認知障礙組；PD組男67例，女53例，年齡(61.34±6.7)歲；對照組男61例，女59例，年齡(60.31±8.1)歲，對照組和PD組患者性別和年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。排除標準：有精神病病史者，有顱內器質性疾病者，有肝、腎、心、肺嚴重疾病者，有血管性癡呆等可能引起認知功能異常者。

1.2 方法

1.2.1 認知功能評估 所有研究對象均進行MoCA評估認知功能，根據MoCA評估結果將PD患者分為認知障礙組和非認知障礙組，認知功能障礙為MoCA評分小于26分，認知功能正常為MoCA評分大于或等于26分。

1.2.2 rs356200和rs356165基因型測定 采集受試者外周血，采用氯仿法提取患者外周血基因組DNA，根據SNCA基因的rs356200和rs356165位點兩側序列，用Primer5.0軟件設計引物，采用聚合酶鏈反應(PCR)進行擴增，總反應體系為20 μL，PCR反應為95 ℃預變性2 min，95 ℃、60 ℃和72 ℃各30 s，72 ℃延伸5 min，共40個循環。將PCR酶切產物進行瓊脂糖凝膠電泳分離確定rs356200和rs356165基因型。

1.3 觀察指標 觀察PD組和對照組rs356200及rs356165等位基因頻率和基因型，認知障礙組和非認知障礙組rs356200及rs356165等位基因頻率和基因型 。

2 結 果

2.1 rs356200和rs356165電泳分型結果 rs356200位點有3個基因型：G/G、A/A、A/G，A/A純合子不能被酶切開，只有1個229 bp基因型片段，G/G純合子被切成64 bp和165 bp 2個基因型片段，A/G雜合子被切為64、165 bp和229 bp 3個片段(圖1)。rs356165位點有3個基因型：G/G、A/A、A/G，A/A純合子不能被酶切開，只有1個297 bp基因型片段，G/G純合子被切成139 bp和158 bp 2個基因型片段，A/G雜合子被切為139、158 bp和297 bp 3個片段(圖2)。

標本1:A/A純合子；標本2：G/G純合子；標本3和標本4：A/G雜合子。

圖1 rs356200部分電泳圖

標本1：A/G雜合子；標本2：A/A純合子；標本3：G/G純合子。

圖2 rs356165部分電泳圖

2.2 PD組和對照組rs356200等位基因頻率和基因型比較 PD組和對照組rs356200等位基因頻率比較差異有統計學意義(P<0.05)，PD組和對照組rs356200 G/G、A/A和A/G基因型比較差異有統計學意義(P<0.05)，表明PD的發病可能和rs356200基因多態性有關，見表1。

2.3 PD組和對照組rs356165等位基因頻率和基因型比較 PD組和對照組rs356165等位基因頻率比較差異無統計學意義(P>0.05)，PD組和對照組rs356165 G/G、A/A和A/G基因型比較差異有統計學意義(P<0.05)。表明PD的發病可能和rs356165基因多態性有關，見表2。

2.4 認知障礙組和非認知障礙組rs356200等位基因頻率和基因型比較 認知障礙組和非認知障礙組rs356200等位基因頻率和基因型比較差異均無統計學意義(P>0.05)，表明PD認知功能障礙和rs356200基因多態性沒有相關性，見表3。

表1 PD組和對照組rs356200等位基因頻率和基因型比較[n(%)]

表2 PD組和對照組rs356165等位基因頻率和基因型比較[n(%)]

表3 認知障礙組和非認知障礙組rs356200等位基因頻率和基因型比較[n(%)]

2.5 認知障礙組和非認知障礙組rs356165等位基因頻率和基因型比較 認知障礙組和非認知障礙組rs356165等位基因頻率和基因型比較差異均無統計學意義(P>0.05)，表明PD認知功能障礙和rs356165基因多態性沒有相關性，見表4。

表4 認知障礙組和非認知障礙組rs356165等位基因頻率和基因型比較[n(%)]

3 討 論

SNCA基因是PD的致病基因，SNCA蛋白相對分子質量比較小，在神經可塑性、信號傳遞和細胞分化等的調節方面發揮一定作用，SNCA蛋白的異常積聚由SNCA基因的重復突變或者點突變引起，異常積聚的SNCA蛋白使神經細胞死亡或者發生功能障礙，引起大腦萎縮[7]。SNCA蛋白聚集形成的路易小體是PD的主要病理特征，SNCA基因的位點多態性和基因重復序列能夠使SNCA蛋白的表達水平升高，影響PD的發病。SNCA基因重復序列越長越容易引起PD的發生，SNCA基因的多個位點的多態性和散發性PD的發病關系密切，如rs3857059、rs3733449、rs11931074和rs356165等多種基因位點，SNCA基因位點的多態性增加PD的發病風險[8]。本研究對北華大學附屬醫院神經內科120例PD患者和120例健康者作為研究對象，PD患者根據是否有認知功能障礙分為認知障礙組和非認知障礙組。對各組患者rs356200及rs356165等位基因頻率和基因型進行研究。結果發現：PD組和對照組rs356200等位基因頻率比較差異有統計學意義，PD組和對照組rs356200 G/G、A/A和A/G基因型比較差異有統計學意義。PD組和對照組rs356165等位基因頻率比較差異無統計學意義，PD組和對照組rs356165 G/G、A/A和A/G基因型比較差異有統計學意義。表明PD的發病和SNCA基因rs356200和rs356165位點的多態性有關。基因的多態性和地區差異等有關，不同地區患者的基因多態性可能不同，本文對我國漢族人群的SNCA基因rs356200和rs356165位點的多態性進行研究，表明在中國漢族人群中，SNCA基因rs356200和rs356165位點的多態性和PD的發病有關。

PD不僅存在運動功能障礙，還包含癡呆、感覺障礙、認知功能障礙等其他非運動癥狀[9]，其中癡呆和認知功能障礙是PD比較常見的非運動癥狀，PD的認知功能障礙的發病機制不清楚[10-11]。SNCA基因除了和PD的發病易感性有關，和PD的認知功能也存在一定關系，PD患者中認知功能障礙是一種比較常見的現象，認知功能障礙和PD的路易小體病理改變關系密切。PD患者邊緣系統和皮層的SNCA聚集形成路易小體，路易小體的形成是PD認知功能障礙的病因之一，SNCA基因可能通過調節多巴胺的水平影響患者的記憶功能[12-13]。本研究通過對SNCA基因rs356200和rs356165位點的多態性與PD認知障礙的相關性進行研究，結果發現:帕認知障礙組和非認知障礙組rs356200等位基因頻率和基因型比較差異均無統計學意義，帕認知障礙組和非認知障礙組rs356165等位基因頻率和基因型比較差異均無統計學意義，表明PD認知功能障礙和SNCA基因rs356200和rs356165位點的多態性沒有相關性。關于PD認知功能障礙和SNCA基因多態性相關性的研究在不同國家和不同地區結果不同[14-15]，因本研究是對中國漢族人群進行的研究，且樣本量較少，為進一步明確SNCA基因rs356200和rs356165位點的多態性與PD認知障礙的相關性，需要進行大樣本、多種族、多地區進行進一步的研究。

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Analysis on correlation between SNCA gene polymorphism and cognitive disorders of Parkinson′s disease*

SongTianqi1,BaiYang2,YanXu3

(1.ThirdDepartmentofNeurology,AffiliatedHospitalofNorthChinaUniversity,Jilin,Jilin132011,China； 2.DepartmentofUltrasound,theFirstHospitalofJilinUniversity,Changchun,Jilin130021,China; 3.DepartmentofPathology,theFirstHospitalofJilinUniversity,Changchun,Jilin130021,China)

Objective To study α- synuclein(SNCA)rs356200 and rs356165 loci polymorphism in the patients with Parkinson′s disease(PD)and to investigate the correlation between SNCA gene polymorphism and PD cognitive impairment.Methods One hundred and twenty cases of PD in our hospital from June 2014 to December 2015 and 120 heaalthy people were selected as the research subjects.The PD cases served as the PD group and 120 healthy subjects as control group.The PD cases were also divided into the cognitive impairment group and non-cognitive impairment group according to the cognitive impairment.The rs356200 and rs356165 allele frequencies and genotype in each group were studied.Results The rs356200 allele frequency had statistical difference between the PD group and control group(P<0.05),the rs356200 G/G,A/A and A/G genotype had statistical difference between the PD group and control group(P<0.05).The rs356165 allele frequency had no statistical difference between the PD group and the control group(P>0.05),the rs356165 G/G,A/A and A/G genotype had statistical difference between the PD group and control group(P<0.05).The rs356200 and rs356165 allele frequencies and genotype had no statistical difference between the cognitive impairment group and non-cognitive impairment group(P>0.05).Conclusion The morbidity of PD is related to SNCA gene rs356200 and rs356165 sites polymorphism.PD cognitive dysfunction has no significant correlation with SNCA gene rs356200 and rs356165 loci polymorphism.

α- synuclein gene polymorphism;Parkinson′s disease;cognitive dysfunction

??·臨床研究

10.3969/j.issn.1671-8348.2016.33.013

吉林省科技發展計劃項目(20130522018JH)。 作者簡介：宋天琦(1979-),碩士，主治醫師，主要從事腦血管病方面的研究。

R749.1

A

1671-8348(2016)33-4650-03

2016-04-04

2016-05-17)

許魏(1984-)，本科，主治醫師，主要從事腦血管病及認知功能方面的研究。△