CYP2D6基因多態性對接受他莫昔芬治療ER陽性乳腺癌患者預后的影響

于洋，尤偉,梁棟,呂峰,楊秦蘅,張斌

(鄭州市人民醫院，鄭州450003)

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CYP2D6基因多態性對接受他莫昔芬治療ER陽性乳腺癌患者預后的影響

于洋，尤偉,梁棟,呂峰,楊秦蘅,張斌

(鄭州市人民醫院，鄭州450003)

目的 探討細胞色素P4502D6(CYP2D6)基因多態性對接受他莫昔芬(TAM)治療ER陽性乳腺癌患者預后的影響。方法 采用PCR法檢測2010年3月～2011年3月106例接受TAM治療的ER陽性乳腺癌患者外周血CYP2D6基因型，分別采用χ2檢驗和Logistic回歸模型分析CYP2D6基因多態性與患者臨床參數和預后的關系。結果 106例ER陽性乳腺癌患者中，CYP2D6基因Wt/Wt型48例，占45.3%；Wt/*10型42例，占39.6%；*10/*10型16例，占15.1%。CYP2D6基因型與患者的年齡(χ2=0.391，P=0.822)、腫瘤直徑(χ2=2.544，P=0.280)、組織類型(χ2=3.600，P=0.165)、TNM分期(χ2=2.785，P=0.246)以及腋窩淋巴結轉移(χ2=2.997，P=0.223)無相關性差異。Logistic回歸模型分析，CYP2D6基因*10/*10型較Wt/Wt型和Wt/*10型對接受TAM 治療ER陽性乳腺癌患者3年、5年的無病生存有較高的風險。結論 CYP2D6基因*10/*10型ER陽性乳腺癌患者接受TAM治療預后較差，臨床可在TAM治療前行CYP2D6基因多態性檢測以便合理用藥。

乳腺癌；細胞色素P4502D6；基因多態性；他莫昔芬；雌激素受體

內分泌綜合治療是降低雌激素受體(ER)陽性乳腺癌患者復發的一種重要治療方法，其中他莫昔芬(TAM)作為一種常見的人工合成非膽固醇類抗雌激素藥物，長期以來被廣泛應用[1]。然而，TAM需要經過肝臟酶的轉化才能夠發揮較強的抗雌激素活性[2]。細胞色素P4502D6(CYP2D6)是TAM代謝過程中的一種關鍵作用酶，位于22號常染色體上[3]。最近有研究顯示[4]，CYP2D6存在70～100種基因突變位點，一些位點的突變可導致酶活性的變化，使機體呈現出對藥物反應的個體化差異。為進一步了解CYP2D6基因多態性對接受TAM治療ER陽性乳腺癌患者預后的影響，本研究對106例接受TAM治療ER陽性乳腺癌患者的CYP2D6基因多態性進行調查。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 納入標準：①女性；②術后組織標本均經病理學確診為原發性乳腺惡性腫瘤；③免疫組化染色顯示為ER陽性；④TNM分期為Ⅰ～Ⅲ期；⑤均行乳腺癌根治術，術后接受統一放療治療，并輔以TAM綜合治療，術前未接受任何化療方案。選擇2010年3月～2011年3月鄭州市人民醫院收治符合標準的乳腺癌患者106例，年齡36～75歲，中位年齡58歲；其中腫瘤直徑<2 cm 54例、≥2 cm 58例；導管癌81例，小葉癌25例；TNM分期Ⅰ期19例,Ⅱ期51例,Ⅱ期36例；無腋窩淋巴結轉移18例,腋窩淋巴結轉移88例。

1.2 樣本采集及基因組DNA提取 所有患者于術后第2天清晨采集3 mL空腹靜脈血，EDTA抗凝，以3 000 r/min離心10 min分離血漿；采用苯酚-氯仿抽提法對基因組DNA進行提取，DNA樣品于-80 ℃冰箱保存待測。

1.3 CYP2D6基因多態性檢測 根據NCBI GenBank數據庫中CYP2D6的DNA序列，設計擴增引物。CYP2D6上游引物5′-CCATTTGGTAGTGAGGCAGGTAT-3′，下游引物5′-CACCATCCATGTTTGCTTCTGGT-3′，由上海生工生物工程股份有限公司進行合成。PCR反應體系(20 μL )：基因組DNA(100 ng)2.0 μL，dNTP(2.5 mmol/L)1.0 μL，10×PCR緩沖液 2.0 μL，Taq DNA聚合酶(10 U/μL) 0.5 μL ，上下游引物(10 pmol/μL) 各1.0 μL，ddH2O 13.5 μL。PCR擴增條件：首先95 ℃ 15 min；然后95 ℃ 45 s、60 ℃ 30 s、72 ℃ 15 s，40個循環；最后72 ℃ 10 min，4 ℃保溫。取10 μL PCR產物加入HphⅠ限制性內切酶37 ℃作用1 h，然后取5 μL PCR產物進行 2.5% 瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下觀察條帶分布。

1.4 預后隨訪方法 術后患者均進行電話及門診隨訪，隨訪截止時間為2016年3月31日，記錄患者無病生存情況。

1.5 統計學方法 采用 SPSS17.0統計軟件。CYP2D6基因多態性與ER陽性乳腺癌患者臨床參數間的相關性采用行×列表的χ2檢驗，CYP2D6基因多態性與ER陽性乳腺癌患者無病生存期間的關系采用Logistic 回歸模型分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ER陽性乳腺癌患者CYP2D6基因多態性及其與臨床病理參數的關系 106例ER陽性乳腺癌患者中，CYP2D6基因Wt/Wt型48例，占45.3%；Wt/*10型42例，占39.6%；*10/*10型16例，占15.1%。CYP2D6基因型與患者的年齡(χ2=0.391，P=0.822)、腫瘤直徑(χ2=2.544，P=0.280)、組織類型(χ2=3.600，P=0.165)、TNM分期(χ2=2.785，P=0.246)以及腋窩淋巴結轉移(χ2=2.997，P=0.223)無明顯相關性。見表1。

表1 CYP2D6基因多態性與ER陽性乳腺癌患者臨床病理參數的關系

2.2 CYP2D6基因多態性與ER陽性乳腺癌患者預后的關系 106例ER陽性乳腺癌患者中，3年無病生存75例，5年無病生存69例。Logistic 回歸模型分析，CYP2D6基因*10/*10型較Wt/Wt型和Wt/*10型對接受 TAM 治療ER陽性乳腺癌患者3年、5年無病生存有較高的風險；而CYP2D6基因Wt/Wt型和Wt/*10型對患者無病生存的影響類似，差異無統計學意義。見表2。

表2 CYP2D6基因多態性與ER陽性乳腺癌患者無病生存期的關系

3 討論

在中國大部分女性乳腺癌患者呈ER陽性，而雌激素可通過與體內ER結合促進乳腺癌的發展[5]。TAM被認為是治療ER陽性乳腺癌的標準治療藥物，長期以來被證實可以降低ER陽性乳腺癌的復發率，延長患者的無病生存期[6，7]。但是，TAM本身是一種抗雌激素作用較弱的前體藥物，只有經過肝臟細胞色素P450酶(CYP450)作用才有轉化為具有較強抗雌激素活性的成分[8]。CYP450是一種以血紅蛋白為輔基的b族細胞色素超家族基因代謝酶，可使有毒性的脂溶性物質轉化為水溶性物質排除體外，在體內發揮解毒的作用，屬單加氧酶[9]。CYP2D6是CYP450家族中的一種，約占CYP450總量的4%，但能代謝約1/3的臨床藥物[10]。TAM經CYP2D6代謝為4-羥基TAM(4-OH-TAM)，后者與ER結合力是TAM藥物本身的100倍，在TAM為主的內分泌治療中發揮中重要作用[11]。熊萱等[12]對中國人群CYP2D6的基因多態性與乳腺癌患者TAM及其代謝物血藥濃度關系進行了Meta分析，結果顯示攜帶CYP2D6 *10/*10基因型患者的TAM活性代謝物血藥濃度明顯低于攜帶其他基因型患者；攜帶CYP2D6 *10/*10基因型患者的TAM血藥濃度低于攜帶CYP2D6 Wt/Wt基因型患者。而CYP2D6 Wt/Wt及CYP2D6 Wt/*10基因型攜帶患者間，TAM及其活性代謝物血藥濃度比較，差異無統計學意義，表明中國人群CYP2D6的基因多態型對乳腺癌患者體內TAM及其代謝物的濃度有影響。

目前，關于CYP2D6基因多態性對接受TAM治療ER陽性乳腺癌患者預后的影響還存在較大爭議[13，14]。魏影等[15]對2003～2008年收治的257例接受TAM治療乳腺癌患者的外周靜脈血或腫瘤組織石蠟切片CYP2D6基因多態性進行分析，研究CYP2D6*10基因型對接受TAM治療乳腺癌患者生存率相關性的影響，結果顯示各CYP2D6 *10基因型的臨床病理參數之間沒有相關性差異。在中國CYP2D6 *10/*10基因型對接受TAM治療乳腺癌患者的無病生存期和整體生存期的影響與CYP2D6 Wt/Wt和CYP2D6 Wt/*10基因型類似，不存在相關性，提示CYP2D6*10基因型與接受TAM治療乳腺癌患者的生存率之間沒有相關性。而肖剛等[16]對術后口服TAM內分泌治療的絕經后ER陽性乳腺癌患者CYP2D6基因多態性與TAM治療后生存情況的相關性進行調查，發現CYP2D6基因型為*10/*10的患者無復發生存期和無病生存期明顯短于基因型為*1/*10和*1/*1的患者，并未發現CYP2D6基因型為*1/*10和*1/*1的患者間長期生存情況有任何顯著性差異，提示CYP2D6*1/*10基因多態性與絕經后ER陽性乳腺癌患者的術后TAM內分泌治療的生存情況具有相關性，可能作為絕經后乳腺癌患者TAM療效和預后估計的臨床預測指標。本研究對106例ER陽性乳腺癌患者中CYP2D6基因型進行分析，其中Wt/Wt型48例，Wt/*10型42例，*10/*10型16例；CYP2D6基因型與患者的年齡、腫瘤直徑、組織類型、TNM分期以及腋窩淋巴結轉移無明顯相關性；Logistic回歸模型分析顯示，CYP2D6基因*10/*10型較Wt/Wt型和Wt/*10型對接受TAM治療ER陽性乳腺癌患者3年、5年無病生存有較高的風險；而CYP2D6基因Wt/Wt型和Wt/*10型對患者無病生存的影響類似，差異無統計學意義。

綜上所述，CYP2D6基因*10/*10型ER陽性乳腺癌患者接受TAM治療的預后較差，臨床可在采用TAM治療前進行CYP2D6基因多態性檢測，以便合理用藥。

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Effects of CYP2D6 gene polymorphism on prognosis of ER-positive breast cancer patients treated with tamoxifen therapy

YUYang,YOUWei,LIANGDong,LYUFeng,YANGQinheng,ZHANGBin

(ZhengzhouPeople′sHospital,Zhengzhou450003,China)

Objective To discuss the effects of cytochrome P4502D6 (CYP2D6) gene polymorphism on prognosis of estrogen receptor (ER)-positive breast cancer patients treated with tamoxifen (TAM) therapy. Methods From May 2010 to May 2012, CYP2D6 genotype was detected in 106 cases of ER-positive breast cancer patients treated with TAM therapy by PCR. The relationship between CYP2D6 polymorphism and clinical parameters and prognosis were analyzed byχ2test and Logistic regression model. Results In 106 cases of ER-positive breast cancer patients treated with TAM therapy, 48 cases of Wt/Wt type accounted for 45.3%, 42 cases of Wt/*10 type accounted for 39.6%, and 16 cases of *10/*10 type accounted for 15.1%.χ2test showed CYP2D6 genotype was not significantly correlated with age (χ2=0.391,P=0.822), tumor size (χ2=2.544,P=0.280), histology (χ2=3.600, P=0.165), TNM stage (χ2=2.785,P=0.246) and axillary lymph node metastasis (χ2=2.997,P=0.223). Logistic regression model showed compared with patients with Wt/Wt type and Wt/*10 type, patients with *10/*10 type had higher risk for 3-year, 5-year disease free survival of ER-positive breast cancer patients treated with TAM therapy. Conclusion The prognosis of *10/*10 type ER-positive breast cancer patients treated with TAM therapy is poor, and we can detect CYP2D6 polymorphism before TAM therapy to use drug rationally.

breast carcinoma; cytochrome P4502D6; gene polymorphism; tamoxifen; estrogen receptor

河南省科技計劃項目(142300410388)。

于洋(1980-)，男，碩士，主治醫師，主要研究方向為乳腺癌耐藥及乳腺炎癥因子。E-mail： yuyang6081@163.com

簡介：尤偉(1963-)，男，碩士，主任醫師，主要研究方向為乳腺癌耐藥及乳腺炎癥因子。E-mail: yw@yueh.me

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.42.005

R737.9

A

1002-266X(2016)42-0017-04

2016-07-28)