溫腎消癥湯治療腎虛血瘀型卵巢子宮內膜異位囊腫的作用機制探討

沈曉婷，張真真，萬貴平，鎖漉萱

(1.南京中醫藥大學附屬江蘇省中西醫結合醫院，江蘇 南京 210028；2.江蘇省中醫藥研究院，江蘇 南京 210029)

?

溫腎消癥湯治療腎虛血瘀型卵巢子宮內膜異位囊腫的作用機制探討

沈曉婷1，2，張真真1，2，萬貴平1，2，鎖漉萱1，2

(1.南京中醫藥大學附屬江蘇省中西醫結合醫院，江蘇 南京 210028；2.江蘇省中醫藥研究院，江蘇 南京 210029)

目的 探討溫腎消癥湯治療腎虛血瘀型卵巢子宮內膜異位囊腫的作用機制。方法 選擇異位囊腫直徑>3 cm的腎虛血瘀型卵巢子宮內膜異位囊腫手術患者30例作為治療組，于術前口服溫腎消癥湯治療3個月；選取卵巢子宮內膜異位囊腫手術患者(未經治療)15例作為空白對照組；手術行子宮肌瘤剝除患者14例作為對照組。采用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定不同組腹腔液中TNF-α、TGF-β1的表達水平并進行比較。結果 治療組、空白對照組中TNF-α、TGF-β1的表達水平均明顯高于對照組(P均<0.01)，治療組中表達水平明顯低于空白對照組(P<0.05)；治療組、空白對照組Ⅲ期、Ⅳ期患者TNF-α、TGF-β1表達水平比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。結論 溫腎消癥湯治療腎虛血瘀型卵巢子宮內膜異位囊腫可能的機制是通過抑制腹腔免疫因子TNF-α和TGF-β1的表達，阻礙子宮內膜異位癥的發展途徑，從而達到治療效果。

溫腎消癥湯；腎虛血瘀；子宮內膜異位癥；免疫調節

子宮內膜異位癥(endometriosis,EMs)是指具有活性的子宮內膜組織(腺體和間質)出現在子宮體以外的部位而導致的婦科疾病[1]。近年來EMs已成為育齡期婦女的常見病之一，發病率達10%～15%[2]，且有逐年升高的趨勢[3]。EMs的發病機制目前仍未完全闡明，但相關研究證實免疫因素在其發病中起重要作用，免疫調節已經成為研究的一大熱點?！皽啬I消癥湯”為江蘇省中西醫結合醫院院內處方，此方在臨床應用多年，已取得滿意的治療效果[4]，可有效緩解痛經和慢性盆腔痛，提高患者妊娠率。本研究從抑制免疫因子表達的角度探討了溫腎消癥湯對卵巢子宮內膜異位囊腫的作用機制，現將結果報道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇2014年2月—2015年2月在江蘇省中西醫結合醫院住院腎虛血瘀型卵巢子宮內膜異位囊腫患者30例作為治療組，異位囊腫直徑>3 cm，西醫診斷參照“子宮內膜異位癥的診斷與治療規范”[5]及《婦產科學》[6]，中醫辨證分型診斷標準參考《中藥新藥臨床研究指導原則》中腎虛血瘀證標準[7]。入選標準：年齡20～45歲，未絕經的非妊娠及非哺乳期婦女；3個月內均未使用任何性激素類藥物及避孕藥物；知情同意，志愿受試。排除合并心腦血管、肝、腎及造血系統等嚴重疾病者；原發性痛經，合并子宮腺肌癥、子宮肌瘤、盆腔感染、盆腔惡性腫瘤等婦科疾病者；合并有自身免疫性疾病及傳染性疾病者。終止和脫落標準：依從性差，不能堅持完成治療者；觀察中出現過敏、肝腎功能損傷等嚴重不良反應或病情加重，經診斷后認為必須終止試驗者。予溫腎消癥湯口服治療3個月，后于月經周期第7—14天至住院部行手術治療，排除脫落病例15例(服藥未滿3個月)，術后病理確診為卵巢子宮內膜異位囊腫13例，其中Ⅲ期7例，Ⅳ期6例，另2例術后病理為單純性囊腫。同時選取住院行手術治療的卵巢子宮內膜異位囊腫患者(未經藥物治療)15例作為空白對照組，Ⅲ期9例，Ⅳ期6例。選擇行子宮肌瘤剝除患者14例作為對照組。3組基本情況比較差異無統計學意義(P均>0.05)，具有可比性。見表1。

表1 3組基本情況比較±s)

1.2 研究方法 手術過程中在腹腔鏡下通過穿刺針抽取子宮直腸陷凹和子宮膀胱陷凹腹腔液5 mL，明顯血液污染的標本丟棄，2 000 r/min，4 ℃，離心10 min，取上清液分裝于EP管，-80 ℃冰箱保存待測，避免反復凍融。采用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定不同分組腹腔液中TNF-α、TGF-β1的表達，比較不同分組、不同分期中TNF-α、TGF-β1表達水平的差異。人TNF-α、TGF-β1ELISA試劑盒為美國eBioscience公司生產；酶標儀設置630 nm為校正波長濾光片，設置450 nm為檢測波長濾光片(美國thermo公司生產)。

2 結 果

2.1 腹腔液中TNF-α、TGF-β1水平比較 治療組、空白對照組TNF-α、TGF-β1水平均明顯高于對照組(P均<0.05)，治療組明顯低于空白對照組(P均<0.05)。見表2。

表2 腹腔液中TNF-α、TGF-β1水平比較

注：①與對照組比較，P<0.05；②與治療組比較，P<0.05。

2.2 治療組和空白對照組不同期別腹腔液中TNF-α、TGF-β1水平比較 治療組和空白對照組中Ⅲ期、Ⅳ期患者TNF-α、TGF-β1表達水平比較差異均無統計學意義。見表3。

表3 治療組和空白對照組腹腔液中TNF-α、TGF-β1水平比較

3 討 論

近年來，眾多中醫學者對EMs的病因病機進行了深入的探討，現一致認為其基本病機可歸納為“瘀血內阻”。同時瘀血的形成又與腎虛、氣滯、寒凝、熱灼、氣虛、濕熱、痰濕等因素密切相關。溫腎消癥湯是我院的經驗方，該方以“溫腎助陽、活血化瘀”為基本治療大法，以腎虛為本，血瘀為標，標本兼治。按照中醫理、法、方、藥的組方原則，精選生蒲黃、五靈脂、血竭、沒藥、黃芪、川斷、延胡索、川楝子八味藥組方而成。前期研究發現溫腎消癥湯治療腎虛血瘀型卵巢子宮內膜異位囊腫，能有效改善患者的痛經、中醫證候，降低血清CA125水平，且無明顯不良反應。為探討其可能的作用機制，本研究檢測了腹腔免疫因子TNF-α和TGF-β1在不同分組患者中的表達。

TNF-α是由中性粒細胞、活化的淋巴細胞、巨噬細胞、NK細胞分泌的一類多肽類蛋白 ，可介導多向性的炎癥反應和免疫調節，具有殺傷腫瘤細胞，調節免疫、抗感染等功能。TNF-α釋放過多或與其他細胞因子的關系失調時會引起機體的病理損傷[8]。研究發現TNF-α在EMs患者中高表達，通過介導免疫及炎癥反應，能促進子宮內膜間質細胞的分泌，有助于異位內膜的種植、生長及浸潤[9]。同時作為重要的血管生成因子，能促進新生血管的生成[10]，從而在EMs的種植、血管生成等多個方面起重要作用[11]。本研究中TNF-α在治療組、空白對照組中的表達水平均明顯高于對照組，同時在治療組中的表達水平明顯又低于空白對照組，與現有的研究理論相似。

TGF-β是一類多功能的多肽類抑制因子[12]，在誘導細胞凋亡、調控細胞周期、血管形成、細胞遷移及免疫應答等方面起著重要的調節作用[13]。研究表明TGF-β在異位內膜組織中的表達顯著高于在位內膜及正常內膜，提示TGF-β可能通過有效抑制NK細胞和巨噬細胞的活性，有利于EMs的局部種植[14]。同時研究證實TGF-β與盆腔粘連密切相關[15]。本研究中TGF-β1在治療組、空白對照組中的表達水平均明顯高于對照組，同時在治療組中的表達水平明顯又低于空白對照組，與現有的研究理論相符合。同時有報道顯示，TGF-β1水平與EMs的嚴重程度呈正相關[16]，但此次實驗中TGF-β1的表達與EMs的分期無明顯相關，大樣本的實驗有待進一步研究。

綜上所述，免疫因子TNF-α、TGF-β1在EMs的發展過程中具有一定作用，其可能是通過抑制腹腔免疫因子TNF-α和TGF-β1的表達，阻礙其發展途徑從而達到治療效果。但對溫腎消癥湯的作用機制和分子機制的研究仍待進一步深入。

[1] Bazot M,Darai E,Hourani R,et al.Deep pelvic Endometriosis MR imaging for diagnosis and prediction of extension of disease[J].Radiology,2004,232(2):379-389

[2] Vlahos NF,Kalampokas T,Fotiou S.Endometriosis and ovariancancer:a review[J].Gynecol Endoerinol,2010,26(3):213-219

[3] Schreinemacher MH,Backes WH,Slenter JM,et al.Towards endometriosis diagnosis by gadofosveset-trisodium enhanced magnetic resonance imaging[J].PLoS One,2012,7(3):e33241

[4] 荀愛華,萬貴平,邢玉霞,等.溫腎消癥湯聯合米非司酮治療子宮內膜異位癥的臨床療效觀察[J].四川中醫,2013,31(10):83-86

[5] 中華醫學會婦產科學分會.子宮內膜異位癥協作組.子宮內膜異位癥的診斷與治療規范[J].中華婦產科雜志,2007,42(9):645-648

[6] 謝幸,茍文麗.婦產科學[M].8版.北京:人民衛生出版社,2013：271

[7] 國家中醫藥管理局.中藥新藥臨床研究指導原則[S].北京:中國醫藥出版社,2002:240-241

[8] Lu D,Song H,Shi G.Anti-TNF-α treatment for pelvic pain associated with Endometriosis[J].Cochrane Library,2010,11(3):231-232

[9] Barrier BF.Immunology of endometriosis[J].Clin Obstet Gynecol,2010,53(2):397-402

[10] 杜海燕,宋芳,張琳.TNF-α及VEGF在子宮內膜異位癥中的表達研究[J].中國婦幼健康研究,2010,21(6):756

[11] Asante A,Taylor RN.Endometriosis:the role of neuroangiogenesis[J].Annual Review of Physiology,2011,73(2):163-182

[12] Kim JJ,Choi YM,Choung SH,et al.Analysis of the transforming growth factor b1 gene-509C/T polymorphism in patients with advanced-stage endometriosis[J].Fertility and Sterility,2010,93(7):2121-2124

[13] Ariaans M,Oude Munnink TH,Timmer-Basscha H,et al.Transforming growth factor(TGF)-β expression and activation mechanisms as potential targets for anti-tumor therapy and tumor imaging[J].Pharmacol Ther,2012,135(2):123-132

[14] 馮春蝶,王福玲,袁芳.等.IL-17、IL-6和TGF-β在子宮內膜異位癥患者組織的表達[J].中國免疫學雜志,2013,29(3):243-246

[15] Lian R,Chen Y,Xu Z,et al.Soluble transforming growth fa-ctor-beta1 receptor Ⅱmight inhibit transforming growth factor-beta-induced myofibroblast differentiation and improve ischemic cardiac function after myocardial infarction in rats[J].Coron Artery Dis,2010,21(6):369-377

[16] 周圍,佘立平,紀亞忠,等.MCP-1、HGF、TGF-β1在子宮內膜異位癥中的表達及意義[J].同濟大學學報：醫學版，2015,36(1):63-66

萬貴平，E-mail：wanguiping@263.net

江蘇省自然科學基金項目(BK20131457)；中國中醫科學院江蘇分院院級課題(JSBY1309)

10.3969/j.issn.1008-8849.2016.32.013

R711.7

B

1008-8849(2016)32-3575-03

2016-04-10