牛蒡子水提物中牛蒡苷和牛蒡苷元在大鼠體內的代謝和排泄研究

袁媛 張建奎 姜泓 劉麗 康廷國

摘要：目的對牛蒡子水提物中牛蒡苷和牛蒡苷元在大鼠體內的代謝和排泄物進行了研究，獲得藥物在大鼠體內的代謝和排泄情況。方法建立一種高效液相色譜方法，同時測定了牛蒡苷和牛蒡苷元在大鼠排泄物中的含量。結果尿液排泄為牛蒡苷和牛蒡苷元的主要排泄途徑。結論該方法準確、可靠。

關鍵詞：牛蒡子；代謝；排泄

中圖分類號：R2855文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（201.6）04-0057-04

牛蒡子為常用中藥。《中華人民共和國藥典》201.5年版收載為菊科植物牛蒡（Arctium lappa L）的干燥成熟果實[1]。從該藥材中提取得到的化學物質主要有木脂素類成分、萜類成分和揮發油類成分等[2-4]。查閱相關文獻，尚未發現對其代謝和排泄的相關研究，本文建立了一種高效液相色譜方法，同時測定了牛蒡苷和牛蒡苷元在大鼠排泄物中的含量[5-6]。

1儀器與試藥[HTSS][HJ24mm]

1.1儀器Agilent 1.100高效液相色譜儀；DZTW調溫電熱套；XS105電子天平；XW-80A微型旋渦混合儀；Anke-1.8C-C高速臺式離心機。

1.2試藥所用試劑均為分析純和色譜純。牛蒡苷購自中國藥品生物制品檢定所，批號為81.9-9401；牛蒡苷元購自上海融禾醫藥科技有限公司，批號為070928；牛蒡子藥材購于遼寧省中醫藥研究院藥局，經遼寧中醫藥大學康廷國教授鑒定為菊科植物牛蒡Arctium lappa L的干燥成熟果實；健康昆明種大鼠，體重400 g，由沈陽醫學院動物實驗中心提供，合格證號：XCXK（遼）-2003-001.6

2實驗方法

2.1色譜條件色譜柱：Hypersil ODS柱（46 mm×200 mm，5μm）；流動相：甲醇∶[KG-2]05%磷酸水（48∶[KG-2]52）；流速：08 mL/min；檢測波長：280 nm；柱溫：28℃；進樣量：20μl

2.2灌胃樣品制備稱取牛蒡子藥材78 g，第1次加入10倍量的水回流提取1 h，第2次加入8倍量的水回流提取1 h，2次濾液合并，濃縮成0624 g/mL的藥液（按牛蒡子藥材量計算），于4℃冰箱保存備用。

2.3給藥方案與樣品采集健康昆明種大鼠6只，給藥前禁食1.6小時，自由飲水，灌胃給予牛蒡子水提物，劑量為臨床等效劑量的1.6倍，分別于3、6、24 h取大鼠的尿液，于3、24 h取大鼠的糞便。

2.4代謝和排泄樣品的預處理取尿液，糞便液（用生理鹽水研磨）以1.3900 r/min高速離心10 min，取上清液100 μL，加入高氯酸80 μL，充分渦旋混合3 min，再以1.3900 r/min高速離心10 min，取上清液，再一次以1.3900 r/min轉速離心10 min，取上清液50 μL，注入高效液相色譜儀分析，記錄色譜圖。

2.5對照品溶液制備精密稱取減壓干燥至恒重的牛蒡苷對照品1.65 mg，置于5 mL容量瓶中，加甲醇適量，振搖使溶解，加甲醇至刻度制成濃度為033 mg/mL的牛蒡苷標準溶液貯備液。

精密稱取減壓干燥至恒重的牛蒡苷元對照品1.44mg，置于10ml容量瓶中，加甲醇適量，振搖使溶解，加甲醇至刻度制成濃度為01.44 mg/mL的牛蒡苷元標準溶液貯備液。

2.6分析方法確證

2.6.1方法的專屬性取大鼠空白尿、糞便勻漿液，按“組織樣品的預處理”項下的方法操作，獲得空白尿、糞便勻漿液樣品色譜圖1（A）、（B）；將一定濃度的牛蒡苷及牛蒡苷元對照品溶液加入到空白尿、分辨勻漿液中，依同法操作，得色譜圖2（A）、（B）；同法操作得到大鼠給藥后的尿、糞便勻漿液樣品色譜圖3（A）、（B）。結果表明，空白血清中的內源性物質和代謝物不干擾牛蒡苷和牛蒡苷元的測定。

2.6.2標準曲線取空白大鼠尿、糞便勻漿上層液，分別加入適量牛蒡苷和牛蒡苷元標準溶液，使得空白大鼠尿勻漿液中牛蒡苷和牛蒡苷元的濃度分別為0032、0054、0070、0081、0090 mg/mL和0028、0035、0041、0044、0047 mg/mL；空白大鼠糞便勻漿液中牛蒡苷和牛蒡苷元的濃度分別為0032、0054、0070、0081、0090 mg/mL和0028、0035、0041、0044、0047mg/ml；按“代謝和排泄樣品的預處理”項下依法操作，分別以測定牛蒡苷和牛蒡苷元對濃度作線性回歸，制作牛蒡苷和牛蒡苷元尿、糞便勻漿的標準曲線。

2.6.3方法的精密度取空白大鼠尿、糞便勻漿上層液80 μL，向其中加入牛蒡苷和牛蒡苷元對照品標準貯備液，制成尿中牛蒡苷和牛蒡苷元低、中、高3個濃度（牛蒡苷的濃度為1.953、22.73、261.9 μg/mL和牛蒡苷元的濃度為1.2.78、1.983、2286 μg/mL）；制成糞便中牛蒡苷和牛蒡苷元低、中、高3個濃度（牛蒡苷的濃度為1.953、3492、4853 μg/mL和牛蒡苷元的濃度為1.2.78、1.905、21.1.8 μg/mL）的質量控制（QC）樣品分析，每一濃度進行5樣本分析，計算QC樣品的測得濃度與配制濃度對照，求得組織樣品測定方法的精密度，結果均符合規定。

2.6.4提取回收率取空白大鼠尿、糞便勻漿上層液80 μL，向其中加入牛蒡苷和牛蒡苷元對照品標準貯備液，制成尿中牛蒡苷和牛蒡苷元低、中、高3個濃度（牛蒡苷的濃度為1.953、22.73、261.9 μg/mL和牛蒡苷元的濃度為1.2.78、1.983、2286 μg/mL）；制成糞便中牛蒡苷和牛蒡苷元低、中、高3個濃度（牛蒡苷的濃度為1.953、3492、4853μg/ml和牛蒡苷元的濃度為1.2.78、1.905、21.1.8 μg/mL）的質量控制（QC）樣品分析，每一濃度進行5樣本分析，進樣50μl，通過測得的峰面積與相同濃度的標準溶液的峰面積比值計算提取回收率。經測定，牛蒡苷在尿中低、中、高3個濃度的提取回收率分別為103.2、905、859%；牛蒡苷元在尿組織中低、中、高3個濃度的提取回收率分別為102.4%、881%、82.5%。同法制得牛蒡苷在糞便中低、中、高3個濃度的回收率分別為1092、1083、980%；牛蒡苷元在糞便中低、中、高3個濃度的回收率分別為1092、1010、974%。

2.6.5樣品穩定性取空白大鼠尿、糞便勻漿上層液80 μL，向其中加入牛蒡苷和牛蒡苷元對照品標準貯備液，制成尿中牛蒡苷和牛蒡苷元低、中、高3個濃度牛蒡苷的濃度為1.95、22.7、262 μg/mL和牛蒡苷元的濃度為1.28、1.98、229 μg/mL）；制成糞便中牛蒡苷和牛蒡苷元低、中、高3個濃度（牛蒡苷的濃度為1.95、349、485 μg/mL和牛蒡苷元的濃度為1.28、1.91、21.2 μg/mL）的質量控制（QC）樣品分析，每一濃度進行5樣本分析，進樣50 μL，樣品經處理后室溫下1h是穩定的，在-20℃冰箱中1.2 h是穩定的，其RE%分別為3.2、93、1.41和2.4、1.1.6、1.37%與84、3.3、20%和84、10、2.6%。

3結果

大鼠灌胃給予牛蒡子水提物后，不同時間點尿和糞便中牛蒡苷和牛蒡苷元的色譜圖分別見圖4、圖5；含量圖6、圖7

4討論

通過對尿和糞便的研究表明，牛蒡苷和牛蒡苷元在大鼠體內24 h基本可以代謝完全。尿液排泄為牛蒡苷和牛蒡苷元的主要排泄途徑。經給藥尿液與空白尿液圖譜比較，給藥糞便液與空白糞便液比較，發現牛蒡子水提物灌胃給予大鼠服用后在尿液中會生成多種其它成分，在糞便液中也會產生幾種其它成分，需進一步用液質色譜儀進行確定。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會中華人民共和國藥典[M]一部北京，中國醫藥科技出版社，2010：66

[2]蔡恩博，郭雪，趙巖，等牛蒡子化學成分研究進展[J]人參研究，201.5，（1）：45-48

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[4]齊艷明，柏玲，張文治牛蒡子化學成分研究[J]齊齊哈爾大學學報：自然科學版，201.2，28（2）：1.9-21

[5]牛蒡子苷在小鼠體內的分布狀態及藥代動力學研究時珍國醫國藥，2006，1.7（5）：698-699

[6]鄭一敏，胥秀英，傅善權，等牛蒡子總木脂素代謝化學及其動態研究中國中藥雜志，2005，30（1.6）：1.287-1.288