miR-21和miR-93表達水平與三陰性乳腺癌發生發展的相關性研究

羅玲娟, 帕提瑪·阿布力米提, 謝新梅, 張洪亮

(新疆醫科大學附屬中醫醫院 腫瘤二科, 新疆 烏魯木齊, 830000)

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miR-21和miR-93表達水平與三陰性乳腺癌發生發展的相關性研究

羅玲娟, 帕提瑪·阿布力米提, 謝新梅, 張洪亮

(新疆醫科大學附屬中醫醫院 腫瘤二科, 新疆 烏魯木齊, 830000)

目的探討miR-21和miR-93的表達水平與三陰性乳腺癌(TNBC)發生發展的相關性。方法選擇行乳腺癌根治術的女性患者86例，收集癌組織與正常乳腺組織，采用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測miR-21和miR-93的相對表達量，并分析其與臨床病理特征的相關性。結果miR-21和miR-93在TNBC組織中相對表達量高于癌旁組織; TNBC組織中, miR21高表達54例，占62.79%, miR-93高表達50例，占58.14%; miR-21和miR-93在腫瘤直徑>5 cm、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期以及淋巴結轉移的患者中高表達率顯著增高(P<0.01); miR-21和miR-93的表達水平與患者年齡、月經狀態、病理分級無明顯相關性。癌組織中miR-21與miR-93表達水平呈顯著正相關(r=0.761,P<0.01)。結論miR-21與miR-93在TNBC中表達異常增高，且與腫瘤直徑、臨床分期、淋巴結轉移有關，可作為TNBC診斷及判斷預后的輔助指標。

微小核糖核酸; miR-21; miR-93; 三陰性乳腺癌; 逆轉錄聚合酶鏈反應

據統計，世界范圍內乳腺癌每年新增女性病例約有120～140萬，其中三陰性乳腺癌(TNBC)占10%～15%[1]。TNBC惡性程度高、易轉移和復發[2]，且生物學行為、分子表達特征和臨床病理特征較為特殊，常規組織病理學診斷已不能滿足對其治療指導和預后判斷的需求。微小核糖核酸(miRNA)是一類長度為20～25個核苷酸的內源性非編碼單鏈RNA, 廣泛存在于真核生物中，參與多種信號通路的調節[3]。研究[4-6]表明, miRNA參與細胞增殖、凋亡、分化等重要過程的調控，其表達失調與多種惡性腫瘤的發生、發展密切相關。本研究通過檢測三陰性乳腺癌患者組織中miR-21和miR-93的表達水平，探討其與臨床病理特征的相關性，現報告如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選擇2014年2月—2016年1月在新疆醫科大學附屬中醫醫院行乳腺癌根治術的女性患者86例，納入標準: ① 均經術后病理證實為TNBC; ② 年齡≥18歲; ③ 術前均未行放、化療、免疫治療及內分泌治療等; ④ 簽署《知情同意書》。排除標準: ① 妊娠或感染患者; ② 肝腎功能不全; ③ 合并有心腦血管疾病、糖尿病及其他腫瘤。患者年齡26～63歲，平均(40.98±9.67)歲；腫瘤直徑1.0～14.0 cm, 平均(5.65±1.48)cm; 絕經60例；未絕經26例；臨床分期: Ⅰ～Ⅱ期57例, Ⅲ～Ⅳ期29例；病理分級: Ⅰ級7例, Ⅱ級59例, Ⅲ級20例；伴淋巴結轉移27例。本研究經醫院倫理委員會批準。

1.2方法

1.2.1標本收集：收集所有患者癌組織和距腫瘤邊緣2 cm以上的癌旁組織，嚴格無菌操作下，將標本切成小塊，分裝，30 min內-80℃凍存待測。

1.2.2逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測：采用Trizol試劑盒(美國Invitrogen公司)提取總RNA后，以GAPDH為內參，行PCR。反應體系中含：總RNA 1μL、模板cDNA 2.5 μL、聚合酶Ex Taq HS 0.1 μL、AMV逆轉錄酶0.5 μL、上下游引物各0.1 μL。miR-21引物序列：F: 5′-TGCGCTAGCTTATCAGACTGAT-3′, R: 5′-CCAGTGCAGGGTCCGAGGTATT-3′; miR-93引物序列: F: 5′-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3′, R: 5′-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3′; GAPDH引物序列: F: 5′-CAGGGCTGCTTTTAACTCTGGTAA-3′, R: 5′-GGGTGGAATACATTGGAACATGT-3′。 反應條件為: 94 ℃ 2 min; 94 ℃ 40 s, 50～65 ℃ 40 s, 72 ℃ 1 min, 共35個循環; 72 ℃ 5 min, 1個循環。反應結束后，取6 μL產物以2%瓊脂糖凝膠電泳，掃描電泳條帶灰度，計算miR-21和miR-93的相對表達量。

1.3評價標準

計算miR-21和miR-93的平均相對表達量，高于此值為高表達，低于此值為低表達。

1.4統計學處理

2　結　果

2.1癌組織和癌旁組織中miR-21、miR-93表達水平比較

miR-21和miR-93在TNBC組織中相對表達量高于癌旁組織，差異有統計學意義(P<0.01)。見表1。

表1　癌組織和癌旁組織中miR-21、miR-93表達水平比較±s)

與癌旁組織比較, **P<0.01。

2.2癌組織中miR-21和miR-93表達水平與臨床病理特征的相關性

癌組織中, miR21高表達54例，占62.79%, miR-93高表達50例，占58.14%。miR-21和miR-93在腫瘤直徑>5 cm、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期及淋巴結轉移的患者中高表達率顯著增高(P<0.01); miR-21和miR-93的表達水平與患者年齡、月經狀態、病理分級無顯著相關性(P>0.05)。見表2。

2.3癌組織中miR-21和miR-93表達水平的相關性

TNBC組織中, miR-21、miR-93在癌組織中均呈高表達，兩者的表達水平呈顯著正相關(r=0.761,P<0.01)。

表2　癌組織中miR-21和miR-93表達水平與臨床病理特征的相關性[n(%)]

與同一病理特征的另一亞項比較, **P<0.01。

3　討　論

TNBC是一種亞型乳腺癌，多見于45歲以下的年輕女性，惡性程度高；首次確診時臨床分期晚、組織分級高、腫瘤直徑大、多淋巴結轉移；腫瘤侵襲性強，病情進展迅速，化療、內分泌治療等效果均不佳；預后差, 3年內遠端轉移和局部復發率高[7]。miRNA是一種小分子RNA片段，具有高度保守性、時序性和特異性，可調控癌基因和抑癌基因的表達，在多種腫瘤的發生發展過程中具有重要作用[8-9]。miR-21是目前研究較多的miRNA之一，據報道[10-11], miR-21高表達于甲狀腺乳頭狀癌、食管鱗癌等腫瘤組織中。基礎研究[12]顯示, miR-21的表達水平對結腸癌HCT116細胞增殖、周期、凋亡、侵襲和遷移等生物學行為均存在影響。吳子晏等[13]研究表明, miR-21高表達與骨肉瘤肺轉移及對化療藥的敏感程度密切相關。劉潔等[14]也認為, miR-21的表達水平影響著結腸癌晚期患者對化療藥物的敏感性，或可作為預測化療療效的指標。miR-93位于MCM7基因的第13號內含子內，研究[15]顯示, miR-93高表達可能通過下調抑癌基因染色體質域解螺旋酶DNA結合蛋白5(CHD5)mRNA的表達，促進胃癌SGC-7901細胞的遷移和侵襲。

本研究應用RT-PCR檢測TNBC組織及癌旁組織中miR-21和miR-93表達水平，并分析其與臨床病理特征的相關性，結果顯示，癌組織中miR-21和miR-93均過表達，兩者表達水平呈顯著正相關，且其表達水平與腫瘤大小、臨床分期、淋巴結轉移與否密切相關，提示miR-21和miR-93或可作為TNBC診斷及預后預測的輔助指標，其具體作用機制尚有待進一步研究。

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Study on correlation between expression levels of miR-21, miR-93 and the occurrence and development of triple-negative breast cancer

LUO Lingjuan, PATIMA·Abulimiti, XIE Xinmei, ZHANG Hongliang

(SecondDepartmentofOncology,TCMHospitalAffiliatedtoXinjiangMedicalUniversity,Urumchi,Xinjiang, 830000)

ObjectiveTo explore the correlation between expression levels of miR-21, miR-93 and the occurrence and development of triple-negative breast cancer (TNBC). MethodsA total of 86 females with radical mastectomy were selected to collect cancerous tissues and normal mammary tissues. Reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to detect the relative expression of miR-21 and miR-93, and its relationship with clinical pathological characters was analyzed. ResultsThe expression of miR-21 and miR-93 was significantly higher in TNBC tissues than that in para-canerous tissues. Of all patients, 54 patients (62.79%) had high expression of miR-21 and 50 (58.14%) cases had high expression of miR-93 in TNBC tissues. The expression of miR-21 and miR-93 increased significantly in patients with tumor diameter >5 cm, in clinical stage of Ⅲ～Ⅳ and with lymph node metastasis (P<0.01). Meanwhile, the expression of miR-21 and miR-93 had no significant association with patients′age, menstrual status and pathological degree. However, the expression levels of miR-21 and miR-93 were positively associated with cancerous tissues (r=0.761,P<0.01). ConclusionThe expression levels of miR-21 and miR-93 are abnormally high in TNBC tissues, and are in close association with tumor diameter, clinical stage and lymph node metastasis, so they can be used as complementary indexes for the diagnosis and prognostic evaluation in patients with TNBC.

micro ribonucleic acid; miR-21; miR-93; triple-negative breast cancer; reverse transcriptase polymerase chain reaction

2016-04-21

中國高校醫學期刊臨床專項資金(11525862)

張洪亮, E-mail: zhanghongliang@csco.cn

R 737.9

A

1672-2353(2016)19-031-03DOI: 10.7619/jcmp.201619009