提取液及固-液分離方法對(duì)固態(tài)非淀粉多糖酶類活性的影響

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(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100193；2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，武漢430070)

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提取液及固-液分離方法對(duì)固態(tài)非淀粉多糖酶類活性的影響

廖睿1,2趙峰1*齊智利2*張宏福1

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100193；2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，武漢430070)

本試驗(yàn)旨在探討固態(tài)酶制劑評(píng)估中酶的適宜提取液及固-液分離方法。采用4×3雙因素完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，其中提取液分別為去離子水、乙酸-乙酸鈉緩沖液(0.1 mol/L，pH 5.50)、磷酸鹽緩沖液(0.05 mol/L，pH 6.00)和0.9%NaCl溶液；溶液提取后的固-液分離方法分別為不分離、3 000 r/min離心3 min和中速濾紙過濾。每個(gè)處理5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)設(shè)2個(gè)平行，測(cè)定各個(gè)處理下酶的活性，并考察提取液的類型對(duì)酶制劑產(chǎn)品(α-半乳糖苷酶除外)溶解離心后溶液中溶質(zhì)及蛋白質(zhì)含量的影響。結(jié)果表明，磷酸鹽緩沖液溶解木聚糖酶后活性最高(P<0.05)；乙酸-乙酸鈉緩沖液、磷酸鹽緩沖液及0.9%NaCl溶液溶解β-葡聚糖酶后活性相當(dāng)(P>0.05)，且均顯著地高于去離子水(P<0.05)；去離子水溶解β-甘露聚糖酶后活性最高，其次為乙酸-乙酸鈉緩沖液，兩者都顯著地高于磷酸鹽緩沖液和0.9%NaCl溶液(P<0.05)。提取液類型對(duì)α-半乳糖苷酶活性無(wú)顯著影響(P>0.05)。酶制劑溶解后的固-液分離方法對(duì)木聚糖酶的測(cè)定活性無(wú)顯著性影響(P>0.05)；提取液離心或過濾后β-葡聚糖酶活性最高(P<0.05)；提取液離心后β-甘露聚糖酶活性最高(P<0.05)；而提取液不分離時(shí)α-半乳糖苷酶的活性最高(P<0.05)。提取液的種類和酶制劑溶解后的固-液分離方法對(duì)4種非淀粉多糖酶的測(cè)定活性有極顯著的交互作用(P<0.01)。乙酸-乙酸鈉緩沖液對(duì)木聚糖酶制劑的溶解度最大(P<0.05)，去離子水和0.9%NaCl溶液均對(duì)β-葡聚糖酶及β-甘露聚糖酶制劑的溶解度最大(P<0.05)。然而，乙酸-乙酸鈉緩沖液溶解木聚糖酶、β-葡聚糖酶、β-甘露聚糖酶后提取液中蛋白質(zhì)的含量均最低(P<0.05)。上述結(jié)果表明，乙酸-乙酸鈉緩沖液溶解4種固態(tài)酶制劑可以最有效地將酶蛋白提取出來(lái)，α-半乳糖苷酶提取后不宜固液分離，而其他3種酶的提取液適宜進(jìn)行離心分離。

非淀粉多糖酶；提取液；固-液分離；酶活性

國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上飼用非淀粉多糖酶制劑產(chǎn)品多以載體吸附發(fā)酵酶液的固態(tài)形式存在。在評(píng)估固態(tài)飼用酶制劑產(chǎn)品的酶學(xué)特性及其對(duì)飼料原料的水解效應(yīng)中，所有反應(yīng)均在液相中進(jìn)行。通過提取液從固態(tài)酶制劑中浸出飼用酶是開展酶活性評(píng)估首先需要考慮的問題，因此，探討適合固態(tài)飼用酶的提取液及溶解后固-液分離方法非常重要。目……