乙型肝炎病毒母嬰垂直傳播與Th1/Th2型細胞因子相關性研究

栗軍香，沈香榮，鄭麗娟，翟淑景，李紅梅，王文霞，劉艷竹

(1. 河北工程大學附屬醫院，河北 邯鄲 056002；2. 河北省涉縣婦幼保健院，河北 涉縣 056400；3. 五礦邯邢總醫院，河北 邯鄲 056001；4. 河北省涉縣中醫院，河北 涉縣 056400)

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乙型肝炎病毒母嬰垂直傳播與Th1/Th2型細胞因子相關性研究

栗軍香1，沈香榮1，鄭麗娟2，翟淑景3，李紅梅2，王文霞2，劉艷竹4

(1. 河北工程大學附屬醫院，河北 邯鄲 056002；2. 河北省涉縣婦幼保健院，河北 涉縣 056400；3. 五礦邯邢總醫院，河北 邯鄲 056001；4. 河北省涉縣中醫院，河北 涉縣 056400)

目的研究探討乙型肝炎病毒(HBV)母嬰垂直傳播與1型及2型輔助性T細胞相應細胞因子的相關性。方法選擇乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)陽性的孕婦87例作為觀察組，并根據新生兒臍血乙肝五項及HBV DNA檢測結果，將其中14例檢測陽性發生胎兒宮內感染者為宮內感染組，73例檢測陰性未發生宮內感染者為宮內未感染組；同時選擇44例正常孕婦作為對照組。應用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測每組孕婦外周血及新生兒臍血相關細胞因子干擾素γ(IFN-γ)、白細胞介素-12(IL-12)、白細胞介素-4(IL-4)和白細胞介素-6(IL-6)水平，比較各組IFN-γ、IL-12、IL-4及IL-6的水平變化及與HBV母嬰垂直傳播的相關性。結果宮內感染組孕婦血清IFN-γ、IL-12水平較宮內未感染組及正常對照組均顯著降低(P均<0.05)，IL-4、IL-6水平則較未感染組及對照組顯著升高(P均<0.05)；而宮內未感染組以上各因子水平與對照組比較差異無統計學意義(P均>0.05)。各組孕婦血清IFN-γ與IL-12、IL-4與IL-6均呈顯著正相關關系(P均<0.05)，IFN-γ與IL-4 、IL-6及IL-12與IL-4及IL-6均呈顯著負相關關系(P均<0.05)。各組新生兒臍血中IFN-γ、IL-12、IL-4及IL-6水平比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。結論HBsAg陽性孕婦Th1/Th2型細胞免疫功能紊亂，導致Th1和Th2相關的細胞因子免疫水平失衡，IFN-γ、IL-12水平顯著降低，抗病毒能力下降，導致孕婦體內HBV清除障礙，從而易引起HBV母嬰垂直傳播而發生胎兒宮內感染。

乙型肝炎病毒；垂直傳播；Th1/Th2型細胞；細胞因子；相關性

乙型肝炎病毒(HBV)感染是世界范圍內最常見的傳染病之一，也是一直以來都不能徹底消除的疾病。HBV感染后病情極易反復和慢性化，很難治愈，逐漸發展會引起肝硬化、肝癌等嚴重危及患者生命的并發癥。母嬰垂直傳播是HBV感染的主要傳播途徑之一。慢性HBV攜帶者約占HBV感染的1/4，而在全部攜帶者中約一半的患者是由母嬰垂直傳播引發的[1]。WHO推薦新生兒出生后按常規免疫程序及時注射乙肝疫苗和乙肝免疫球蛋白以阻斷產時、產后HBV的母嬰垂直傳播，然而對于一些攜帶HBV孕婦雖然進行了預防性聯合免疫治療，其后代中仍有新生兒發生HBV早期感染，說明他們可能發生了HBV宮內感染。可見如何提高母體的細胞免疫功能和特異性免疫應答，對清除其體內的感染HBV，阻斷HBV宮內感染具有重要意義[2]。肝炎是多種免疫細胞及細胞因子參與免疫異常反應性疾病，已知Th1/Th2細胞及相關細胞因子的免疫平衡失調參與多種疾病的發生發展，Th1/Th2型細胞因子免疫平衡失調與機體內HBV的清除有關，然而有關Th1/Th2細胞因子與HBV母嬰垂直傳播的研究報道較少。Th1型細胞免疫反應可增強機體抵抗病毒等微生物感染的能力，而Th2型細胞免疫反應則會促進感染的進展、慢性化，故宿主對感染病毒的清除與否，要看體內的免疫反應是以Th1型為主還是以Th2型為主[3]。本研究通過檢測孕婦及新生兒Th1/Th2細胞相關細胞因子水平，探討干擾素-γ(IFN-γ)、白細胞介素-12(IL-12)、白細胞介素-4(IL-4)及白細胞介素-6(IL-6)與HBV母嬰垂直傳播的相關性，從而為有效防止HBV母嬰垂直傳播及胎兒宮內感染尋找新的途徑和思路。

1　臨床資料

1.1一般資料選擇2014年4月—2015年12月在河北工程大學附屬醫院進行產前檢查和分娩的單胎足月HBsAg陽性孕婦87例作為觀察組，年齡20～39歲，孕周36～43周，孕婦肝功能均正常。排除標準：具有先兆流產或早產史、病原體感染史及其他妊娠合并癥者，近期服用抗病毒或激素藥物者，患有其他病毒性肝炎或非病毒性肝炎及嚴重全身疾病者，胎兒先天畸形和配偶HBV攜帶者。根據新生兒臍血乙肝五項及HBV DNA檢測結果，將14例檢測結果陽性發生HBV宮內感染者作為宮內感染組，將73例檢測結果陰性未發生HBV宮內感染者作為宮內未感染組。并選擇同期分娩的HBsAg陰性的正常孕婦44例作為對照組，年齡19～39歲，孕周36.5～43周。各組孕婦的年齡、孕周、分娩方式差異均無統計學意義(P均>0.05)，具有可比性。

1.2研究方法

1.2.1樣本采集采集所有孕婦分娩時空腹靜脈血3 mL，血標本以3 000 r/min，離心15 min取上清，置于EP管中，于-80 ℃冰箱保存待檢，以檢測血清IFN-γ、IL-12、IL-4及IL-6的水平。在新生兒出生臍帶結扎切斷后首針乙肝疫苗免疫接種前，留取無菌條件下臍靜脈血2 mL，以3 000 r/min，離心15 min取上清，一部分用于檢測乙肝五項及HBVDNA，其余-80 ℃冰箱保存，待檢測血清IFN-γ、IL-12、IL-4及IL-6的水平。

1.2.2檢測方法新生兒臍血乙肝五項測定采用全自動化學發光分析儀，用雙抗夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)進行定量，試劑盒購自武漢眾生生物工程有限公司；采用熒光定量PCR法進行臍血HBV DNA的定量檢測，試劑購自珠海賽樂奇生物技術公司，以上實驗均嚴格按試劑盒說明書操作。采用雙抗夾心ELISA法測定孕婦外周血及新生兒臍血IFN-γ、IL-12、IL-4及IL-6水平，試劑盒購自美國TPI公司，嚴格按說明書操作。

1.3HBV母嬰垂直傳播的判斷新生兒出生臍血檢測血清HBsAg、HBV DNA兩項指標中任一指標陽性即診斷為發生宮內感染；新生兒臍血檢測HBsAg、HBV DNA兩項指標均為陰性即未發生宮內感染。

2　結　　果

2.1各組孕婦血清中IFN-γ、IL-12、IL-4及IL-6的水平比較宮內感染組孕婦血清IFN -γ、IL-12 水平均顯著低于宮內未感染組及對照組(P均<0.05)，宮內未感染組上述兩細胞因子水平與對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)。宮內感染組孕婦血清IL-4、IL-6水平均顯著高于宮內未感染組及對照組(P均<0.05)，而宮內未感染組與對照組比較差異無統計學意義(P均>0.05)。見表1。

表1　3組孕婦外周血IFN-γ、IL-12、IL-4及IL-6的 水平比較

注：①與宮內感染組比較，P<0.05。

2.2孕婦血清IFN-γ、IL-12、IL-4及IL-6的相關性分析宮內感染組、宮內未感染組及對照組三組孕婦血清IFN-γ水平與IL-12水平均呈正相關關系(r=0.947，0.925，0.861，P均<0.05)；3組IL-4水平與IL-6水平亦呈正相關關系(r=0.904，0.892，0.854，P均<0.05)；而IFN-γ與IL-4、IL-6水平(r=-0.874，-0.912，-0.903，P均<0.05；r=-0.859，-0.811，-0.763，P均<0.05)及IL-12與IL-4、IL-6水平(r=-0.931，-0.926，-0.915，P均<0.05；r=-0.938，-0.914，-0.902，P均<0.05)均呈負相關關系。

2.3各組新生兒血清中IFN-γ、IL-12、IL-4及IL-6水平比較3組新生兒臍血IFN -γ、IL-12、IL-4及IL-6水平比較差異均無明顯統計學意義(P均>0.05)。見表2。

表2　3組新生兒臍血IFN-γ、IL-12、IL-4及IL-6 水平比較

3　討　　論

HBV感染人體后，通常不會直接造成組織功能破壞而是引發一定的免疫反應，產生CD4+T細胞介導的細胞毒作用或免疫復合物作用而造成機體細胞的損害。胎兒期HBV感染往往會發展為慢性攜帶狀態，甚至發展為肝硬化和肝癌[4]。因此，對乙肝表面抗原陽性的產婦采取有效措施避免通過母嬰垂直傳播方式造成其后代的HBV宮內感染顯得尤為重要。機體內感染HBV的清除與特異性免疫應答有關，目前認為Th1/Th2細胞系統的免疫平衡紊亂是HBV感染慢性化及母嬰垂直傳播的可能機制之一，而Th1/Th2細胞失衡又會影響相應的細胞因子之間的平衡[5]。當機體正常狀態時，Th1和Th2兩種細胞因子相互作用而處于動態平衡，以維持機體正常的細胞及體液免疫功能，而以上兩種類型的細胞因子也是正常妊娠過程中所需要的重要調節因子，這種細胞因子間的動態平衡一旦被打破，則將會引起疾病的發生、發展[6]。IFN-γ水平通常作為Th1細胞功能的重要特征性指標，是由淋巴細胞、巨噬細胞等分泌的一種重要細胞因子，具有免疫調節作用，可促進Th1型細胞的分化，上調相應的免疫反應，可起到抑制病毒復制及清除病毒的作用。IFN-γ可抑制IL-4的轉錄、活化，從而可拮抗IL-4因子的作用。IL-12屬于促炎性細胞因子，主要功能是介導和增強細胞免疫反應。研究指出IL-12可促進Th1細胞的生成及增加其活性，同時可抑制Th2細胞的生成，促進Th1型細胞因子如IFN-γ、IL-2等的表達，增強機體的細胞免疫功能，從而可有效抵抗病毒的感染[7]。IL-4水平是代表Th2 細胞功能的重要細胞因子，其可刺激和誘導Th0細胞轉化為Th2細胞，從而增強Th2型細胞免疫應答[8]。IL-6主要是由Th2細胞分泌的免疫調節關鍵因子，參與機體的多種免疫生理及病理過程。研究表明慢性乙肝患者血清IL-6水平顯著升高，且與肝炎病情的嚴重程度密切相關[9]。因此，對以上Th1和Th2兩種相關細胞因子的研究對阻斷HBV母嬰垂直傳播具有重要的現實意義。

本研究中87例HBsAg陽性的孕婦發生新生兒HBV宮內感染率為16.1%。宮內感染組孕婦血清IFN -γ、IL-12水平均顯著低于宮內未感染組及對照組，而IL-4、IL-6水平均顯著高于宮內未感染組及對照組；宮內未感染組與對照組比較上述細胞因子水平差異無明顯統計學意義。這與林海英等[10]研究結果基本一致。這說明存在HBV宮內感染的孕婦其機體的免疫狀態失衡，表現為Th2型免疫反應占優勢而抑制了Th1型免疫反應，孕婦Th1/Th2系統的免疫失衡可能是HBV母嬰垂直傳播的重要機制。Th2型細胞因子IL-4、IL-6的水平升高使得IFN -γ、IL-12水平下降，機體的防御能力和抗病毒作用減弱，抑制了Th1細胞免疫反應對HBV的清除，而致使孕婦體內病毒載量逐漸升高，而此種情況又可反過來進一步加大Th1/Th2細胞間的失衡，從而導致易發生胎兒HBV宮內感染[11]。本研究顯示，宮內感染組、宮內未感染組及對照組3組孕婦血清IFN-γ水平與IL-12水平均呈正相關；3組IL-4水平與IL-6水平亦呈正相關；而IFN-γ與IL-4、IL-6水平及IL-12與IL-4、IL-6水平均呈負相關。說明Th1型和Th2型的同種類型細胞因子之間是互相促進的，隨著IL-12升高，IFN-γ水平升高，而IL-12的抗病毒也是通過誘導IFN-γ阻止HBV的復制而發揮作用的。而Th1型和Th2型的不同細胞因子之間是互相抑制的，隨著IL-4、IL-6水平的升高，IFN-γ、IL-12水平隨之降低，而導致其抗病毒作用減弱，易使胎兒發生HBV母嬰垂直傳播。另外，本研究結果顯示，3組新生兒臍血IFN -γ、IL-12、IL-4及IL-6水平比較差異均無統計學意義。這說明胎兒和新生兒機體的免疫功能尚未完全發育成熟，各種免疫細胞功能低下，抗體及相應的細胞因子缺陷或水平低下，故易發生病毒感染，且可能會產生免疫耐受而不利于及時有效地清除病毒而極易導致感染的持續和慢性化。可見，對HBV母嬰垂直傳播的預防關鍵環節是孕婦的防治。通過檢測孕婦血清Th1/Th2型細胞因子的水平可判斷母體的免疫狀態及對病毒清除的能力，從而預測胎兒HBV宮內感染的可能性。

綜上所述，Th1/Th2型細胞因子的免疫失衡與HBV母嬰垂直傳播密切相關。建議對胎兒及新生兒HBV宮內感染的預防重點應放在對孕婦的管理，可通過檢測孕婦外周血IFN-γ、IL-12、IL-4及IL-6等細胞因子的水平，對胎兒HBV宮內感染做出初步的預測。同時應進行大樣本的多中心研究，以確定可能發生胎兒HBV感染的細胞因子界值水平，進一步研究如何通過調節孕婦體內細胞因子的水平阻斷HBV母嬰傳播，尋找降低HBV宮內感染的新方法。

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10.3969/j.issn.1008-8849.2016.29.028

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1008-8849(2016)29-3269-03

2016-03-25