自身免疫反應在丙型肝炎病變中的作用和影響

溫先勇,鄧　劍,李寶林

(西南醫科大學附屬醫院檢驗科,四川瀘州 646000)

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自身免疫反應在丙型肝炎病變中的作用和影響

溫先勇,鄧劍,李寶林

(西南醫科大學附屬醫院檢驗科,四川瀘州 646000)

目的探討自身免疫反應在丙型肝炎病變過程中的作用和影響。方法采用間接免疫熒光法和免疫印跡法對129例丙型肝炎、25例自身免疫性肝炎及30例健康體檢者血清中抗核抗體、抗線粒體抗體、抗可提取性核抗原抗體、抗肝抗原抗體進行檢測；觀察丙型肝炎病變及治療前后的自身抗體的變化；探討自身抗體與HCV-RNA、肝功能指標之間的關系。結果(1)丙型肝炎患者血清自身抗體總陽性率為44.19%，明顯高于健康對照者(P<0.01)，但低于自身免疫肝炎患者(P<0.01)；自身抗體以單項和雙項陽性、<1∶160的低滴度抗體為主。(2)丙型肝炎患者中，自身抗體總陽性率按照急性、慢性、丙型肝炎后肝硬化和丙型肝炎后原發性肝癌組依次升高，慢性丙型肝炎明顯高于急性肝炎(P<0.05)；丙型肝炎后肝硬化和丙型肝炎后原發性肝癌兩組均高于慢性丙型肝炎(P<0.05)，但兩者之間差異無統計學意義(P>0.05)。(3)自身抗體陽性的丙型肝炎患者丙氨酸氨基轉移酶、門冬氨酸氨基轉移酶、堿性磷酸酶、谷氨酰轉肽酶等肝功能損害指標明顯高于陰性患者(P<0.01)。(4)HCV-RNA陽性患者自身抗體總陽性率高于陰性患者，差異有統計學意義(P<0.05)。(5)在71例經干擾素聯合利巴韋林治療的慢性丙型肝炎患者中，生化和血清學完全應答的患者其體內自身抗體陽性率發生顯著下降(P<0.01)；而應答不良患者，其體內自身抗體陽性率無明顯變化(P>0.05)。結論自身免疫反應在丙型肝炎的發生、發展和轉歸過程中發揮了極為重要的作用。

丙型肝炎病毒；丙型肝炎；自身免疫反應；自身抗體

近年來，自身免疫現象在丙型肝炎中的發現引起了臨床的高度重視，其發生機制目前尚不完全清楚[1-3]。為了解自身免疫反應與丙型肝炎之間的內在聯系，觀察129例不同臨床類型的HCV患者病變及治療過程中自身抗體的變化，旨在探討自身免疫反應在丙型肝炎病變中的作用和影響，現將結果報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料本院門診及感染科2014年2月至2015年3月收治的丙型肝炎患者共147例，納入標準：所有患者符合2004年中華醫學會肝病學分會、中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會制訂的診斷標準[4]，符合以上標準的患者129例，男70例，女59例，年齡15～76歲，平均(48.48±12.46)歲。其中包括：急性丙型肝炎23例，慢性病型肝炎71例，丙型肝炎后肝硬化22例，丙型肝炎原發肝癌13例；自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)組：25例，男14例，女11例，年齡13～75歲，平均(45.12±9.37)歲。AIH診斷依據國際AIH小組于2002修訂的AIH 診斷標準[5]。健康對照組：30例，門診健康體檢者，男17例，女13例，年齡13～72歲，平均(49.56±8.84)歲。排除標準，丙型肝炎組和自身免疫性肝炎組：排除其他型別的肝炎、肝膽及免疫性疾病；健康對照組：排除肝膽、免疫、血液系統疾病；所有對象排除腫瘤和病毒(非研究病毒)感染，3個月內未使用免疫制劑。本研究經本院倫理委員會批準，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。自身免疫性肝炎組、健康對照組與丙型肝炎組在年齡、性別構成比方面差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1抗核抗體(ANA)、抗線粒體抗體(AMA)的檢測采用間接免疫熒光法，儀器為間接免疫熒光樣本前處理儀IF Sprinter(德國歐蒙公司),試劑購自德國歐蒙公司。

1.2.2抗可提取性核抗原(ENA)檢測應用免疫印跡法檢測14種ENA：nRNP/Sm、Sm、SSA、Ro-52、SSB、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENP B、PCNA、dsDNA、Nucleosomes、Histones、Rib.P-Prot抗體；抗肝抗原抗體譜(AMA-M2、抗SLA抗體、抗LKM-1抗體和抗LC-1抗體)。儀器為全自動蛋白印跡儀EUROBlotmaster(德國歐蒙公司)，試劑由德國歐蒙公司提供。

1.2.3HCV-RNA檢測采用實時熒光定量RT-PCR法檢測HCV-RNA，儀器為ABI7500 Fast 基因擴增儀(美國)，試劑由深圳凱杰生物工程有限公司提供。

1.2.4肝功能檢測丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、谷氨酰轉肽酶(GGT)在AVDIA 2400生化分析儀(德國 Siemens公司)上測定。

2　結　果

2.1129例丙型肝炎患者自身抗體檢測結果總陽性以自身抗體≥1項陽性計算。丙型肝炎組患者自身抗體總陽性率明顯高于健康對照組(P<0.01)，但低于自AIH組(P<0.01)；同時，丙型肝炎組患者自身抗體以單項和雙項陽性(52/57，92.98%)和低滴度(<1∶160)為主(45/57，78.95%),僅有2例滴度大于1∶640，均為ANA，見表1。

2.2不同臨床類型丙型肝炎患者自身抗體檢測結果比較丙型肝炎患者中，自身抗體總陽性率按照急性、慢性、丙型肝炎后肝硬化和丙型肝炎后原發性肝癌組依次升高,慢性丙型肝炎明顯高于急性肝炎(P<0.05)，丙型肝炎后肝硬化和丙型肝炎后原發性肝癌兩組均高于慢性丙型肝炎組(P<0.05)，但兩者之間差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

2.3HCV-RNA陰性和陽性患者組之間自身抗體檢測結果比較以5.00×102IU作為判斷標準，將129例丙型肝炎患者分為HCV-RNA陰性和陽性組，HCV-RNA陽性患者血清自身抗體檢出率為51.65%明顯高于HCV-RNA陰性患者，差異有統計學意義(P<0.01)，見表3。

表1　129例丙型肝炎患者自身抗體結果[n(%)]

a：χ2=13.28,P<0．01，與自身免疫性肝炎組比較；b：χ2=17.53,P<0．01，與健康對照組比較。

表2　不同臨床類型丙型肝炎患者自身抗體檢測結果比較[n(%)]

a：χ2=5.98，P<0.05，與急性丙型肝炎組比較；b：χ2=5.04、5.75，P<0.05，與慢性丙型肝炎組比較；c：χ2=0.31，P>0.05，與丙型肝炎后肝硬化組比較。

表3　丙型肝炎患者HCV-RNA與自身抗體的關系[n(%)]

a：χ2=6.98，P<0.01，與 HCV-RNA陰性組比較。

表4　肝功能指標與自身抗體的關系比較±s，μ/L)

a：t=7.17、3.20、4.99、7.32，P<0.01，與自身抗體陰性組比較。

表5　71例慢性丙型肝炎患者治療前后自身抗體變化比較[n(%)]

a：χ2=8.75,P<0.01，與完全應答組治療前比較；b：χ2=0.05,P>0.05，與應答不良組治療前比較。

2.4129例未經治療的丙型肝炎患者肝功能與自身抗體之間的關系自身抗體陽性的丙型肝炎患者其ALT、AST、ALP、GGT等多項肝功能損害指標均明顯高于陰性患者(P<0.01)，見表4。

2.571例慢性丙型肝炎患者治療前后自身抗體的變化比較71例接受干擾素聯合利巴韋林治療48周的丙型肝炎患者,結束后依據療效將其分為完全應答組：治療結束時，生化指標(ALT、AST、ALP、GGT)恢復正常和血中HCV-RNA<5.00×102IU；應答不良組：治療結束時生化指標(ALT、AST、ALP、GGT)仍高于參考值和(或)HCV- RNA仍然≥5.00×102U，兩組患者血中自身抗體變化見表5。

3　討　論

研究表明，病毒感染與自身免疫關系密切，通過觀察自身抗體變化可了解患者體內的自身免疫狀態。

HCV感染機體后，與宿主之間的免疫反應是導致丙型肝炎致病的主要原因，其病理過程一般經過急性期、慢性期、丙型肝炎后肝硬化、丙型肝炎后原發性肝癌的演變過程；但近年的文獻報道，約1/3的HCV感染者血清中可檢測到多種類型的自身抗，對機體造成自身免疫損傷[1-3，6]。本研究顯示，44.19%的丙型肝炎患者至少檢測出一項或一項以上自身抗體陽性，較健康對照組明顯增高(P<0.01)，但明顯低于自身免疫性肝病(P<0.01)；且自身抗體以單項陽性和低滴度為主，僅有2例滴度大1∶640，以ANA的陽性率最高，而AIH患者血清中ANA的陽性率明顯高于丙型肝炎患者，且ANA以高滴度為主與文獻報道相似[7-8]。提示HCV感染可誘發丙型肝炎患者機體內自身免疫反應的產生。在不同臨床類型丙型肝炎中，按急性丙型肝炎、慢性丙型肝炎、丙型肝炎后肝硬化、丙型肝炎后原發性肝癌順序，患者體內的自身抗體總陽性率也從13.04%、46.48%、68.18%、69.23%依次升高，慢性丙型肝炎明顯高于急性丙型肝炎(P<0.05)；丙型肝炎后肝硬化、丙型肝炎后原發性肝癌兩組總陽性率均高于慢性丙型肝炎(P<0.05)，但兩者之間差異無統計學意義(P>0.05)。

HCV可能通過以下方式激活了人體自身免疫系統：(1)HCV與細胞或者細胞之外具有相同或者相似的抗原，激發人體對病毒的應答導致攻擊人體正常細胞。(2)通過使宿主細胞抗原暴露、釋放、改變或插入等誘發機體的自身免疫反應。(3)HCV將基因可整合到宿主基因中，使肝細胞膜結構發生改變，導致機體的免疫系統把自身的肝細胞誤認為異物或自身抗原。(4)HCV將肝細胞膜抗原摻入其包膜中，誘導肝細胞膜抗原的反應。以上因素導致患者的自身免疫功能被激活和放大，在臨床上表現為患者機體全身性自身免疫損傷：在肝內加重患者肝功能的損害，甚至誘發自身免疫性肝炎、原發性膽汁性肝硬化等自身免疫性肝病；在肝外可導致混合性冷球蛋白血癥、關節肌肉疼痛、唾液腺炎及其他部分結締組織和淋巴增生性疾病的發生[9]。急性感染期患者如未能在3個月內治愈，則可發展為慢性丙型肝炎。患者體內自身抗體攻擊破壞肝或其他自體細胞并導致損傷[10]。隨著病程延長，這種自身免疫性損傷反復作用，其結果之一是肝臟結構和功能受到損害,逐漸發展經肝纖維化到肝硬化、肝細胞的癌變過程。因此自身免疫反應在丙型肝炎向慢性肝炎、肝硬化、肝癌演變中起了重要的推進作用。

丙型肝炎病毒是自身免疫反應的誘發因素。本研究結果顯示，HCV-RNA陽性患者其自身抗體陽性率顯著高于HCV-RNA陰性患者(P<0.01)，自身抗體陽性患者肝功能損害指標高于陰性患者(P<0.01)，提示自身免疫反應發生與HCV復制及肝功能損害程度顯著相關[11]，與王蓉等[12]報道一致。

干擾素聯合利巴韋林是目前丙型肝炎治療的標準方案[13]。此方案對低滴度自身抗體的HCV患者療效較好，但干擾素治療可能會誘發或加劇已存在的自身免疫反應，特別是高滴度自身抗體的HCV患者[14-15]，可能因為無法忍受強烈的不良反應而停用干擾素。本試驗顯示，在經過48周的慢性丙型肝炎患者治療結束后，生化和血清學完全應答的患者體內自身抗體陽性率下降非常顯著(P<0.01)；而應答不良患者自身抗體卻無明顯變化(P>0.05)。提示隨HCV水平降低或清除，患者體內亢進的自身免疫反應得到了有效的抑制或終止。因此，HCV感染者自身抗體及病毒載量檢測，有助于了解患者自身免疫狀態及指導臨床選擇治療方案。

綜上所述，自身免疫反應是丙型肝炎致病的一個重要方面，在丙型肝炎的發展、轉歸、免疫損傷及治療方面發揮了重要作用。

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溫先勇(1964-),副主任技師，本科，主要從事分子生物學、免疫學研究。

·經驗交流·doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2016.26.033

R446.62

B

1671-8348(2016)26-3704-04

2016-03-18

2016-05-26)