p16免疫組化染色在宮頸癌篩查中的應用價值

呂秀芳　宋曉霞　賀慧　徐紀躍　孔令非

(鄭州大學人民醫院/河南省人民醫院　河南 鄭州　450000)

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p16免疫組化染色在宮頸癌篩查中的應用價值

呂秀芳宋曉霞賀慧徐紀躍孔令非

(鄭州大學人民醫院/河南省人民醫院河南 鄭州450000)

目的研究HE染色聯合p16免疫組化(IHC)染色在宮頸癌篩查中的作用及意義。方法篩選243例宮頸組織，應用HE染色及p16 IHC染色方法對其進行檢測，另由兩名病理診斷醫生對染色結果進行分析。結果HE染色結果為166例非CIN、45例CINⅠ、12例CINⅡ、16例CINⅢ、4例宮頸癌。結合p16染色結果對HE染色結果進行回顧分析，非CIN中28例宮頸病變被漏診，包括12例CINⅠ、6例CINⅡ、10例CINⅢ。結論p16 IHC染色方法能夠降低HE染色方法的漏診率，提高靈敏度，HE染色聯合p16 IHC染色在宮頸癌篩查中具有重要的應用價值。

宮頸上皮內瘤變；人類乳頭狀瘤病毒；p16；免疫組織化學

宮頸癌一直位于全球女性中最常見惡性腫瘤的第2位，占所有惡性腫瘤的9.8%。人類乳頭狀瘤病毒(human papilloma viruses，HPV)感染被認為是最重要的致病因素，其中起關鍵作用的是致癌基因E6、E7。p16是一個細胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)抑制劑，它調節CDK4和CDK6。在正常細胞中，p16是一個增殖的負性調節因子，一旦視網膜母細胞瘤(pRb)基因產物失活，就會通過一個負性反饋環使CDK4下調。HPV感染后，過表達的E7可與pRb蛋白相互作用使此負反饋環失活，導致p16上調，從而加快細胞的分裂增殖[1]。現如今，宮頸病理組織學檢查是一個標準診斷方法，但是萎縮、不成熟化生、移行上皮化生、修復或炎癥、異型性、不足的樣本面積及觀察者主觀標準的應用等均可導致其診斷準確度的下降和漏診率的升高[2]。為了克服蘇木精-伊紅(hematoxylin and eosin，HE)組織學診斷的缺點，p16蛋白過表達的檢測被廣泛應用于提高各級別上皮內瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)和宮頸癌活檢的組織診斷的重塑性。然而，p16 IHC染色對HE組織學診斷結果的影響還沒有被整體評估[3]。雖然許多研究已經應用p16 IHC染色分流宮頸病變，并將p16蛋白作為宮頸腫瘤預后的預測因子[4]，但很少有研究應用p16 IHC染色從非CIN病變中識別CIN病變以及評估它在常規病理檢查中的應用價值。本研究旨在應用p16 IHC染色對HE染色結果進行回顧性分析并發現漏診病例，從而探討HE染色聯合p16免疫組化(immunohistochemistry，IHC)染色在宮頸癌篩查中的作用及意義。

1　材料與方法

1.1研究對象所選樣本均為2014年10月至2015年3月河南省人民醫院病理科經福爾馬林溶液固定、石蠟包埋的243例宮頸活檢標本。患者年齡16～77歲，中位年齡39歲。所有患者無宮頸病變治療史。

1.2HE染色應用蘇木精-伊紅對宮頸組織標本進行染色。所用試劑均購自福州邁新公司，具體操作步驟嚴格按試劑說明書進行，并由兩名病理診斷醫生對HE染色結果進行評估。

1.3免疫組化染色采用免疫組化Envisivn法檢測p16在各病變中的表達情況。所有免疫組化試劑均購自于福州邁新公司，具體操作步驟嚴格按試劑說明書進行。同期采用熒光定量方法檢測HPV DNA。

1.4結果判定由兩名病理診斷醫生對p16 IHC染色結果做出評估，最后結果為兩名病理診斷醫生共同認定。宮頸上皮細胞的細胞核或胞核、胞質共同染色時為p16染色陽性，僅有細胞質染色被解釋為p16染色陰性。p16免疫組化染色的評估結合兩個參數：染色反應的強度和陽性細胞的分布形式。評估標準見表1。

表1　p16免疫組化染色的評估

注：陰性為無細胞染色；1+為p16染色為弱陽性；2+為p16染色為中等陽性；3+為p16染色為強陽性。

1.5統計學分析應用SPSS 17.0統計軟件進行數據分析。定性資料組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1HE染色結果共篩選243例宮頸組織標本，HE染色結果為166例非CIN、45例CINⅠ、12例CINⅡ、16例CINⅢ、4例宮頸癌。

2.2p16 IHC染色結果隨著病變級別的增加，p16 IHC染色陽性率呈逐漸遞增趨勢。見表2。

表2　HE染色組織切片的p16表達結果評估[n(%)]

2.3回顧性分析結果兩名病理診斷醫生結合p16 IHC染色結果對HE染色結果進行回顧性分析，發現非CIN病變中27例p16染色強陽性(+++)和1例p16染色中等陽性(++)者為CIN病變，其中包括12例CINⅠ、6例CINⅡ、10例CINⅢ。最終結果為138例非CIN病變、57例CINⅠ、18例CINⅡ、26例CINⅢ、4例宮頸鱗癌。見表3。p16陽性率從非CIN到宮頸癌呈逐漸遞增趨勢，p16陽性率與宮頸病變級別呈正相關，差異有統計學意義(P<0.05)。

表3　回顧性分析結果[n(%)]

2.4p16 IHC染色的價值評估結合p16 IHC染色結果，發現非CIN中有28例CIN。僅HE染色方法的靈敏度為72.28%，漏診率為27.72%，特異度為100%，誤診率為0%。

3　討論

在發展中國家和不發達國家，宮頸癌是威脅女性健康的首要惡性腫瘤，也是繼肺癌之后的全球最常見惡性腫瘤。世界衛生組織指出，宮頸癌是第1個完全由感染導致的惡性腫瘤[5]。

有研究已表明，病理組織學診斷為形態學診斷，主觀性較強，觀察者間的重復率較低[6]。此外，由于小的活檢面積、次要區域、炎癥反應或其他病變的共存均可造成組織學診斷的困難。Liao等[7]發現p16陽性率與病變級別之間具有正相關性。本研究中，在回顧性分析前，p16陽性率隨病變級別的增加而呈遞增趨勢。結合p16 IHC結果進行回顧性分析后，發現166例非CIN中有28例為CIN，分別為12例CINⅠ、6例CINⅡ、10例CINⅢ，且從非宮頸病變到宮頸癌p16陽性率呈逐漸遞增趨勢(P<0.05)。因此，p16蛋白是一個能夠較好反映宮頸病變的指標。

Liao等[7]發現 p16 IHC染色能夠作為提高病理組織診斷可信度的輔助工具。本研究中，結合p16 IHC染色結果發現非CIN中有28例CIN，而僅HE染色方法的靈敏度為72.28%，漏診率為27.72%，特異度為100%，誤診率為0%。由此可知，p16免疫組織方法可降低HE染色方法的漏診率，并提高靈敏度。

結合p16 IHC染色方法可檢測出漏診病例，使患者得到及時治療，可在一定程度上降低宮頸癌的發生率和死亡率；同時，也能夠使那些患有低級別CIN病變的女性加強隨訪，降低向高級別CIN病變進展的風險。另外，p16 IHC染色費用較低，易于操作，應該被應用于宮頸癌的篩查中。

綜上所述，p16 IHC染色方法能夠降低HE染色方法的漏診率，提高靈敏度，HE染色聯合p16 IHC染色在宮頸癌篩查中具有重要的應用價值。

[1]Liao G D,Sellors J W,Sun H K,et al.p16INK4A immunohistochemical staining and predictive value for progression of cervical intraepithelial neoplasia grade 1: A prospective study in China[J].Int J Cancer,2014,134(7):1715-1724.

[2]Kalof A N,Cooper K.p16INK4a immunoexpression:surrogate marker of high-risk HPV and high-grade cervical intraepithelial neoplasi[J].Adv Anat Pathol,2006,13(4):190-194.

[3]Cardoso F A,Campaner A B,Silva M A.Prognostic value of p16INK4a as a marker of clinical evolution in patients with cervical intraepithelial neoplasia grade 3 (CIN 3) treated by cervical conization[J].APMIS,2014,122(3):192-199.

[4]Lesnikova I,Lidang M,Hamilton-Dutoit S,et al.p16 as a diagnostic marker of cervical neoplasia: a tissue microarray study of 796 archival specimens[J].Diagn Pathol,2009,4:22.

[5]Martin C M,O’Leary J J.Histology of cervical intraepithelial neoplasia and the role of biomarkers[J].Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol,2011,25(5):605-615.

[6]Demir F,Kimiloglu E,Igdem A A,et al.High risk HPV in situ hybridization, p16INK 4A, and survivin expressions in cervical carcinomas and intraepithelial neoplasms: evaluation of prognostic factors[J].Eur J Gynaec Oncol,2014,35(6):708-717.

[7]Liao G D,Sellors J W,Sun H K,et al.p16INK4A immunohistochemical staining and predictive value for progression of cervical intraepithelial neoplasia grade 1: A prospective study in China[J].Int J Cancer,2013,134(7):1715-1724.

The value of p16 immunohistochemistry staining used in cervical cancer screening

Lv Xiufang, Song Xiaoxia, He Hui, Xu Jiyue, Kong Lingfei

(ZhengzhouUniversityPeople’sHospital/HenanProvincePeople’sHospital,Zhengzhou450000,China)

ObjectiveTo study the value of hematoxylin and eosin(HE) combined with p16 immunohistochemistry(IHC) staining used in cervical cancer screening. MethodsHE and IHC staining was used to detect 243 cervical biopsy specimens. The results were valuated by two pathologists. ResultsThe results of HE staining were 166 cases of non-CIN, 45 cases of CINⅠ, 12 cases of CINⅡ,16 cases of CINⅢ,4 cases of SCC. The results of HE staining were retrospectively analyzed according to p16 staining results, and 28 cases of cervical lesions were identified in 166 cases of non CIN, including 12 cases of CINⅠ, 6 cases of CINⅡ, 10 cases of CINⅢ. Conclusionp16 IHC staining can decrease the rate of missed diagnosis and improve the sensitivity of HE staining. HE staining combined with p16 IHC staining has very important practical value in cervical cancer screening.

cervical intraepithelial neoplasia; human papilloma viruses; p16; immunohistochemistry

R 737.33

10.3969/j.issn.1004-437X.2016.08.008

2015-12-30)