絕經前后乳腺癌組織E2和ER、TGF-β1、Bcl-2的比較

徐少艷

絕經前后乳腺癌組織E2和ER、TGF-β1、Bcl-2的比較

徐少艷

目的探討乳腺癌患者絕經前后腫瘤組織雌二醇（E2）、雌激素受體（ER）、轉化生長因子β1（TGF-β1）和B-淋巴細胞白血病-2基因（Bcl-2）表達水平的變化。方法分別選取絕經前乳腺癌患者（n=68）和絕經后乳腺癌患者（n=49），術中取癌組織及癌周正常組織，檢測E2水平、ER陽性率和TGF-β1和Bcl-2的表達情況。結果絕經后乳腺癌患者癌組織E2水平與絕經前患者無顯著差異（P>0.05），且兩者均高于癌周正常組織（P<0.01）；兩組癌組織的TGF-β1和Bcl-2表達水平均高于癌周正常組織（P<0.01），但組間無差異（P>0.05）；絕經前、絕經后兩組各有18例（52.9%）、16例（47.1%）ER陽性患者，其陽性率無組間差異（P>0.05）；經線性回歸分析，ER陽性患者的癌組織TGF-β1和Bcl-2水平均與其E2含量呈正相關（P<0.05），而ER陰性患者未表現出顯著相關性（P>0.05）。結論絕經前和絕經后癌組織TGF-β1和Bcl-2的表達量均受E2水平的影響，且在ER陽性患者中的表現尤為顯著。

乳腺癌；絕經；雌激素；TGF-β1；Bcl-2

作為女性最常見的惡性腫瘤之一，乳腺癌的發生和發展是多種因素共同作用的結果，其中，雌激素分泌水平和功能異常是其發病機制的經典學說[1]。進一步研究表明[2]，細胞凋亡信號通路同樣介導了乳腺癌的發病進程，免疫細胞異常凋亡和腫瘤細胞無限制增殖，促成了乳腺癌的免疫逃逸和病灶轉移。B-淋巴細胞白血病-2基因（B-cell lymphorma/leukemia-2 gene,Bcl-2）是與惡性腫瘤的增殖活性密切相關的凋亡調控基因之一，相關研究表明[3]，Bcl-2的組織表達水平不僅與乳腺癌的起病有關，與其分型和分期也有一定的聯系。轉化生長因子 β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）在細胞的生長和分化中起誘導作用，是腫瘤細胞發生惡性增殖和遷移始動因素之一[4]。雌激素、Bcl-2及TGF-β1均參與了乳腺癌的發病機制，然而對于三者之間是否有相互聯系，國內外研究報道甚少。本研究選取女性機體雌激素水平分水嶺-絕經期為觀測點，探討絕經后雌激素的自然變更對腫瘤組織TGF-β1和Bcl-2表達水平的影響。

1　資料與方法

1.1病例資料收集本院2010年3月～2015年7月收治并行手術切除的乳腺癌患者117例為研究對象，術前均經臨床和影像聯合診斷為乳腺癌，并由術后病理確診。其中49例絕經后 （完全停經時間＞1年）患者為絕經后組，年齡49～64（54.3±6.75）歲；病理分型：導管癌41例，導管原位癌18例；臨床分期：Ⅱ期11例，Ⅲ期42例，Ⅳ期6例。另外68例絕經前（包括絕經期和絕經前期）患者為絕經前組，年齡33～51（40.3±6.75）歲；病理分型：導管癌44例，導管原位癌24例；臨床分期：Ⅱ期11例，Ⅲ期52例，Ⅳ期5例。兩組在病理分型和臨床分期方面無統計學差異（P>0.05）。

2　結果

2.1兩組E2水平變化情況絕經后組癌組織E2水平為（153.4±8.4）pg/ml，絕經前組為（155.6±9.3）pg/ml，兩者無顯著差異（P>0.05）；絕經后組癌周正常組織E2水平為 （32.8±4.3）pg/ml，絕經前組為（33.2±3.9）pg/ml，兩者也無顯著差異（P>0.05），且均低于各組的癌組織水平（P<0.01）。

2.2兩組的ER陽性表達率經免疫組化鑒定（圖1），絕經前、絕經后兩組各有18例（52.9%）、16例（47.1%）ER陽性患者，其陽性率比較無組間差異（P>0.05）。

圖1　乳腺癌組織中陽性ER和陰性ER的免疫組化染色結果（×100）

圖2　兩組腫瘤組織TGF-β1和Bcl-2表達情況對比（免疫組織化學SP二步法DAB顯色×200)

2.3兩組TGF-β1和Bcl-2表達情況兩組癌組織的TGF-β1和Bcl-2水平均高于癌周正常組織 （P< 0.01，圖2），但無組間差異（P>0.05）。

2.4癌組織TGF-β1和Bcl-2水平與E2含量相關性分析經線性回歸分析，ER陽性患者的癌組織TGF-β1和Bcl-2水平均與其癌組織E2含量呈正相關（P<0.05，圖3）。Bal-2表達水平與E2水平的回歸公式為：y(Bcl-2)=0.0032x（E2）＋0.1411,R2= 0.6678（P<0.05）；TGF-β1表達水平與E2水平的回歸公式為：y(TGF-β1)=0.0047x（E2）-0.025，R2= 0.6547（P<0.05）。

圖3　E2陽性患者癌組織TGF-β1和Bcl-2表達與E2水平線性關系

3　討論

乳腺癌是典型激素依賴性疾病之一，據不同地區的臨床統計[5-7]，約55%～65%的乳腺癌患者由雌激素亢進引發。然而，作為雌激素水平急轉而下的分水嶺，絕經期對乳腺癌患者的生存健康并未表現出改善作用。據相關文獻表明[8]，部分絕經后乳腺癌患者面臨較絕經前等同的腫瘤細胞增殖率或病灶轉移率。本研究針對這一矛盾，對乳腺癌患者絕經后的雌激素水平變更及其對細胞凋亡相關因子TGF-β1、Bcl-2蛋白表達的影響，做了初步研究，并結合文獻報道對結果分析如下。

首先，受機體整體內分泌水平的影響，絕經后患者的體內E2水平發生大幅度的降低。然而本研究發現，絕經后乳腺癌患者癌組織內部E2仍保持高水平，說明乳腺癌病灶組織的E2不受整體雌激素水平降低的影響。

其次，本研究發現，絕經前后乳腺癌患者癌組織TGF-β1和Bcl-2的表達水平無組間差異，均顯著高于癌周正常組織。本研究認為，TGF-β1和Bcl-2異常分泌和表達上調均為乳腺癌的重要致病因素，而且兩者與E2之間，可能存在相互激動作用。既往研究表明[9-11]，E2可通過TGF-β1活化發揮多重病理功能，如直接促進腫瘤細胞惡性分化和增殖；促進腫瘤細胞上皮間質轉化，使瘤體細胞發生形態學改變，更加適應遷徙運動，從而加重病灶轉移率；提高基質金屬蛋白酶活性，加速細胞外基質降解，從而誘發更為嚴重的炎癥反應等。同屬于凋亡相關因子，TGF-β1和Bcl-2之間也有一定的聯系，體外干預實驗已證實[12-13]，TGF-β1可促進Bcl-2的表達，從而發揮抗細胞凋亡作用，協同促進細胞的生長和增殖。本研究認為，隨著絕經后免疫功能的衰退，對腫瘤細胞的抑制力減弱，致使其繁殖能力增強，是在外圍E2降低的情況下，TGF-β1和Bcl-2表達量依舊偏高的重要因素之一。然而，TGF-β1和Bcl-2是否為腫瘤內部雌激素居高不下的誘導因子，僅能做出初步推論，尚需深入研究加以證實。

此外，既往研究表明[14-15]，E2對多種細胞的凋亡過程存在調試作用，并且主要通過其受體ER來實現，然而其具體機制尚無定論。ER是雌激素信號轉導通路作用于靶組織的樞紐組件，也是乳腺癌治療領域的重要研究靶點。以ER干預為基礎建立起來的激素替代療法和免疫療法改善了數以萬計乳腺癌患者的生存前景。正常生理條件下，子宮中的ER主要作用是刺激子宮生長。但在病理條件下，也可能促進腫瘤組織的增生。本組病例中僅ER陽性患者的癌組織TGF-β1和Bcl-2水平與E2含量表現出顯著相關性，在ER陰性患者卻沒有，說明ER陽性乳腺癌患者的TGF-β1和Bcl-2水平變化更容易受到E2水平的影響。以往有研究指出，乳腺癌細胞的生長受ER和孕激素受體（progesterone receptor,PR）的調控，其表達情況對于指導內分泌治療意義重大。而本研究則證實了ER可能是E2調節TGF-β1 和Bcl-2表達、影響腫瘤細胞凋亡的關鍵物質之一。

綜上所述，乳腺癌患者絕經后癌組織內部的E2含量可獨立于外周雌激素變更而保持較高水平，且癌組織內部 E2水平是決定腫瘤細胞TGF-β1和Bcl-2的表達量的關鍵因素，在ER陽性患者的表現尤為顯著。

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Comparison of E2 and ER,TGF-beta1 and Bcl-2 levels between patients with breast cancer before and after menopause

Xu ShaoyanDepartment of Pathology,People'shospital of Linzi District,Zibo,Shandong,255400,China

ObjectiveTo explore the changes in the estradiol(E2),estrogen receptor(ER),transforming growth factor β1 (TGF-β1),and B-cell lymphorma/leukemia-2 gene(Bcl-2)levels of patients with breast cancer in menopause and post-menopause. MethodsPatients with breast cancer befoer(n=68)and after menopause(n=49)were selected in this study.Both tumor tissues andhealthy tissues around the tumor were obtained during the operation in order to detect the E2 levels,ER positive rate,and the expression of TGF-β1 and Bcl-2.ResultsThere was no significant difference in the E2 levels between the patients with breast caner before and after menopause(P>0.05),and their levels were allhigher than those of the normal tissues around the tumor(P<0.01). The two groups'TGF-β1 and Bcl-2 expression levels were allhigher than those of the normal tissues around the tumor(P<0.01),but the difference between the groups was not significant(P>0.05).There were 18 and 16 cases of positive ER(52.9%and 47.1%) among the premenopausal/postmenopausal patients,and there was no significant difference in the positive rates between the two groups of people(P>0.05).The simple linear regression analysis indicated that there was a positive correlation between the TGF-β1 and Bcl-2 levels in the tumor tissues of patients with positive ER and their E2 contents(P<0.05),while the correlation was not obvious in patients with negative ER(P>0.05).ConclusionThe TGF-beta1 and Bcl-2 expression levels in the tumors tissues of patients before and after menopause are influenced by E2 levels,especially in ER positive patients.

breast cancer;menopause;oestrogen;TGF-beta1;Bcl-2

R 737.9

A

1004-0188（2016）01-0044-04

10.3969/j.issn.1004-0188.2016.01.016

255400山東 淄博，淄博市臨淄區人民醫院病理科

1.2研究方法所有患者均于手術過程中取腫瘤及腫瘤周邊正常組織，分裝于兩管。A管采用ELISA法檢測雌二醇（E2）含量，試劑盒由上海拜力生物科技有限公司提供。B管采用免疫組織化學SP二步法檢測雌激素受體（ER）、TGF-β1和Bcl-2表達情況：制備石蠟病理切片，60℃烘烤12h，二甲苯脫蠟，3.0%H2O2封閉；加一抗（1∶1000），4℃孵育12h，以PBS液反復漂洗3～4次；加二抗（1∶500），25～28℃孵育30 min；PBS液沖洗，DAB顯色，顯微鏡下觀察。試劑盒由福州邁新生物技術開發有限公司提供。

1.3指標評價方法在400倍視野下觀察免疫組化切片，取5個視野，計數陽性細胞數和腫瘤細胞數，染成黃色者為陽性細胞。陽性細胞率=陽性細胞數/腫瘤細胞數×100%。根據陽性細胞率評定陽性細胞得分：陰性記0分，陽性率1.0%～33%記1分，34%～66%記2分，＞66%記3分；將染色強度也進行評分：陰性記0分，淡黃色記1分，黃色記2分，棕黃色記3分。陽性表達強度=陽性細胞得分+染色強度得分。

1.4統計學方法數據采用SPSS16.0統計學軟件進行分析，計量資料以x±s表示，行t檢驗；計數資料以例和率表示，比較行χ2檢驗；相關性考察行線性回歸分析；P<0.05表示差異有統計學意義。

（2015-08-26）