B群鏈球菌SrtC基因多態性與定植/侵襲力的相關性研究△

B群鏈球菌SrtC基因多態性與定植/侵襲力的相關性研究△

唐敏兒1鄧志聲1黃冬梅1江新湄2覃麗軍2（1.佛山市南海經濟開發區人民醫院檢驗科佛山528222；2.佛山市南海經濟開發區人民醫院婦產科佛山528222）

目的：探討B群鏈球菌SrtC基因多態性與定植/侵襲力的相關性。方法：將我院2015年10月～2016年5月收治的500例圍產期女性分為8組，生殖道定植B群鏈球菌有126例，占25.2%，Ⅰ型菌22例，占4.4%，Ⅱ型菌18例，占3.6%，Ⅲ型菌48例，占9.6%，Ⅳ型菌12例，占2.4%，Ⅴ型菌7例，占1.4%，Ⅵ型菌10例，占2%，Ⅶ菌9例，占1.8%。生殖道未定植B群鏈球菌有374名，作為對照組。結果：在7型菌中，Ⅲ型菌毒力最強，定植/侵襲力最大，7組實驗組和對照組比較，定植/侵襲力最小。結論：B群鏈球菌StrC基因多態性與定植/侵襲力有關。

B群鏈球菌 SrtC基因多態性 定植 侵襲力

B群鏈球菌（GBS）又稱無乳鏈球菌，屬β溶血性鏈球菌，它的毒力與特異的莢膜多糖抗原、脂磷壁酸、神經氨酸酶等有關，主要通過抗吞噬作用，或增強細菌對組織細胞的黏附發揮侵襲力，Ⅲ型含脂磷酸和神經氨酸酶最多，毒力最強［1～2］。B群鏈球菌是圍產期女性嚴重感染的主要病原菌之一，B群鏈球菌主要定植于陰道和肛門。B群鏈球菌可引發早產、晚期流產、胎膜早破、胎兒生長受限等一系列母嬰不良結局，被列為美國圍產期感染的首要原因，長期以來，我國對此并不重視。B群鏈球菌篩查技術在一定程度上降低了新生兒早發型B群鏈球菌感染，不過也帶來了一些副作用，比如抗生素濫用、耐藥率增加、新生兒G-感染率上升。現在新研究發現的生物學標記為人類的醫學發展帶來了新希望，為孕婦預防性使用抗生素提供依據，可通過該方法判定檢出菌珠的定植或侵襲能力，大幅度減少濫用抗生素引發的不良后果。

1　對象與方法

1.1臨床資料：選擇2015年10月～2016年5月收治的圍產期女性500例，年齡21～39歲，平均年齡29.2歲，孕齡35～37周，詳細記錄每位孕婦的病史，羅列引發B群鏈球菌定植的危險因素。排除過去2周使用過抗生素的圍產期女性。研究對象均需簽署知情同意書。

1.2研究方法：使用消毒窺陰器，取3mL無菌0.9g/dl生理鹽水反復沖洗陰道。在陰道取分泌物，并做病理檢查分型。探究各型與定植與侵襲力的相關性。現有檢測方法：1.細菌鑒定儀法：它的優點是準確度高，缺點是費用較高，不能直接上標本，純菌培養時間長。2.普通培養加生化鑒定法：此法是檢測的金標準。優點是特異性好，缺點是需要細菌純培養，鑒定試驗煩瑣。3.分子生物學方法（PCR法）：它的優點是快速敏感，缺點是假陽性較難排除，對人員和設備要求較高。4.免疫學方法（層析法）：優點是特異性好，缺點是靈敏度低。5.乳膠凝集法：它的優點是特異性好，缺點是細菌純化培養時間長。6.顯色培養基：它的優點是靈敏度高，特異性好，可直接上標本，使用方法和傳統培養方法相同，無特殊要求，簡便易行［3～4］。

1.3評估指標：B群鏈球菌與定植或侵襲力的相關性。它的毒力與特異的莢膜多糖抗原、脂磷壁酸、神經氨酸酶等有關，主要通過抗吞噬作用，或增強細菌對組織細胞的黏附發揮侵襲力，Ⅲ型含脂磷酸和神經氨酸酶最多，毒力最強。

1.4統計學方法：采用SPSS18.0軟件進行統計學分析，計量資料以均數±標準差（）表示，采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

表1　B群鏈球菌SrtC基因多態性與定植/侵襲力的相關性

在7型菌中，Ⅲ型菌毒力最強，定植/侵襲力最大，7組實驗組和對照組比較，定植/侵襲力最小。

3　討論

B群鏈球菌（GBS）又名無乳鏈球菌，屬于β溶血性鏈球菌，它的毒力大小與特異的莢膜多糖抗原、脂磷壁酸、神經氨酸酶數量等有關，通過抗吞噬作用，或增強細菌對組織細胞的黏附作用發揮侵襲力，因Ⅲ型含脂磷酸和神經氨酸酶最多，所以毒力最強。B群鏈球菌是圍產期女性嚴重感染的主要病原菌之一，研究表明，新生兒早發型感染的病死率高達50%～80%，圍生期的女性預防性使用抗生素可有效地減少新生兒早發型GBS敗血癥的發病［5～6］，但存在一些缺點，根據B群鏈球菌在孕婦中的攜帶方式可以分為三種，一過性、間歇性、長期定植。如果圍產期婦女GPS為陽性，并不能代表此婦女長期攜帶B群鏈球菌或是B群鏈球菌感染者，只能代表此時刻攜帶B群鏈球菌，不能下確切得臨床診斷。B群鏈球菌從母嬰傳播途徑來看，傳播率為30% ～50%，帶菌的新生兒的發病率為1%左右，因此圍產期女性檢查出陽性可能會發生抗生素濫用，嚴重影響醫學事業的發展。B群鏈球菌是革蘭氏陽性菌，呈現鏈狀排列方式，常見于人體腸道中，易致新生兒敗血癥。該病有早發性感染與遲發性感染兩種，前者是垂直感染，發病期是新生兒一周內，后者發病期是新生兒一周后，主要是接觸不潔的手所致。GBS感染誘發圍產期女性多種疾病。圍產期女性感染表現為菌血癥、泌尿系統感染、胎膜感染、子宮內膜感染和創傷感染。

胎膜早破的最主要因素是B群鏈球菌感染［7］。由于對絨毛膜較強的吸附和穿透能力，短時間內即可吸附于人體內，繼而入侵，產生的蛋白水解酶直接侵襲降低胎膜局部張力，致胎膜早破。外國研究報道顯示，尿感染GBS的胎膜早破發生率高達30%左右。羊膜腔感染也是B群鏈球菌感染的直接結果。分析表明B群鏈球菌+是引起絨毛膜羊膜炎的重要危險因素。B群鏈球菌+圍產期女性早產合并低出生體重兒的可能性大大增加。產褥感染的主要致病菌是B群鏈球菌。產褥感染定義為圍產期女性分娩時及產褥期生殖道受病原體感染，引起局部和全身的炎性反應。B群鏈球菌篩查技術在一定程度上降低了新生兒早發型B群鏈球菌感染率，不過也帶來了一些副作用，比如抗生素濫用、耐藥率增加、新生兒G-感染率上升。

不同種類的微生物（細菌）常從不同的環境入侵人體，并能在人體一定部位停留、生長、繁殖的現象通常稱為“細菌定植”。人體不斷供給營養物質給微生物，定植的微生物不斷生長繁殖，感染人體。細菌定植的條件有三，細菌的黏附力是細菌定植的基礎。一旦細菌牢固黏附機體的黏膜上皮細胞，就不會脫落。適宜的環境是細菌定植的必要條件。電解質平衡，酸堿度合適和充足的營養物質等提供定植細菌生長需要。大基數是保證細菌定植成功的重要因素。少量細菌易脫落，大量細菌因為數量多不易脫落。微生物在人體定植取決于兩方面。一方面是外部條件，另一方面是人體存在定植抵抗力。人體對于外來細菌的定植有一定抵抗力，產生對抗。細菌侵襲力是細菌突破宿主皮膚、黏膜生理屏障等免疫防御機制，進入機體定居，繁殖和擴散的能力。B群鏈球菌主要定植于陰道和肛門。B群鏈球菌可引發早產、晚期流產、胎膜早破、胎兒生長受限等一系列不良后果，在美國被列為圍產期感染的首要原因，但是長期以來，我國對此并不重視。現在新研究發現的生物學標記為人類的醫學發展帶來了新希望，為孕婦預防性使用抗生素提供依據，可通過該方法判定檢出菌株的定植或侵襲能力，大幅度減少濫用抗生素引發的不良后果。

細菌鑒定儀，即自動微生物鑒定儀，鑒定系統可鑒定包括細菌、酵母和真菌在內約2000種微生物，方便應用于各個領域的微生物實驗室，用于對微生物的鑒定，是美國Biolog公司微生物鑒定領域的新技術新產品。B群鏈球菌在顯色培養基上顯示為紅色。細菌鑒定儀法優點是準確度高，可作為臨床依據，缺點是費用較高，不能滿足廣大民眾的要求，不能直接上標本，純菌培養時間長，不能作為急癥檢查方法。普通培養加生化鑒定法是檢測的金標準，臨床應用廣泛，優點是特異性好，臨床上較易識別，缺點是需要細菌純培養，鑒定試驗煩瑣，操作困難，也不適合急癥檢查。分子生物學方法（PCR法）優點是快速敏感，適用于急癥的檢查，缺點是假陽性較難排除，容易與真陽性混淆，對人員和設備要求較高。免疫學方法（層析法）優點是特異性好，是醫者臨床的常用診查方法，缺點是靈敏度低，操作不太方便。乳膠凝集法優點是特異性好，缺點是細菌純化培養時間長。顯色培養基優點是靈敏度高，特異性好，可直接上標本，使用方法和傳統培養方法相同，無特殊要求，簡便易行。PCR法和顯色培養基的靈敏度高，免疫層析法的靈敏度低。細菌鑒定儀法、普通培養加生化試驗法、乳膠凝集法、顯色培養基的特異性高，PCR法的特異性低。普通培養加生化試驗法、PCR法、免疫層析法、顯色培養基能直接上標本，細菌鑒定儀法與乳膠凝集法不能直接上標本。PCR法、免疫層析法出結果耗時短，顯色培養基出結果耗時＜24h，細菌鑒定儀法、乳膠凝集法＞24h，普通培養加生化試驗法＞48h。細菌鑒定儀法、免疫層析法、乳膠凝集法、顯色培養基操作簡單，普通培養加生化實驗法、PCR法操作不簡單，煩瑣，細菌鑒定儀法、PCR法儀器昂貴，普通培養加生化試驗法、免疫層析法、乳膠凝集法、顯色培養基儀器不貴，廣大民眾易于接受。

基因多態性的定義為在一個物種內，共存兩種或兩種以上間斷的變異型或基因型或等位基因，亦名遺傳多態性。基因多態性現象普遍。基因組中重復序列數、單基因變異、雙等位基因交替均可導致基因多樣性的結果。基因多態性的作用很大，具體有錯義突變、無義突變、同義突變、移碼突變、剪接異常。

4　結論

通過以上方法，得出結論：B群鏈球菌StrC基因多態性與定植/侵襲力有關。在7型菌中，Ⅲ型菌毒力最強，定植/侵襲力最大，7組實驗組和對照組比較，定植/侵襲力最小。B群鏈球菌（GBS）的毒力大小與特異的莢膜多糖抗原、脂磷壁酸、神經氨酸酶數量等有關，通過抗吞噬作用，或增強細菌對組織細胞的黏附作用發揮侵襲力，因Ⅲ型含脂磷酸和神經氨酸酶最多，所以毒力最強。

［1］朱艷賓.妊娠期需氧菌性陰道炎與妊娠結局及母嬰B族鏈球菌感染的相關性研究［D］.天津醫科大學，2013，5（1）：19-20.

［2］吳濤.豬鏈球菌2型revS基因缺失株構建及HYL蛋白與宿主互作的研究［D］.華中農業大學，2008，6（1）：70-71.

［3］朱宏飛.腦膜炎奈瑟氏菌莢膜抗原基因簇的研究和遺傳分型方法的建立［D］.南開大學，2012，5（1）：91-92.

［4］鞠愛萍.蘇中地區豬鏈球菌分子流行病學調查及豬鏈球菌2型反應調控因子RevS缺失株的構建［D］.南京農業大學，2007，5 （1）：218-219.

［5］王彥君.細胞毒性T淋巴細胞相關抗原4基因微衛星多態性與炎癥性腸病相關性研究［D］.吉林大學，2008，4（1）：697-698.

［6］司有輝.谷氨酰胺合成酶GlnA及其轉錄調節因子GlnR對2型豬鏈球菌致病力影響的研究 ［D］.華中農業大學，2009，6（1）：942-943.

［7］王穎童.河北省健康人群腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌帶菌情況調查研究 ［D］.中國疾病預防控制中心，2013，6 （30）：126-127.

△佛山市衛生和計生局醫學科研課題立項，編號2015278。

R446.5

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1672-8351（2016）09-0141-03