維藥蜀葵花黃酮類(lèi)成分的分離與結(jié)構(gòu)鑒定*

張 祎，晁利平，陳 秋，董勇喆，李曉霞，王 濤

（天津市中藥化學(xué)與分析重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300193）

·中藥研究·

維藥蜀葵花黃酮類(lèi)成分的分離與結(jié)構(gòu)鑒定*

張 祎，晁利平，陳 秋，董勇喆，李曉霞，王 濤

（天津市中藥化學(xué)與分析重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300193）

［目的］對(duì)維藥蜀葵花［Althae a rosea（Linn.）Cavan.］中的黃酮類(lèi)成分進(jìn)行研究。［方法］采用正相硅膠、反相ODS、Sephadex LH-20等柱色譜及高效液相色譜手段進(jìn)行分離純化，并通過(guò)理化性質(zhì)與波譜分析方法鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。［結(jié)果］從蜀葵花體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇提取物中分離了9個(gè)黃酮類(lèi)單體成分，分別為木犀草素（1）、木犀草素-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（2）、山奈酚（3）、山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（4）、山柰酚-3-O－（6″-O-反式對(duì)香豆酰基）－β-D-吡喃葡萄糖苷（5）、山柰酚-3-O-（6″-O-順式對(duì)香豆酰基）－β-D-吡喃葡萄糖苷（6）、山柰酚-3-O－（6″-O-阿魏酰基）－β－D-吡喃葡萄糖苷（7）、山奈酚-3-O-蕓香糖苷（8）、山奈酚-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（9）。［結(jié)論］化合物6、7為首次從蜀葵屬中分離得到，9為首次從該植物中分離得到。

蜀葵花；化學(xué)成分；結(jié)構(gòu)鑒定

蜀葵花為錦葵科蜀葵屬蜀葵 ［Althaea rosea （Linn.）Cavan.］的干燥花，別名為淑氣花、一丈紅、麻桿花、棋盤(pán)花等［1］，是維吾爾、蒙古等少數(shù)民族常用中草藥，在維吾爾族民間自古就有用蜀葵花外敷消腫的習(xí)慣。其可全草入藥，味甘甜，性涼，有清熱解毒，止血消腫，排膿，利尿通淋的功效，用于治療癰腫瘡瘍，燒燙傷，吐血、血崩，腸炎，痢疾，梅核氣等癥，并能解河豚毒［2］。筆者在應(yīng)用多種色譜法對(duì)其95%乙醇（EtOH）提取物的化學(xué)成分進(jìn)行研究的過(guò)程中，共分離鑒定了9個(gè)黃酮類(lèi)單體化合物，并利用與文獻(xiàn)類(lèi)似的方法對(duì)它們進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定［3-7］。其中，6、7為首次從蜀葵屬中分離得到，9為首次從該植物中分離得到的化合物。見(jiàn)圖1。

1 儀器與材料

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國(guó)IKA公司，IKA RV 10、上海亞榮生化儀器廠，RE52CS），薄層色譜硅膠預(yù)板、高效硅膠GF254（天津思利達(dá)科技有限公司），正相柱色譜用硅膠（48～75 μm），薄層色譜用硅膠H（10～40 μm，青島海洋化工廠），Sephadex LH-20（瑞典Ge Healthcare Bio-Sciences AB公司），D101大孔吸附樹(shù)脂（凈品級(jí)，天津海光化工有限公司），ODS （Chromatorex ODS MB，40～75 μm，日本Fuji Silisia Chemical公司），高效液相色譜（HPLC）用分析柱以及制備柱型號(hào)分別為Cosmosil5C18-MS-II（250mm×4.6 mm，5 μm）及（250 mm×20 mm，5 μm，日本Nacalai Tesque公司），Bruker 500 MHz NMR超導(dǎo)核磁共振波譜儀（瑞士Bruker公司，AvanceⅢ500MR）。

圖1 蜀葵花中分離到的黃酮類(lèi)化合物（1～9）

氯仿、甲醇、乙腈、丙酮、冰醋酸等色譜純或分析純?cè)噭┵?gòu)自天津康科德科技有限公司。蜀葵花采自新疆吉木薩爾（人工種植），由天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥標(biāo)本館李天祥副教授鑒定為蜀葵的干燥花（A.rosea L.），植物標(biāo)本存放于天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院。

2 提取與分離

取干燥蜀葵花（5.0 kg），粉碎，經(jīng)95%EtOH加熱回流提取，減壓回收溶劑，真空干燥，得浸膏。上述浸膏（380 g）經(jīng)D101大孔吸附樹(shù)脂處理（H2O→70%EtOH→95%EtOH），得到H2O、70%EtOH、95% EtOH洗脫物分別為171 g、169 g及12 g。其中70% EtOH洗脫物（120 g），經(jīng)硅膠柱色譜層析［CHCl3-MeOH（100∶0→100∶5，v/v）→CHCl3-MeOH-H2O（10∶3∶1→6∶4∶1，v/v/v，下層）］，得到12個(gè)組分（Fr.1～12）。

Fr.2（8.6 g）經(jīng)硅膠柱色譜層析［石油醚-乙酸乙酯（100∶0→2∶1，v/v）］及Sephadex LH-20柱層析［CHCl3-MeOH（1∶1，v/v）］，得到山柰酚（3，70.3 mg）。Fr.3（9.0 g）經(jīng)ODS柱色譜層析［MeOH-H2O（30∶70→100∶0，v/v）和制備型高效液相色譜法（PHPLC）分離制備［MeOH-H2O（55∶45，v/v）+1%HAc］，得到木犀草素（1，77.0 mg）。

Fr.4（10.0 g）經(jīng)PHPLC分離制備［MeOH-H2O （40∶60→45∶55→55∶45，v/v）+1%HAc］，得到13個(gè)組分（Fr.4-1～4-13）。Fr.4-4經(jīng)PHPLC分離制備［MeOH-H2O（40∶60，v/v）+1%HAc］，得到山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷（4，208.4 mg）。Fr.4-7經(jīng)PHPLC分離制備［MeOH-H2O（50∶50，v/v）+1%HAc］，得到了山柰酚-3-O-（6″-O-反式對(duì)香豆酰基）-β-D-吡喃葡萄糖苷（5，8.0 mg）。Fr.4-8經(jīng)PHPLC分離制備［MeOH-H2O（50∶50，v/v）+1%HAc］，得山柰酚-3-O-（6″-O-順式對(duì)香豆酰基）-β-D-吡喃葡萄糖苷（6，29.1 mg）及山柰酚-3-O－（6″-O-阿魏酰基）-β-D-吡喃葡萄糖苷（7，21.3 mg）。

Fr.7（11.9g）經(jīng)甲醇溶解后離心，將上清液（4.9 g）經(jīng)ODS柱層析［MeOH-H2O（20%→30%→40%→60%→100%）］，得到5個(gè)組分（Fr.7-1～7-5）。Fr.7-3 經(jīng)PHPLC分離制備［MeOH-H2O（35∶65，v/v）+1% HAc］，得到了木犀草素-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（2，14.1 mg）、山奈酚-3-O-蕓香糖苷（8，40.5 mg）及山奈酚-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（9，6.4 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 287.0553［M+H］+，確定其分子式為C15H10O6（Calcd for C15H11O6，287.055 0）。1HNMR（500 MHz，DMSO-d6）：δ 6.24（1H，br.s，H-6），6.49 （1H，br.s，H-8），6.68（1H，s，H-3），6.95（1H，d，J=8.5 Hz，H-5′），7.45（2H，m，H-2′and 6′）、13.01 （1H，s，5-OH）。其1H-NMR譜、13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6，表1）譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］相對(duì)照，鑒定該化合物為木犀草素（luteolin）。

化合物2：黃色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 449.108 7［M+H］+，確定其分子式為C21H20O11（Calcd for C21H21O11，449.107 8）。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）：δ 4.87（1H，d，J=7.5 Hz，H-1"）、6.19（1H，d，J=1.5 Hz，H-6）、6.48（1H，J= 1.5 Hz，H-8）、6.80（1H，s，H-3）、7.25（1H，J=8.5 Hz，H-5′），7.50（1H，br.s，H-2′）、7.53（1H，m，br.d，ca.J=9 Hz，H-6′）、12.90（1H，s，5-OH）。其1H-NMR譜、13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6，表1）譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］相對(duì)照，鑒定該化合物為木犀草素-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（luteolin-4′-O-β-D-glucopyranoside）。

化合物3：黃色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 287.056 3［M+H］+，確定其分子式為C15H10O6（Calcd for C15H11O6，287.055 0）。1HNMR（500 MHz，DMSO-d6）：δ 6.25（1H，br.s，H-6）、6.49 （1H，br.s，H-8）、6.98（2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，5′）、8.10（2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，6′）、12.52（1H，s，5-OH）。其1H-NMR譜、13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6，表1）譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］相對(duì)照，鑒定該化合物為山奈酚（kaempferol）。

化合物4：黃色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 449.109 1［M+H］+，確定其分子式為C21H20O11（Calcd for C21H21O11，449.107 8）。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）：δ 5.47（1H，d，J=7.5 Hz，H-1″），6.21（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），6.44（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），6.89（2H，d，J=8.5，H-3′，5′），8.05 （2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，6′），12.62（1H，s，5-OH）。其1H-NMR譜、13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6，表1）譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］相對(duì)照，鑒定該化合物為山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside）。

化合物5：黃色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 595.144 1［M+H］+，確定其分子式為C30H26O13（Calcd for C30H27O13，595.144 6）。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）：δ［4.04（1H，dd，J= 6.5、12.0 Hz），4.28（1H，br.d，ca.J=12 Hz），H2-6］，5.42（1H，d，J=7.5 Hz，H-1″），6.13（1H，d，J=16.0 Hz，H-8″′），6.28（1H，br.s，H-6），6.39（1H，br.s，H-8），6.79（2H，d，J=8.5 Hz，H-3″′，5″′），6.84（2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，5′），7.35（1H，d，J=16.0 Hz，H-7″′），7.38（2H，d，J=8.5 Hz，H-2″′，6″′），7.98（2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，6′），12.51（1H，s，5-OH）。其1H-NMR譜、13C-NMR （125 MHz，DMSO-d6，表1）譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］相對(duì)照，鑒定該化合物為山柰酚-3-O-（6″-O-反式對(duì)香豆酰基）-β-D-吡喃葡萄糖苷（kaempferol-3-O-（6″-O-trans-p-coumaroyl）-β-D-glucopyranoside）。

化合物6：黃色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 595.144 9［M+H］+，確定其分子式為C30H26O13（Calcd for C30H27O13，595.144 6）。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）：δ［4.10（1H，dd，J= 6.0、12.0 Hz）、4.18（1H，br.d，ca.J=12 Hz），H2-6″］，5.40（1H，d，J=7.5 Hz，H-1″），5.49（1H，d，J=13.0 Hz，H-8″′），6.16（1H，br.s，H-6），6.31（1H，br.s，H-8），6.68（1H，d，J=13.0 Hz，H-7″′），6.72（2H，d，J=8.5 Hz，H-3″′，5″′），6.85（2H，d，J=9.0 Hz，H-3′，5′），7.56 （2H，d，J＝8.5 Hz，H－2″′，6″′），7.95（2H，d，J=9.0 Hz，H-2′，6′），12.53（1H，s，5-OH）。其1H-NMR譜、13CNMR（125 MHz，DMSO-d6，表1）譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］相對(duì)照，鑒定該化合物為山柰酚-3-O－（6″-O-順式對(duì)香豆酰基）-β-D-吡喃葡萄糖苷（kaempferol-3-O-（6″-O-cis-p-coumaroyl）-β-D-glucopyranoside）。

化合物7：黃色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 625.155 0［M+H］+，確定其分子式為C31H28O14（calcd for C31H29O14，625.155 2）。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）：δ 3.88（3H，s，3″′-OCH3），5.31（1H，d，J=7.5 Hz，H-1″），6.05（1H，d，J= 16.0 Hz，H-8″′），6.13（1H，br.s，H-6），6.26（1H，br.s，H-8），6.80（1H，d，J=8.0 Hz，H-5″′），6.80（2H，d，J= 8.5 Hz，H-3′，5′），7.26（2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，6′），7.36（1H，d，J=16.0 Hz，H-7″′），7.53（1H，br.d，ca.J= 8 Hz，H-6″′），7.83（1H，br.s，H-2″′）。其1H-NMR譜、13C-NMR（125 MHz，CD3OD，表1）譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］相對(duì)照，鑒定該化合物為山柰酚-3-O－（6″-O-阿魏酰基）-β-D-吡喃葡萄糖苷（kaempferol 3-O-β-D－（6″-feruloylglucoside））。

化合物8：黃色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 595.166 2［M+H］+，確定其分子式為C27H30O15（Calcd for C27H31O15，595.165 7）。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）：δ 1.01（3H，d，J=6.5 Hz，6″′-CH3），4.41（1H，br.s，H-1″′），5.33（1H，d，J= 7.5 Hz，H-1″），6.23（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），6.43（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），6.91（2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，5′），8.01（2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，6′），12.57（1H，s，5-OH）。其1H-NMR譜、13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6，表1）譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］相對(duì)照，鑒定該化合物為山奈酚-3-O-蕓香糖苷（Kaempferol 3-O-rutinoside）。

化合物9：黃色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 449.107 8［M+H］+，確定其分子式為C21H20O11（Calcd for C21H21O11，449.107 8）。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）：δ 4.99（1H，d，J=7.0 Hz，H-1″），6.20（1H，br.s，H-6），6.47（1H，br.s，H-8），7.19（2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，5′），8.14（2H，d，J= 8.5 Hz，H-2′，6′），12.42（1H，s，5-OH）。其1H-NMR譜、13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6，表1）譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］作對(duì)照，鑒定該化合物為山奈酚-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（kaempferol4′-O-β-D-glucopyranoside）。

化合物1～9中13C-NMR數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。

表1 化合物1～9中13C-NMR數(shù)據(jù)

4 結(jié)論

本課題運(yùn)用色譜和波譜學(xué)方法對(duì)蜀葵花的化學(xué)成分進(jìn)行研究，從中分離鑒定了9個(gè)黃酮類(lèi)單體成分，分別為木犀草素（1）、木犀草素-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（2）、山奈酚（3）、山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（4）、山柰酚-3-O－（6″-O-反式對(duì)香豆酰基）-β-D-吡喃葡萄糖苷（5）、山柰酚-3-O-（6″－O－順式對(duì)香豆酰基）－β－D－吡喃葡萄糖苷（6）、山柰酚-3-O-（6″-O-阿魏酰基）－β－D-吡喃葡萄糖苷（7）、山奈酚-3-O-蕓香糖苷（8）、山奈酚-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（9）。其中化合物6、7為首次從蜀葵屬中分離得到，9為首次從該植物中分離得到。

5 討論

蜀葵花是維吾爾族常用藥材，在新疆廣泛種植、資源豐富。臨床上蜀葵花用途廣泛，已用于眼皮炎腫、耳底炎、乳腺炎等各種炎癥［17］。但蜀葵花藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制尚未明確，沒(méi)有建立起質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，未能充分挖掘和研究蜀葵獨(dú)特的藥用功效，尚未開(kāi)發(fā)出中藥產(chǎn)品，不能滿足國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)的需求。本課題對(duì)蜀葵花的化學(xué)成分進(jìn)行研究，為蜀葵花進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用提供了堅(jiān)實(shí)的物質(zhì)基礎(chǔ)

［1］張 祎，陳 秋，劉麗麗，等.維藥蜀葵花化學(xué)成分的分離與鑒定（I）［J］.沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，30（5）：335-341.

［2］王曉麗，張紅秋，崔紅梅.蜀葵輔助治療河豚魚(yú)中毒的療效觀察［J］.中華全科醫(yī)學(xué)，2010，8（4）：525-526.

［3］吳 帥，劉二偉，張 祎，等.川續(xù)斷中化學(xué)成分的研究［J］.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，29（3）：147-150.

［4］吳克磊，康利平，熊呈琦，等.蒺藜全草中甾體皂苷類(lèi)化學(xué)成分研究［J］.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，31（4）：225-228.

［5］劉麗麗，李曉霞，陳 玥，等，槐米化學(xué)成分研究I［J］.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào).2014，33（4）：230-233.

［6］鄧 屾，劉麗麗，陳 玥，等.益母草化學(xué)成分研究Ⅲ［J］.2014，33（6）：362-365.

［7］劉麗麗，李曉霞，陳 玥，等，槐米中酚酸類(lèi)化學(xué)成分研究I［J］.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào).2014，33（1）：39-41.

［8］陳曉珍，李國(guó)友，吳曉青，等.血滿草的化學(xué)成分［J］.應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào)，2010，16（2）：197-201.

［9］景永帥，楊 娟，汪 冶，等.光枝勾兒茶中蒽醌-苯并異色滿苯醌二聚體成分［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2011，46（9）：661-664.

［10］解紅霞，張金花，張宏桂，等.蒙藥玉簪花的化學(xué)成分研究［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2009，44（10）：733-735.

［11］常仁龍，孫佳明，張 博，等.核桃楸葉化學(xué)成分研究［J］.中成藥，2009，31（7）：1082-1085.

［12］肖 皖，李 寧，倪 慧，等.小秋葵化學(xué)成分的分離與鑒定［J］.沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，26（10）：782-784.

［13］Jaromir B，Lutoslawa S.Phenylpropanoid esters from Lamium album flowers［J］.Phytochemistry，1994，38（4）：997-1001.

［14］Catalono S，Bilia AR，Martinozzi M，et al.Kaempferol 3-O-β-D-（6″-feruloylglucoside）from Polylepis incana［J］.Phytochemistry，1994，37（6）：1777-1778.

［15］何樞衡，張 祎，葛丹丹，等.中藥半枝蓮黃酮類(lèi)成分的分離與結(jié)構(gòu)鑒定［J］.沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，28（3）：182-185.

［16］Ishikura N，Hayashida S.Kaempferol glycosides in the seed-coat of Ophiopogon jaburan（Kunth）Lodd［J］.Agricultural and Biological Chemistry，1979，43（9）：1923-1926.

［17］盛 萍，堵年生，楊學(xué)斌，等.維吾爾藥材蜀葵子的鑒別研究［J］.新疆中醫(yī)藥，2003，21（4）：38-40.

Isolation and structural identification of the Flavonoids from the flowers of Althaea rosea

ZHANG Yi，CHAO Li-ping，CHEN Qiu，DONG Yong-zhe，LI Xiao-xia，WANG Tao
（Key Laboratory of Traditional Chinese Medicinal Chemistry and Analytical Chemistry of Tianjin，Tianjin 300193，China）

R284

A

1673－9043（2016）01－0036-04

10.11656/j.issn.1673-9043.2016.01.10

國(guó)家自然基金項(xiàng)目資助（81202995）；新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃資助（NCET-12-1069）；天津市高等學(xué)校創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)培養(yǎng)計(jì)劃資助項(xiàng)目（TD12-5033）。

張 祎（1974-），女，博士，教授，主要從事中藥化學(xué)研究。

王 濤，E-mail：wangt@263.net。

（2015-10-20）