黃地吉仙湯對2型糖尿病大鼠FBG及HbA1c影響的實驗研究*

楊麗娜，羅志紅，欒曉文，寧鈺清，李富強，寧亞功

（成都軍區昆明總醫院附屬中醫醫院，昆明 650032）

Abstract:［Objective］To investigate the effect of simvastatin on atherosclerotic plaque instability model of thrombosis in rabbits.［Methods］Male New Zealand rabbits were randomly divided into 2 groups.One group（sham group）was always given a normal diet.Another group was fed high-fat diet for four weeks，and then abdominal aortic endothelium was damaged by using 4F Forgarty catheter.The rabbits were replaced for normal diet until being sacrificed，and were randomly divided into model group and simvastatin group.Simvastatin group received simvastatin ［10 mg/（kg·d）］for 4 weeks.Sham group and model group were given an equal volume of normal saline.Rabbits were sacrificed after 4 weeks of drug intervention in each group.Rabbits plaque rupture were triggered by giving intraperitoneal injections of venom under（0.15 mg/kg）and the ear vein injection of histamine（0.02 mg/kg）in 48 h and 24 h twice before sacrifice.Rabbits abdominal aortic thrombosis were observed in the stereo microscope after sacrifice.Rabbits were detected vWF and D-Dimer by ELISA，and were detected concentration of TXB2 and 6-keto-PGF1α by radioimmunoassay，and were calculated the ratio of TXB2/6-keto-PGF1α.［Results］After four weeks of treatment with simvastatin，simvastatin group were observed to reduce plaque site thrombosis under stereo microscope，and there was a significant difference compared with the model group（P＜0.01）.Plasma levels of vWF：Ag and D-Dimer were lower in the simvastatin group，and there was a significant difference compared with the model group（P＜0.01）.Plasma concentration of TXB2 was lower and plasma concentration of 6-keto-PGF1α was higher，and there was a significant difference compared with the model group（P＜0.05）.The ratio of TXB2/6-keto-PGF1α was lower，and there was a significant difference compared with the model group（P＜0.01）.［Conclusion］Simvastatin can repair damaged endothelial cells and improve blood hypercoagulable state，inhibition of platelet aggregation，and thus play a role in anti-thrombosis.This study provides experimental evidence that simvastatin prevents thrombosis in the clinical for patients with AS unstabled plaque.
Key words:simvastatin；atherosclerosis；plaque instability；thrombosis

黃地吉仙湯對2型糖尿病大鼠FBG及HbA1c影響的實驗研究*

楊麗娜，羅志紅，欒曉文，寧鈺清，李富強，寧亞功

（成都軍區昆明總醫院附屬中醫醫院，昆明 650032）

［目的］觀察“補瀉同施，調節平衡”法指導組方的經驗方黃地吉仙湯對2型糖尿病大鼠空腹血糖（FBG）、糖化血紅蛋白（HbA1c）的影響。［方法］將清潔級雄性SD大鼠60只，隨機抽取10只設置為空白對照組，其余50只給予高脂高糖飼料加一次性小劑量腹腔注射鏈脲菌素（STZ）與精神緊張法誘發2型糖尿病大鼠模型。造模成功后隨機分為模型組、西藥治療組、中藥治療低、中、高劑量組，每組10只。除空白對照組外，其余5組分別喂藥觀察8周，給藥前后觀察大鼠一般情況、測定體質量、FBG、HbA1c指標。［結果］西藥治療組、中藥高、中、低劑量組大鼠經給藥治療后，一般情況均有不同程度的改善，中藥高劑量組體質量與其他4組比較明顯升高（P＜0.05）；西藥治療組、中藥高、中劑量組與模型組比較血糖明顯減低（P＜0.05）；中藥高劑量組具有明顯降低HbA1c的作用。［結論］黃地吉仙湯可以明顯改善糖尿病大鼠的一般情況，對糖尿病大鼠的體質量減輕具有緩解作用，能顯著降低血糖及HbA1c，有效治療2型糖尿病。

2型糖尿病；黃地吉仙湯；空腹血糖；糖化血紅蛋白

糖尿病（DM）是由于胰島素分泌不足或胰島素作用低下而引起的一種代謝性疾病，以慢性高血糖為主要特征，是僅次于心血管疾病和惡性腫瘤的致死性疾病［1］。目前中國DM的診斷指標為空腹血糖（FBG）和口服糖耐量（OGTT），只能反映即時血糖水平，受進食、應激反應和降血糖藥物等相關因素的影響［2］。糖尿病一旦明確診斷，首先要控制血糖。近年來，血糖控制的情況多以糖化血紅蛋白（HbA1c）來評估。HbA1c是指血中葡萄糖與紅細胞的血紅蛋白經非酶促反應形成的酮胺化合物［3］，其含量與血糖濃度成正比，在血中濃度穩定，可作為早期診斷DM、控制血糖的一項敏感而準確的檢測指標，從而評估DM并發癥的發病風險［4］。HbA1c對糖尿病的診斷已引起醫學衛生界的高度關注，2010年美國ADA糖尿病協會的標準中，明確規定HbA1c是國際公認的糖尿病檢測的“金標準”［5］，在對糖尿病早發現、早診斷、早治療中起到重要作用。本課題在前期的臨床研究中發現黃地吉仙湯具有降低2型糖尿病患者FBG及HbA1c的作用，本實驗通過復制2型糖尿病大鼠模型，以期進一步驗證黃地吉仙湯的治療作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 清潔級雄性SD大鼠，體質量140～160 g，5周齡，60只。購自昆明醫科大學實驗動物中心，動物質量合格證號SYXK（滇）2005-0008；實驗動物使用許可證號SYXK（滇）2008-0005。動物共分12籠飼養，每籠5只。屏障環境飼養，環境溫度為20～25℃，濕度為40%～60%，每天光照12 h，自由進食進水，飼養籠每日清潔，墊料每日更換1次。

1.2 實驗藥物的制備及給藥劑量設定

1.2.1 黃地吉仙湯藥液的制備及給藥劑量設定 中藥飲片由成都軍區解放軍昆明總醫院附屬中醫醫院中藥房提供。主要由黃芪、太子參、生地、玄參、石膏、知母、桔梗、黃連、菟絲子、山茱萸、丹參、土鱉蟲、仙鶴草、桑白皮、甘草等藥物組成。將中藥飲片加5倍量水浸泡0.5 h，煎煮3次，每次5倍量水煎煮30 min，合并3次煎液為黃地吉仙湯原液，再參照《實驗藥理學》進行濃縮，濃縮至實驗所需的不同濃度的觀察劑量，分別為低、中、高劑量的黃地吉仙湯藥液。參照《實驗藥理學》［16］，利用體質量換算法，將實驗用藥的劑量換算成大鼠的服用劑量，進行實驗觀察。體質量換算法：已知A種動物（60 kg成人）1 kg體質量用藥劑量，欲估算B種動物（200 g大鼠）1 kg體質量用藥劑量時，可查表找出折算系數W（W=6.25），再按照公式計算即可。計算公式：B種動物的用藥劑量（mg/kg）=W×A種動物的用藥劑量（mg/kg）。（用藥比例：成人單劑黃地吉仙湯生藥總量為366 g，每日量為183 g，按照成人標準體質量60 kg計算，每人每日量為生藥3.05 g/（kg·d）。再按照體質量換算法，大鼠1 kg體質量用藥劑量為成人的6.25倍，即為生藥19.06 g/（kg·d），約為生藥19 g/（kg·d）。低劑量：大鼠每日正常劑量的50%，即生藥9.5 g/（kg·d）。中劑量：大鼠每日正常劑量，即生藥19g/（kg·d）。高劑量：大鼠每日正常劑量的2倍，即生藥38 g/（kg·d）。

1.2.2 二甲雙胍片藥液制備及給藥劑量設定 每片250 mg，北京雙鶴藥業股份有限公司生產，批準文號：國藥準字H11020541。灌胃前將二甲雙胍片用雙蒸水配制成25g/L的懸濁液待用。成人每日二甲雙胍的常用劑量為500～2 000 mg，按照成人標準體質量60kg計算，每人每日量為8.33～33.3mg/（kg·d），換算成大鼠每日量為51.4～205.5 mg/（kg·d）。經預實驗確定劑量為200 mg/（kg·d）。

1.3 動物模型的建立及分組給藥 本實驗在成都軍區昆明總醫院實驗動物中心完成。普通飼料：由昆明醫科大學動物實驗中心提供。高脂高糖飼料：由昆明醫科大學動物實驗中心按照配方制備，配方為：動物脂肪15%、蔗糖20%、蛋黃粉5%、普通飼料60%。將60只SD大鼠以普通飼料喂養1周，1周后采取隨機數字表法隨機抽取10只大鼠作為空白對照組，整個實驗過程均以普通飼料喂養。其余50只大鼠改為高脂高糖飼料喂養4周后，禁食不禁水12h，用電子天平給大鼠稱重，稱重后按30 mg/kg劑量一次性腹腔注射鏈脲菌素（STZ）。注射后開始觀察并記錄其飲水量、攝食量、大便量、尿量、體質量、活動、死亡等變化，3 d后尾靜脈取血，血糖儀測定隨機血糖，凡隨機血糖≥16.7 mmol/L為造模成功者，不成功者給予STZ 10～20 mg/kg進行二次造模。造模期間，除空白對照組10只大鼠外，其余大鼠每日給予2次驅趕和驚嚇，造成實驗動物精神緊張狀態。

將造模成功的50只糖尿病大鼠按照隨機數字表法進行第2次隨機分組，分為模型組、西藥治療組、中藥治療低、中、高劑量組，每組10只，共50只。空白對照組不予任何處理，模型組給予灌服蒸餾水［5 mL/（kg·d）］，中藥治療低、中、高劑量組分別灌服低、中、高劑量的中藥黃地吉仙湯，西藥治療組灌服確定劑量的二甲雙胍片配制液。成模次日即開始給藥，連續觀察8周。治療期間均以基礎飼料喂養。

1.4 檢測指標與方法

1.4.1 一般情況觀察 對各組大鼠的飲水量、攝食量、尿量、大便量、精神狀態、毛發、行為活動等進行觀察。

1.4.2 體質量 分別于給藥前、給藥后2、4、6周及實驗結束前對大鼠進行稱重，觀察大鼠的體質量變化情況。

1.4.3 血糖測定 分別在給藥前后采用尾尖采血法測微量血糖。采血前禁食不禁水8 h，固定好大鼠，用碘酒及乙醇棉球將尾部消毒并擦干后，取采血針刺穿尾靜脈，然后從尾根向尾尖部按摩擠壓，使血從尾尖流出，滴于已準備好的血糖試紙條上，即可測定。

1.4.4 HbA1c檢測 給藥8周后從心臟處取血，應用全自動生化分析儀檢測HbA1c，并進行組間比較。

1.5 統計學方法 應用SPSS18.0統計學軟件對實驗數據進行分析處理，各組實驗數據計量資料用均數±標準差（±s）表示，各組間觀察指標計量資料采用單因素方差分析進行統計分析。組間差異比較若方差齊采用LSD法，若方差不齊采用Dunnett's T3法，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般情況觀察 在給藥治療期間，空白對照組大鼠精神狀態良好，活動自如，反應靈敏，毛發光澤，無三多一少癥狀，飲水、進食及大小便正常。模型組大鼠一般情況較差，精神萎靡，動作遲緩，拱背蜷臥，反應遲鈍，毛發稀少欠光澤，三多一少癥狀明顯。西藥治療組、中藥高、中、低劑量組大鼠經給藥治療后，一般情況均有不同程度的改善。在實驗期間，模型組有3只大鼠死亡，西藥治療組與中藥高、中、低劑量組各有2只大鼠死亡，其死亡原因可能與灌胃誤傷肺臟、感染導致血糖升高等有關。

2.2 對體質量的影響 給藥前6組大鼠的體質量差異無統計學意義。給藥8周后，6組大鼠的體質量之間差異有統計學意義。其中，空白對照組與其余5組比較，差異均有統計學意義（P＜0.05或0.01）；除空白對照組外，中藥高劑量組與其他4組比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）；模型組與中藥高、中劑量組比較，差異具有統計學意義（P＜0.05或0.01），與西藥治療組、中藥低劑量組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 治療前后各組大鼠體質量比較（±s） g

表1 治療前后各組大鼠體質量比較（±s） g

注：與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與中藥高劑量組比較，△P＜0.05。

組別 n 給藥前 給藥后空白對照組 10 343.30±24.90 495.00±13.38模型組 7 330.38±48.20 262.43±58.37**西藥治療組 8 338.75±26.01 308.38±38.79*△中藥高劑量組 8 346.00±48.47 349.75±41.47*##中藥中劑量組 8 331.63±38.37 298.75±38.66*#△中藥低劑量組 8 350.38±38.45 264.88±43.17**△

2.3 對血糖的影響 喂藥前，空白對照組大鼠的血糖與其余5組比較，差異均具有統計學意義（P＜0.01），其余5組之間比較差異無統計學意義（P＞0.05）。喂藥8周后，空白對照組與模型組比較差異具有統計學意義（P＜0.01）；模型組與中藥低劑量組比較差異無統計學意義（P＞0.05），與其余3組比較差異有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01）；西藥治療組與中藥高、中劑量組比較差異無統計學意義（P＞0.05），與其余組比較差異均有統計學意義（P＜0.05），見表2。通過對6組大鼠的血糖進行比較，可以看出黃地吉仙湯與二甲雙胍片均具有降低血糖的作用，但是中藥高、中、低劑量組的療效不同，隨著中藥濃度的降低，降糖效果也相應的降低，即中藥高劑量組的降糖療效最好，而中藥低劑量組的療效甚微，因此可以說明中藥降糖的療效與藥物濃度有關，受量效關系的影響。

表2 治療前后各組大鼠血糖比較（±s）mmol/L

表2 治療前后各組大鼠血糖比較（±s）mmol/L

注：與空白對照組比較，**P＜0.01，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別 n 給藥前血糖 治藥后血糖空白對照組 10 4.70±0.67 4.91±0.50模型組 7 24.55±5.60** 24.31±7.71**西藥治療組 8 25.68±4.27** 9.89±2.66##中藥高劑量組 8 24.88±4.04** 9.75±3.84##中藥中劑量組 8 24.52±6.66** 12.57±3.51*#中藥低劑量組 8 24.68±3.86** 20.50±9.40**

2.4 對HbA1c的影響 通過對6組大鼠的HbA1c比較說明黃地吉仙湯與二甲雙胍片均具有顯著降低HbA1c的作用，而且經治療后，中藥高劑量組大鼠的HbA1c已接近正常水平，但是中藥高、中、低劑量組的療效不同，隨著中藥濃度的降低，降低HbA1c的效果也相應減退，即中藥高劑量組的療效最好，而中藥低劑量組的療效甚微，因此可以說明中藥降低HbA1c的療效受量效關系的影響，與藥物濃度有關，需要達到一定濃度才能發揮最佳治療效果，見表3。

表3 治療后各組大鼠HbA1c比較（±s） %

表3 治療后各組大鼠HbA1c比較（±s） %

組別 n 治療后HbA1c空白對照組 10 4.986±0.542模型組 7 9.162±1.254西藥治療組 8 6.346±1.529中藥高劑量組 8 6.063±1.363中藥中劑量組 8 8.585±1.478中藥低劑量組 8 9.337±1.393

3 討論

本實驗采用高脂高糖飼料加小劑量（30 mg/kg）腹腔注射STZ與精神緊張法誘發2型糖尿病大鼠模型。造模方法科學、新穎，造模一次成功率達90%。STZ是一種氨基葡萄糖-亞硝基脲，對胰腺β細胞具有選擇性毒性作用，可直接殺傷β細胞，從而引起胰島素合成、分泌減少，胰島功能受損，導致糖代謝紊亂，誘發糖尿病。該實驗選擇高脂高糖飼料喂養配合小劑量注射STZ造模的方法，即先給予大鼠高脂高糖飲食，通過高脂高糖毒性作用，引起大鼠胰島素抵抗，繼而通過注射小劑量STZ造成部分β細胞破壞，引起胰島素分泌缺陷，成模大鼠即為2型糖尿病大鼠，STZ對于大鼠的影響僅局限于胰腺組織，6 h即可排出體外，故STZ一般不會直接損害其他臟器組織。情志因素是糖尿病形成與發展過程中不可忽視的因素，故該實驗在傳統藥物造模的基礎上又加入精神緊張法，造成大鼠精神緊張狀態，更易于誘導2型糖尿病模型，而精神緊張法也可謂該實驗誘導模型的創新之處。

黃地吉仙湯是寧亞功教授憑借30余年臨床經驗，總結出補瀉同施、調節平衡法治療糖尿病的經驗方。該方以益氣養陰、補腎健脾、潤肺清胃、化瘀通絡為主，補瀉同施、寒溫并用，整體調節、標本兼治。在前期的臨床研究中發現黃地吉仙湯對初發2型糖尿病患者的FBG、HbA1c都具有顯著減低作用。本課題通過動物實驗進一步研究證實“補瀉同施、調節平衡”法指導組方之經驗方黃地吉仙湯可以明顯改善糖尿病大鼠的一般情況，對糖尿病大鼠的體質量減輕具有緩解作用，可以起到緩解“三多一少”癥狀的作用。黃地吉仙湯與二甲雙胍片均具有明顯降低血糖和HbA1c的作用，HbA1c能夠反映過去2～3個月血糖控制的平均水平，不受偶爾一次血糖升高或降低的影響，因此HbA1c更能說明血糖控制情況。同時研究還發現黃地吉仙湯治療組存在明顯的量效關系，高劑量組降低血糖及HbA1c的療效幾乎與西藥對照組等效，而且穩定性較好，這為臨床單純應用中藥治療糖尿病及黃地吉仙湯有效劑量的把握提供了寶貴的參考資料。

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［2］張 健，楊 青，張進安，等.糖化血紅蛋白在高危人群診斷2型糖尿病中的價值［J］.西安交通大學學報，2010，31（4）：512-514.

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Experiment study of Huangdi Jixian decoction on FBG and HbA1c in type 2 diabetes

YANG Li-na，LUO Zhi-hong，LUAN Xiao-wen，NING Yu-qing，LI Fu-qiang，NING Ya-gong
（The Affiliated Traditional Chinese Medicine Hospital of Kunming General Hospital of Chengdu Military Command，Kunming 650032，China）

R587.1

A

1673-9043（2016）01-0023-04

10.11656/j.issn.1673-9043.2016.01.07

全軍中醫藥重大專項課題資助項目（10ZY119）。

楊麗娜（1987-），女，碩士，中醫醫師，研究方向為中醫藥治療糖尿病的臨床和實驗研究。

寧亞功，E-mail：kmnyg@126.com。

（2015-09-23）