IL—22對慢性丙型病毒性肝炎干擾素抗病毒治療療效的預測價值研究

楊智　陳澄　吳詩品

[摘要]目的 探討白細胞介素-22（IL-22）在慢性丙肝干擾素抗病毒治療療效預測中的價值。方法 選取2013年10月～2015年3月深圳市人民醫院感染內科慢性丙型肝炎住院患者60例，均給予聚乙二醇干擾素α-2a聯合利巴韋林治療，同時選取38例正常健康獻血者作為參考，分別檢測正常健康者、慢性丙型肝炎患者抗病毒治療前、治療4周、12周、24周、48周和停藥后6個月的血清IL-10、IL-22和IL-28及mRNA水平，并同時檢測患者肝功能和HCV RNA含量。結果 經過48周抗病毒治療后，60例慢性丙肝患者中完全應答41例、部分應答15例、無應答4例。治療前患者血清中IL-10、IL-22、IL-28水平均顯著高于正常健康獻血者，差異具有統計學意義（P<0.05），與HCV病毒含量無顯著相關關系。經過治療，完全應答組患者血清IL-10、IL-22和IL-28水平逐漸降至并穩定至正常水平，部分應答組和無應答組患者血清IL-10、IL-22和IL-28水平在一段時間內降低，但又逐漸回升，IL-22較IL-10和IL-28回升更早。治療后不同時間IL-10、IL-22、IL-28 mRNA表達水平，與血清中IL-10、IL-22、IL-28水平變化情況一致。結論 IL-22能夠在早期有效預測慢性丙型病毒性肝炎干擾素抗病毒治療效果。

[關鍵詞]IL-22；慢性丙型病毒性肝炎；預測價值

[中圖分類號]R575.1 [文獻標識碼]A [文章編號]2095-0616（2016）11-13-05

全球約150萬人感染HcV并轉為慢性，每年死于與Hcv感染相關疾病的患者大于35萬人。HCV感染治療的基本目標是獲得持續病毒學應答，目前我國標準治療方案是基于Peg-IFN聯合利巴韋林。在治療前及早期治療階段預測個體對治療應答反應十分重要，可增加治療的成功率，減少治療成本。IL-28B和IL-10與丙型肝炎患者的干擾素應答相關。Zenewiez等研究表明，刀豆蛋白A誘導的急性肝炎中IL-22水平顯著提高，表現出肝細胞保護作用、組織修復能力等。目前針對IL-22在肝炎中的作用少有臨床研究報道。本研究應用聚乙二醇干擾素α-2a聯合利巴韋林治療60例慢性丙肝患者，長期監測患者血清中IL-10、IL-22、IL-28水平，旨在探討IL-22在慢性丙肝干擾素抗病毒治療療效預測中的價值。現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2013年10月～2015年3月深圳市人民醫院感染內科慢性丙型肝炎住院患者60例，年齡26～58歲，平均（42.7±13.7）歲；男39例，女21例。所有患者均根據2006年中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會聯合修訂的《病毒性肝炎防治方案》中“慢性丙型肝炎診斷標準”診斷為慢性丙型病毒性肝炎，患者納入標準：（1）抗HCV陽性；（2）血清HCV RNA陽性；（3）無既往干擾素或免疫調節劑治療史；（4）無心、腦、腎等臟器嚴重疾病。患者排除標準：（1）年齡<18歲，或者超過60歲；（2）肝硬化；（3）感染其他病毒；（4）患有自身免疫系統疾病；（5）精神性疾病或妊娠；（6）血小板<50×10⁹/L，白細胞<3.0×10⁹/L。根據患者HCVRNA水平分為三組：低水平復制（<10⁶拷貝/mL），中等水平復制（10⁶～10s拷貝/mL），高水平復制（>108拷貝/mL），各組患者例數分別為17例，27例和16例，各組年齡、性別組成等差異無統計學意義（P>0.05）。正常健康獻血者38例，其中男24例，女14例；年齡27～57歲，平均（43.1±13.5）歲，肝功能各項指標均在正常范圍，各種肝炎病毒標志物檢測均為陰性。

1.2治療方法

所有患者均接受聚乙二醇干擾素α-2a（Peg-IFNα-2a），聯合利巴韋林抗病毒治療，Peg-IFN2α（派羅欣聚乙二醇干擾素α-2a注射液，135μg/0.5mL/支，上海羅氏制藥有限公司，J20120074）劑量為135μg/周，利巴韋林（利巴韋林片，50mg/片，上海信誼天平藥業有限公司，H10960156）使用劑量根據患者體重進行適當調整（<75Kg：1000mg/d；≥75kg：1200mg/d），所有患者療程均為48周。

1.3標本采集

清晨空腹采集正常健康者、慢性丙型肝炎患者抗病毒治療前、治療4周、12周、24周、48周和停藥后6個月血樣各1份，1h內在低溫離心機中分離血清，置于一70℃超低溫冰箱保存備檢。

1.4檢測萬法

1.4.1樣本采集 于清晨8～9時抽取患者空腹靜脈血5mL，4℃下3000rpm離心10min，將血清置于潔凈EP管中置于-20%冰箱保存，集中檢測IL-10、IL-22、IL-28、肝功能和HCV RNA含量。

1.4.2主要試劑、儀器 IL-10、IL-22和IL-28B定量檢測試劑盒采用固相夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA），均由法國DIACLONE公司提供，嚴格按說明書操作。肝功能采用BeckmanCoulter全自動生化分析儀ACCESS和配套試劑檢測，HCV RNA定量試劑盒由凱杰（深圳）生物工程有限公司提供，采用熒光定量PCR檢測，實時熒光定量PCR儀為美國ABI公司7500型PCR儀。

1.5療效判斷

完全應答：對干擾素抗病毒治療完全應答，即抗病毒治療48周停藥6個月后，通過PCR方法檢測HCV-RNA為陰性，ALT正常。部分應答：經過48周抗病毒治療，ALT與HCV-RNA有一項未轉陰。無應答：經過48周抗病毒治療，ALT仍表現為異常，HCV-RNA未轉陰。

1.6統計學處理

采用SPSS19.0軟件對數據進行統計分析，其中計量資料以（x±s）的形式表示，并進行t檢驗，計數資料以率[n（%）]的形式表示并進行X²檢驗，多組均數比較采用單因素方差分析，多組均數兩兩比較采用SNK-q檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1治療效果分析

經過48周Peg-IFNα-2a聯合利巴韋林抗病毒治療后，60例慢性丙型病毒性肝炎患者中完全應答41例（68.33%），部分應答15例（25.00%），無應答4例（6.67%）。治療過程中4例患者出現復發，復發率為6.67%。

2.2患者治療前血清IL-10、IL-22、IL-28水平比較

慢性丙型病毒性肝炎患者治療前及正常健康獻血者血清IL-10、IL-22、IL-28檢測結果見表1，可見慢性丙型病毒性肝炎患者血清中IL-10、IL-22、IL-28水平均顯著高于正常健康獻血者，差異具有統計學意義（P<0.05）；隨著HCV病毒含量的升高，血清中IL-10、IL-22、IL-28水平變化不顯著。IL-22水平比較，低、中、高水平復制組與正常健康獻血者組比較，q分別為5.589，6.807，5.322，P<0.05；IL-22水平比較，低、中、高水平復制組與正常健康獻血者組比較，q分別為37.745，36.827，32.484，P<0.05。見表1。

2.3治療后不同時間血清IL-10、IL-22、IL-28水平比較

完全應答組的29例患者治療4、12、24、48周及停藥6個月后的血清IL-10、IL-22、IL-28水平均較治療前有所下降；部分應答組23例患者IL-10在治療后4周到停藥6周呈下降趨勢，IL-28在治療4～48周呈下降趨勢，停藥后6個月時又有所升高；IL-22在治療后4～24周呈下降趨勢，自治療48周時開始升高。無應答組中IL-10治療后呈下降趨勢，停藥后6個月升高；IL-22和IL-28均在治療后呈下降趨勢，在治療48周時開始升高。對三組患者在相同治療時期的三個指標進行兩兩比較，結果表明，在部分應答和無應答組中，IL-22較IL-10和IL-28更能較早反映抗病毒藥物的治療效果。自治療48周起，完全應答組血清IL-22水平極顯著低于部分應答組（治療48周q=4.933，P<0.01；停藥后6個月q=5.057，P<0.01）和無應答組（治療48周q=2.791，P<0.01；停藥后6個月q=3.351，P<0.01）。見表2，圖1。

3討論

目前采用干擾素抗病毒是我國慢性丙型病毒性肝炎治療的主要方法，但干擾素治療效果受多種因素的影響，前已敘述過IL-28B和IL-10與丙型肝炎患者的干擾素應答相關。盡管上述細胞因子與丙型肝炎患者對干擾素的應答具有高度相關性，但仍有一部分患者由于基因型等因素的關系未能獲得有效的病毒應答，因此有必要尋找更多對丙型肝炎抗病毒治療應答有影響的細胞因子，評估其對抗病毒治療應答率的影響價值，評估其是否可作為對治療應答預測的協同因素。

IL-22主要來源于CD4⁺T細胞亞群和自然殺傷細胞，主要在IL-22敏感的組織中（如肝臟）發揮炎癥應答調節作用、參與誘導抗凋亡、促進細胞增殖。因為IL-22不僅同歸為IL-10家族，而且同IL-10擁有共同的受體鏈（IL-10R2），所以IL-22在關于丙型肝炎的研究中扮演著有趣的角色。IL-22基因位于與炎癥性疾病相關聯的染色體區域，由脂多糖誘導，在小鼠肝細胞中上調急性時相反應物產生。與IL-10不同，盡管IL-22通過Th2細胞適當抑制IL-4的產生，但并不抑制IL-10，L-1，IL-6，TNF和IFN-g的活性。因此，與IL-10不同，IL-22在免疫調節過程中具有多效性的功能。此外，IL-10R2作為IL-10和IL-22共同的受體鏈，存在于兩者的信號傳導過程中。Hennig等通過實驗證明在丙型肝炎抗病毒治療時，患者IL-10RB基因變異影響對干擾素治療的應答和病毒的清除；IL-22中兩處單核苷酸多肽性影響治療應答和病毒清除：IL-22-rsl012356 T等位基因載體和IL-22-rsll79251 C等位基因載體。而Dambacher等實驗表明在丙型病毒性肝炎患者肝細胞中IL-22表達上調，但與IFN-a不同，IL-22不直接調節抗病毒蛋白，因此對HCV的復制沒有影響。然而到目前為止，對IL-22保護作用的分子機制仍不清楚，在丙型病毒性肝炎中作用機制更是知之甚少。

本研究比較了血清IL-10、IL-22和IL-28對Peg-IFNα-2a聯合利巴韋林抗病毒效果的預測效果，結果表明治療前患者血清中IL-10、IL-22、IL-28水平均顯著高于正常健康獻血者（P<0.05），但與HCV病毒含量無顯著相關關系；與IL-10和IL-28相比，治療過程中IL-22變化（下降）更早、更顯著，在部分應答和無應答患者中，IL-22下降后回升也更早。體外研究發現，盡管慢性病毒性肝炎患者血清中IL-22水平顯著升高，但IL-22并不能抑制HCV的復制，因此不能通過增加IL-22來直接抑制病毒增加。IL-22可能是通過調控IFNs抗病毒效應來間接影響病毒復制，如STAT3就是IL-22調控的重要下游信號，能夠調控IFN介導的信號通路。Park等研究表明，IL-22能夠對抗肝損傷，并促進肝細胞增殖，慢性病毒性肝炎患者IL-22水平升高可能是一種抗肝細胞損傷的保護機制。

綜上，IL-22能夠在早期有效預測慢性丙型病毒性肝炎干擾素抗病毒治療效果。在治療前及早期治療階段通過檢測IL-22在外周血單個核細胞中的表達水平，以提前預測個體對治療應答，增加治療的成功率；同時可使應答不佳或無應答的患者盡早終止治療，減少治療成本。在臨床上存在著極大的實用價值。