貴州名牌產品前列舒樂顆粒淫羊藿苷HPLC含量測定研究

郭婷　許乾麗　茅向軍等

[摘要]目的 建立用高效液相色譜法測定前列舒樂顆粒中淫羊藿苷含量的方法。方法 采用Waters Cts柱，流動相為乙腈-水（24：76），檢測波長為270nm。結果 淫羊藿苷在0.0615～0.738μg范圍內線性關系良好，平均回收率為98.02%，RSD=2.31%（n=6）。結論 結果表明該方法準確可靠，重現性好，結果穩定。

[關鍵詞]高效液相色譜法；前列舒樂顆粒；淫羊藿苷；含量測定

[中圖分類號]R286 [文獻標識碼]A [文章編號]2095-0616（2016）11-41-03

前列舒樂顆粒收載于衛生部藥品標準中藥成方制劑第十二冊，由淫羊藿、黃芪、蒲黃、車前草和川牛膝等五味藥組成，具有補腎益氣，化瘀通淋的功效。用于腎脾雙虛，血瘀濕阻，氣化不利所致的淋癥、癃癥，前列腺增生，慢性前列腺炎；面色晃白，神疲乏力，腰膝酸軟，小腹墜脹，小便不爽，點滴不出，或尿頻、尿急、尿道澀痛等癥。原質量標準無含量測定項目。由于淫羊藿為方中主要藥物，而淫羊藿苷為其主要的藥理活性成分之一，本文參考有關文獻，研究建立用HPLC法測定淫羊藿苷含量的方法，方法可靠，可更好地用于控制其質量。

1儀器與試藥

島津LC-20A高效液相色譜儀，LC-20AT輸液泵，CTO-20A柱溫箱，SIL-20A自動進樣裝置；SPD-20A紫外檢測器；CBM-20A通訊集成器；LC-Solution色譜工作站。TCQ-250超聲波清洗器（北京醫療設備二廠）。淫羊藿苷對照品（中檢所，供含量測定用，批號：110737-200512）。前列舒樂顆粒樣品（國藥準字Z52020270）及缺淫羊藿的陰性樣品由貴州關德興寶芝林藥業有限公司提供。乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1色譜條件和系統適用性實驗

液相色譜柱：Waters，SunFireTM C₁₈（150mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-水（24：76），檢測波長：270nm，流速：1.0mL/min，柱溫：30℃，進樣量：10μL。在該色譜條件下，淫羊藿苷的保留時間約為17.5min，陰性對照在淫羊藿苷位置處無干擾峰，說明處方中其他藥味對測定結果無影響，樣品中淫羊藿苷和其相近的其它峰分離完全（分離度>0.5），理論板數以淫羊藿苷計不低于4000。色譜見圖1。

2.2對照品溶液的制備

取淫羊藿苷對照品適量，精密稱定，加70%甲醇制成每1mL含淫羊藿苷25μg的溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備

取前列舒樂顆粒裝量差異項下的內容物，研細、混勻，精密稱取1g，精密加入70%甲醇20mL，稱定重量，超聲20min，取出，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜0.45μm濾過，取續濾液，即得。

2.4陰性對照溶液的制備

取處方中缺淫羊藿的陰性對照樣品，按“2.3”項下供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。

2.5線性關系考察

精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每lmL含淫羊藿苷0.0615mg的對照品溶液。分別精密吸取對照品溶液1、3、5、7、9、12μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件測定，以峰面積（Y）為縱坐標，對照品進樣量（X，μg）為橫坐標，做線性回歸，回歸方程為Y=2.20×106X+4.46×103，r=0.9995，結果表明淫羊藿苷在0.0615～0.738μg范圍內，線性關系良好。

2.6精密度試驗

精密吸取淫羊藿苷對照品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件測定，重復進樣6次，測定其峰面積，結果其峰面積的RSD為0.22%，表明儀器精密度良好。

2.7穩定性試驗

精密吸取10μL同一供試品溶液，分別于0，1，2，4，8，12h按“2.1”項下色譜條件測定。結果，淫羊藿苷平均峰面積為279536，RSD為2.14%，表明供試液在12h內具備良好的穩定性。

2.8重復性試驗

取同一批號前列舒樂顆粒6份，精密稱定，分別按“2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定。結果淫羊藿苷平均含量為0.3232mg/g，RSD為2.23%，說明本法具有較好的重復性。

2.9加樣回收率試驗

分別精密稱取6份已知含量（0 3232mg/g）的樣品約0.5g，精密加入淫羊藿苷（0.01538mg/mL）對照品溶液10mL，再精密加入70%甲醇10mL，分別按上述“2.2”項下方法制備供試品溶液，按上述“2.1”項下色譜條件測定，計算回收率，見表1。

2.10樣品含量測定

分別取前列舒樂顆粒（10批）適量，分別按上述“2.2”項下方法制備10批樣品的供試品溶液，再分別精密吸取對照品溶液與10批供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，見表2。

3討論

經過超聲處理及加熱回流兩種方法的對比研究，發現兩者提取效果基本一致，超聲處理相對簡單，故采用超聲處理的前處理提取方法。

本研究分別試驗了乙醇，70%乙醇，50%乙醇，甲醇，70%甲醇和50%甲醇共6種提取溶劑，試驗結果表明，采用70%的乙醇作為提取溶劑的提取效率最高。對超聲時間進行了比較，比較了10，20，30，40，60和90min，由實驗得出，當提取20min時，即可將制劑中的淫羊藿苷提取完全，而且由實驗得出，超聲時間越長，雜質越多，造成分離困難，故選擇超聲處理20min即可。

文獻報道淫羊藿苷的測定方法主要有二階導數分光光度法、紫外分光光度法、高效薄層掃描法、高效液相色譜法和液質聯用法。隨著色譜技術的發展以及廣泛應用，高效液相色譜法以其操作簡便、快速、靈敏度高和重現性好得到了越來越多的應用，本文通過對提取方法的考察優化，建立了高效液相色譜法測定貴州名牌產品前列舒樂顆粒中淫羊藿苷含量的方法，經方法學表明該方法快速、準確、重現性好，很好地解決了一般中藥成分含量測定中的干擾成分多、難以分離的問題，可作為一種很好的前列舒樂顆粒中淫羊藿苷的含量測定方法，并為前列舒樂顆粒質量標準的完善提供依據。