人誘導性多能干細胞的無飼養(yǎng)層培養(yǎng)及鑒定

王歡　方煌　李瀟　高書濤　周傳坤　鄒銀雙　李鋒

人誘導性多能干細胞的無飼養(yǎng)層培養(yǎng)及鑒定

王歡方煌李瀟高書濤周傳坤鄒銀雙李鋒

目的探索人誘導性多能干細胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs）的無飼養(yǎng)層培養(yǎng)方法，并對此方法培養(yǎng)的iPSCs進行鑒定。方法將人iPSCs接種于玻璃粘連蛋白（Vitronectin XF）包被的培養(yǎng)皿上培養(yǎng)，采用EDTA消化傳代。倒置顯微鏡下觀察iPSCs的生長狀態(tài)；堿性磷酸酶（ALP）染色鑒定；采用PCR和免疫熒光檢測iPSCs多能性基因SSEA-1、Nanog、Sox2的表達情況。結(jié)果倒置顯微鏡下可見iPSCs呈典型的克隆狀生長，克隆呈圓形或橢圓形，邊界清晰、整齊；ALP染色結(jié)果陽性；PCR結(jié)果顯示人iPSCs強表達多能性基因SSEA-1、Nanog、Sox2；免疫熒光結(jié)果顯示多能干細胞特異性指標SSEA-1、Nanog、Sox2均呈陽性。結(jié)論無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系培養(yǎng)人iPSCs，細胞能穩(wěn)定增殖，保持自我更新潛能及多能性。

多能干細胞；細胞培養(yǎng)技術(shù)；無飼養(yǎng)層

人誘導性多能干細胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs）是一種借助重編程技術(shù)獲得的多能干細胞［1，2］，不僅具有類似于胚胎干細胞（embryonic stem cell，ESC）的增殖能力和多能性［3］，可被誘導分化為運動神經(jīng)元、少突膠質(zhì)細胞、心肌細胞等［4-6］，而且還規(guī)避了ESC及成體干細胞面臨的倫理道德、法律、難以大量獲取等問題，具有更廣闊的應用前景［7］。由于iPSCs的飼養(yǎng)層培養(yǎng)法面臨步驟繁瑣、工作量大、細胞純化困難等問題，且未達到臨床應用的要求［8］，因此簡單易行的無飼養(yǎng)層培養(yǎng)法更為實用。

本研究采用無飼養(yǎng)層iPSCs培養(yǎng)體系建立人iPSCs系，并對獲得的iPSCs進行鑒定，從而為iPSCs的基礎研究及臨床應用奠定基礎。

材料與方法

一、實驗材料

1.細胞：人iPSCs購自于北京賽貝生物技術(shù)有限公司?！?br>