P-AKT和MMP-9在卵巢癌組織中的表達情況及臨床意義

李小坤，劉艷嬌，薛　潔，劉艷峰，馬海英，段海鳳，解秀明

(1. 河北省邯鄲市第一醫院，河北 邯鄲 056001；2. 河北省邯鄲市中心醫院，河北 邯鄲 056002)

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P-AKT和MMP-9在卵巢癌組織中的表達情況及臨床意義

李小坤1，劉艷嬌1，薛潔1，劉艷峰2，馬海英1，段海鳳1，解秀明1

(1. 河北省邯鄲市第一醫院，河北 邯鄲 056001；2. 河北省邯鄲市中心醫院，河北 邯鄲 056002)

目的研究轉移相關基因P-AKT和基質金屬蛋白酶9(MMP-9)在正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤組織和卵巢惡性癌組織中的表達情況及其相關性，旨在為卵巢癌的診斷及預后判斷提供理論依據。方法采用免疫組化SP法檢測15例正常卵巢組織、32例卵巢良性腫瘤組織和48例卵巢惡性癌組織中P-AKT、 MMP-9的表達情況和微血管密度(MVD)，分析各指標表達情況與臨床病理特征的關系及相互間的關系。結果P-AKT在正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤組織和卵巢惡性癌組織中的陽性表達率分別為0，40.63%，87.5%，在卵巢癌組織中臨床分期較晚和伴隨淋巴結轉移時明顯增高(P<0.05)；MMP-9在正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤組織和卵巢惡性癌組織中的陽性表達率分別為0，44.00%，75.00%，在卵巢癌組織中臨床分期較晚、組織學分級較差和伴隨淋巴結轉移時明顯增高(P<0.05)；MVD值在有淋巴結轉移的卵巢癌組織中明顯高于無淋巴結轉移者(P<0.05)。Spearman相關性分析顯示P-AKT和MMP-9在卵巢惡性癌組織中呈顯著正相關(P<0.05)。結論P-AKT 、MMP-9是鑒別卵巢良惡性腫瘤的指標之一，檢測淋巴結轉移者中的MVD值對卵巢癌的惡性程度判斷有幫助。

卵巢癌；P-AKT蛋白；金屬蛋白酶9；微血管密度；免疫組織化學

卵巢癌是女性生殖系統惡性腫瘤之一，其發病率位居女性生殖系統惡性腫瘤第二，病死率位居女性生殖系統惡性腫瘤第一位，其原因是卵巢為盆腔，比較隱秘[1]。另外因其惡性程度較高致使其5年存活率始終在30%左右徘徊。因此尋找有效的早期診斷、檢測指標具有重要的理論及實踐意義。磷脂酞肌醇-3激酶(PI3K)/AKT通路是經典的抗凋亡、促存活信號通路，在腫瘤的多重功能中發揮著重要作用[2]。故本研究檢測了P-AKT和基質金屬蛋白酶9(MMP-9)在正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤組織和卵巢惡性癌組織中的表達情況并分析其相關性，且通過CD34標記檢測卵巢癌組織血管密度(MVD)，旨在探討各指標診斷、判斷卵巢癌發生發展及預后的價值。

1　臨床資料

1.1一般資料收集邯鄲市第一醫院2009年1月—2013年12月收治的卵巢腫瘤患者腫瘤組織標本80例，臨床資料完整，其中卵巢良性上皮腫瘤32例，卵巢癌48例，年齡35～70歲，平均52.5歲；取正常卵巢組織標本15例作為對照。卵巢癌組織類型：漿液性癌33例，黏液性癌6例，透明細胞癌5例，內膜樣癌4例；按2000年FIGO標準:Ⅰ期7例，Ⅱ期10例，Ⅲ期27例，Ⅳ期4例；分化程度：高分化癌(1級)18例，中分化癌(2級)14例，低分化癌(3級)16例；伴有淋巴結轉移28例，無淋巴結轉移20例。

1.2檢測方法對卵巢癌標本、卵巢良性腫瘤標本和正常卵巢標本按照石蠟切片常規切成2 μm的連續切片，進行脫蠟梯度酒精水化，然后按SP免疫組化法檢測P-AKT、MMP-9和CD34表達，按試劑盒說明書操作，取已知陽性組織切片作為陽性對照，以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.3結果判斷標準P-AKT和MMP-9陽性定位于細胞漿，CD34陽性定位于血管內皮細胞，細胞漿和膜內出現棕黃色顆粒為陽性信號。同一鏡頭下每張切片均觀察5個高倍視野(×400)，陽性細胞數<5%為(-)，5%～25%為(+)，26%～50%為()，>50%為()。+～為陽性表達；MVD值(CD34標記)計數標準:先在低倍(×100)視野下找到癌組織間質微血管密集部位即內皮細胞叢，換到高倍(×400)視野下計數5個視野的微血管數，取其平均值為MVD值。

1.4統計學方法數據采用SPSS 12.0統計軟件進行統計學分析，陽性表達率的比較采用2檢驗；MVD值兩兩比較采用t檢驗。采用Spearman等級相關分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2　結　　果

2.1卵巢癌、卵巢良性上皮腫瘤、正常卵巢組織中P-AKT和MMP-9陽性表達情況P-AKT陽性率分別為88%(42/48)、41%(13/32)、0(0/15)，MMP-9陽性率分別為75%(36/48)、44%(14/32)、0(0/15)。兩者在卵巢癌、卵巢良性上皮腫瘤組織中陽性表達率均明顯高于正常卵巢組織(P均<0.05)，卵巢癌組織明顯高于卵巢良性上皮腫瘤組織(P均<0.05)。

2.2卵巢癌、卵巢良性上皮腫瘤、正常卵巢組織中MVD的變化正常卵巢、卵巢良性上皮腫瘤、卵巢癌組織中MVD分別為11.28±4.22，29.31±5.17，55.61±7.18，正常卵巢組織到卵巢良性上皮腫瘤組織再到卵巢癌組織中MVD逐漸升高(P均<0.05)。

2.3P-AKT和MMP-9表達情況與卵巢癌的臨床病理參數關系見表1。

表1　P-AKT和MMP-9表達情況與卵巢癌的臨床病理參數關系　例

2.4卵巢癌組織中MVD值與淋巴結轉移的關系卵巢癌組中淋巴結轉移組的MVD值為45.17±8.22，無淋巴結轉移組MVD值為22.23±7.15，二者比較差異有統計學意義(P<0.05)。

2.5P-AKT和MMP-9在卵巢癌組織中表達相關性分析P-AKT和MMP-9在卵巢癌組織中表達呈明顯正相關(r=5.516，P=0.019)。見表2。

表2　P-AKT和MMP-9在卵巢癌組織中表達相關性分析　例

3　討　　論

卵巢癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，危害著女性患者的身心健康，由于其具有隱蔽性特點，往往在發現時已經為中晚期，導致病死率居婦科腫瘤的第一位[1]，轉移是其主要原因，研究P-AKT、MMP-9及淋巴結轉移中MVD值的分子機制有助于對卵巢癌的早期判斷和早期治療。

AKT是PI3K/AKT通路中的關鍵分子，與腫瘤的發生發展密切相關，在細胞膜上被活化為磷酸化AKT(P-AKT)，P-AKT是衡量PI3K活性的指標，對細胞生長、增殖、分化及代謝起調控作用，在胃癌[3]、乳腺癌[4]、非小細胞肺癌[5]多種惡性腫瘤組織中檢測P-AKT呈現高表達。本研究發現在卵巢癌組織中呈顯著高表達，說明在卵巢癌組織中存在著AKT的活化，AKT的活化與卵巢癌癌變的發生有關。進一步研究發現臨床分期越差P-AKT表達水平越高，并且在有淋巴結轉移的組織內P-AKT表達水平增高，提示P-AKT水平高低在卵巢癌的發生、進展、演進過程中起到重要作用，通過增加NF-κB的轉錄活性[6]、驅使上皮間葉細胞轉換、下調E-鈣黏素的表達[7]、上調MMP-2、MMP-9的表達等促進細胞的侵襲和轉移，研究也發現卵巢癌組織中MVD值增高，新生大量微血管，為腫瘤細胞提供充足的養分，保障供給為腫瘤細胞的浸潤轉移進一步發展提供可能。

細胞外基質(ECM)是腫瘤轉移的主要屏障，突破基底膜是腫瘤細胞轉移浸潤的必要條件[8]，基底膜的重要成分是膠原蛋白，金屬蛋白酶(MMP)家族的主要作用是破壞膠原蛋白，MMP-9是MMP家族中重要的成員之一，MMP-9以酶原形式分泌，激活后形成Ⅳ型膠原酶，破壞腫瘤組織的ECM和組織基底膜，促使腫瘤細胞向周圍浸潤轉移[9]。本研究也證實在卵巢癌組織中檢測到MMP-9的表達水平明顯高于正常對照組，并且在淋巴結轉移組、分化程度較低和臨床分期較晚的腫瘤組織中MMP-9表達明顯增高，說明卵巢惡性細胞可以分泌或誘導其他細胞分泌MMP-9，MMP-9通過降解膠原蛋白在腫瘤轉移、浸潤的過程中發揮作用，并且在與VEGF共同作用下促進大量的新生血管，進一步為腫瘤細胞的轉移、浸潤提供基礎。故檢測宮頸癌MMP-9的表達，對進一步了解卵巢癌的生物學行為和預后判斷有一定的臨床應用價值。

對于P-AKT和MMP-9在卵巢癌組織中的相關性分析發現，兩者呈明顯正相關，證實兩者在卵巢癌組織有一定的內在聯系，腫瘤組織中多種促癌因子均能夠誘導MMP-9的分泌，P-AKT是典型的促癌因子，誘導金屬蛋白酶MMP-9[10]分泌，破壞基底膜膠原蛋白，造成腫瘤組織ECM和基底膜的缺損，在腫瘤的浸潤轉移中共同起到協同作用。通過對P-AKT和MMP-9的研究能夠為卵巢癌的防治提供一些新思路，對做好卵巢癌的研究工作有一些現實意義。

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河北省醫學科學研究重點課題計劃項目(20140441)

10.3969/j.issn.1008-8849.2016.17.013

R737.31

B

1008-8849(2016)17-1864-03

2015-12-18