半夏厚樸湯加味對慢性萎縮性胃炎大鼠胃黏膜血流量及脂質過氧化損傷的影響研究

李寧寧，郭　海，雷延飛

(河南醫學高等?？茖W校，河南 鄭州 451191)

?

半夏厚樸湯加味對慢性萎縮性胃炎大鼠胃黏膜血流量及脂質過氧化損傷的影響研究

李寧寧，郭海，雷延飛

(河南醫學高等?？茖W校，河南 鄭州 451191)

[摘要]目的觀察半夏厚樸湯加味對慢性萎縮性胃炎(CAG)模型大鼠胃黏膜血流量及脂質過氧化損傷的影響，探討其作用機制。方法隨機選取18只大鼠作為正常組，90只大鼠用N-甲基-N’-硝基-N-亞硝基胍制作CAG模型。將造模成功后CAG大鼠隨機分為模型組、維酶素組、半夏厚樸湯加味高劑量組、半夏厚樸湯加味中劑量組、半夏厚樸湯加味低劑量組，每組18只。維酶素組給予維酶素0.28 g/kg灌胃，半夏厚樸湯加味高、中、低劑量組分別給予半夏厚樸湯水煎劑10.0 g/kg、5.0 g/kg、2.5 g/kg灌胃，均2 mL/只，1次/d，連續10周。檢測各組大鼠胃黏膜血流量、胃液游離酸度和總酸度及胃蛋白酶活性，胃黏膜組織中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性。結果模型組大鼠胃黏膜血流量、胃液游離酸度和總酸度、胃蛋白酶活性及胃黏膜組織中SOD、GSH-Px活性均顯著低于正常組(P均<0.05)，胃黏膜組織中MDA活性明顯高于正常組(P<0.05)；維酶素組和半夏厚樸湯各劑量組大鼠胃黏膜血流量、胃液游離酸度和總酸度、胃蛋白酶活性及胃黏膜組織中SOD、GSH-Px活性均顯著均顯著高于模型組(P均<0.05)，MDA活性均明顯低于模型組(P均<0.05)，且高、中劑量組效果優于低劑量組(P均<0.05)。結論半夏厚樸湯加味可能通過增加胃黏膜血流量、調節胃酸和胃蛋白酶分泌及抗脂質過氧化損傷而起保護和修復胃黏膜作用。

[關鍵詞]慢性萎縮性胃炎；半夏厚樸湯加味；大鼠

慢性萎縮性胃炎(chronic atrophic gastritis，CAG)是以胃黏膜固有腺體萎縮和腸上皮化生及不典型增生為病理特征的慢性炎癥過程，具有發病緩慢、病勢纏綿、遷延難愈的特點，因其癌變率較高而被WHO列為癌前病變[1]。本研究以中醫傳統理論為基礎和指導，探討了半夏厚樸湯加味對CAG模型大鼠胃黏膜血流量及脂質過氧化損傷指標的影響及其作用機制，旨在為半夏厚樸湯加味在臨床上治療CAG提供實驗依據。

1實驗資料

1.1實驗動物清潔級SD大鼠108只，雌雄各半，體質量200～220 g，山東魯抗醫藥股份有限公司提供，動物合格證號：SCXK(魯)20130001。

1.2藥物與試劑半夏厚樸湯加味由半夏、厚樸、茯苓、生姜、蘇葉、黃芪、白術等藥物組成，購于河南省第二人民醫院，各味藥材粉碎，加水適量，超聲輔助提取2次，每次30 min，經濃縮后，制備為濃度分別為每毫升含藥材250，500，1 000 mg的供試液，冰箱保存備用，灌胃給藥前復溫。維酶素片，河南環海藥業有限公司提供，搗碎，用蒸餾水配成混懸液，灌胃給藥。N-甲基-N’-硝基-N-亞硝基胍(MNNG)，由百靈威科技有限公司提供，每3 d用電子天平稱取MNNG 2 g，以蒸餾水2 000 mL稀釋配成濃度1 mg/mL的保存液，4 ℃冰箱避光保存。每日把保存液稀釋為100 μg/mL作為CAG模型大鼠的飲水。超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)試劑盒由上海酶聯生物科技有限公司提供。

1.3造模與分組給藥隨機選取18只大鼠作為正常組，其余90只大鼠參照文獻[2]方法進行CAG造模。大鼠自由飲用上述MNNG稀釋液，飲用瓶外涂黑色漆以避光，瓶內液體每日更換，共8周；同時每只每周一、周四各給予40%乙醇灌胃1次，每只2 mL，共8周。將造模成功后CAG大鼠隨機分為模型組、維酶素組、半夏厚樸湯加味高劑量組、半夏厚樸湯加味中劑量組、半夏厚樸湯加味低劑量組，每組18只。維酶素組給予維酶素0.28 g/kg灌胃，半夏厚樸湯加味高、中、低劑量組分別給予半夏厚樸湯水煎劑10.0 g/kg、5.0 g/kg、2.5 g/kg灌胃，均2 mL/只，1次/d，連續10周。

1.4觀察指標

1.4.1大鼠一般狀態實驗過程中定期觀察所有大鼠的體質量、精神狀態、活動、進食、毛色及腹水情況等。

1.4.2胃黏膜血流量給藥10周后，每組隨機取6只大鼠，參照文獻[3]方法，用中性紅清除法測胃黏膜血流量。

1.4.3胃液酸度與胃蛋白酶活性每組剩余的12只大鼠禁食12 h后麻醉，打開腹腔結扎幽門，向胃內注射生理鹽水2 mL，15 min后摘除全胃，收集胃液于離心管。胃液離心后，二步滴定法[3]測定胃液游離酸度和胃液總酸度，麥氏法[4]測定胃蛋白酶活性。

1.4.4胃黏膜病理改變情況及SOD、MDA、GSH-Px活性將1.4.3步驟所得鼠胃進行常規解剖，在胃體及胃竇小彎處取1.5 cm×1.0 cm組織塊，制備病理切片，HE染色，顯微鏡下觀察胃黏膜病理改變情況。其余目檢胃黏膜損傷情況后，蒸餾水洗凈胃內容物，濾紙吸干水分后，加入適量蒸餾水用超聲波勻漿器制成胃黏膜勻漿，嚴格按照試劑盒說明書步驟測定胃黏膜組織中SOD、MDA、GSH-Px活性。

2結果

2.1各組大鼠一般狀態模型組大鼠活動和食量減少，被毛蓬松，消瘦。維酶素組及半夏厚樸湯加味低劑量組大鼠體質量稍輕，被毛稍微散亂，但較潔凈。半夏厚樸湯加味高、中劑量組大鼠食量較好，活動靈活，體質量接近正常組。

2.2各組胃黏膜血流量正常組為(26.56±5.25)mL/(kg·h)，模型組為(12.27±1.47)mL/(kg·h)，維酶素組為(16.49±2.35)mL/(kg·h)，半夏厚樸湯加味低劑量組為(17.42±4.57)mL/(kg·h)，半夏厚樸湯中劑量組為(23.54±5.12)mL/(kg·h)，半夏厚樸湯高劑量組為(26.21±4.82)mL/(kg·h)。模型組大鼠胃黏膜血流量顯著低于正常組(P<0.05)；維酶素組和半夏厚樸湯各劑量組大鼠胃黏膜血流量均顯著高于模型組(P均<0.05)，且半夏厚樸湯中、高劑量組均明顯高于低劑量組(P均<0.05)。

2.3各組胃液酸度與胃蛋白酶活性模型組大鼠胃液游離酸度和總酸度及胃蛋白酶活性均明顯低于正常組(P均<0.05)；維酶素組和半夏厚樸湯各劑量組大鼠胃液游離酸度和總酸度及胃蛋白酶活性均明顯高于模型組(P均<0.05)，且半夏厚樸湯中、高劑量組均明顯高于低劑量組(P均<0.05)。見表1。

表1　各組胃液酸度與胃蛋白酶活性±s)

注：①與正常組比較，P<0.05；②與模型組比較，P<0.05；③與半夏厚樸湯低劑量組比較，P<0.05。

2.4各組病理表現正常組大鼠胃黏膜完整，上皮細胞排列整齊，腺體形態規則，排列緊密。模型組大鼠胃黏膜層明顯變薄，腺體數目顯著減少，體積縮小，腺體排列紊亂，固有層可見大量淋巴細胞浸潤，少數大鼠可見腸上皮化生。維酶素組大鼠胃黏膜可見點狀炎細胞浸潤，腺體輕度萎縮，排列整齊。半夏厚樸湯加味低劑量組胃黏膜結構輕度紊亂，腺體輕度萎縮，黏膜層有少量炎細胞浸潤；高、中劑量組胃黏膜上皮排列整齊，腺體大小形態較一致，腺體萎縮不明顯。病理表現見圖1～5。

2.5各組胃黏膜組織中SOD、MDA、GSH-Px活性模型組大鼠胃黏膜組織中SOD、GSH-Px活性明顯低于正常組(P均<0.05)，MDA活性明顯高于正常組(P<0.05)；維酶素組和半夏厚樸湯各劑量組大鼠胃黏膜組織中SOD、GSH-Px活性均明顯高于模型組(P均<0.05)，MDA活性均明顯低于模型組(P均<0.05)，且半夏厚樸湯中、高劑量組改善情況均明顯優于低劑量組(P均<0.05)。見表2。

圖1　正常組光鏡下胃黏膜表現(HE染色，×400)

圖2　模型組光鏡下胃黏膜表現(HE染色，×400)

圖3　半夏厚樸湯加味低劑量組光鏡下胃黏膜表現(HE染色，×400)

圖4　半夏厚樸湯加味中劑量組光鏡下胃黏膜表現(HE染色，×400)

圖5　半夏厚樸湯加味高劑量組光鏡下胃黏膜表現(HE染色，×400)

表2　各組胃黏膜組織中SOD、MDA、GSH-Px活性

注：①與正常組比較，P<0.05；②與模型組比較，P<0.05；③與半夏厚樸湯低劑量組比較，P<0.05。

3討論

CAG以病情遷延、長期消化不良為特征，其發生與胃黏膜血流量的減少關系密切，而良好的血液循環可為胃黏膜提供必需的營養，去除代謝有害物質，是保證胃黏膜完整性及維護其屏障功能的保障[5]。目前該病具體發病原因尚未完全闡明，但已發現CAG的形成與氧自由基損傷、脂質過氧化物作用關系密切[6-7]。SOD和GSH-Px是體內自由基清除系統中重要的酶，可清除H2O2和O2-，保護細胞不受自由基的損傷，二者活性可在一定程度上反映機體清除自由基的能力。MDA是脂質過氧化的最終分解產物，可與脂質過氧化中間產物自由基損傷膜結構，改變膜成分的活性及抗原性而影響膜的正常功能，所以MDA水平是脂質過氧化物損傷效應的特征指標[8]。目前西醫治療CAG主要是抗菌、保護胃黏膜、增強胃動力藥物聯合運用，但療效不佳，而且病情容易反復[9-10]。

CAG屬于中醫學 “胃脘痛” “痞滿”“腹脹”等范疇，病機多為虛實夾雜，以脾胃虛弱、肝腎虧虛為本，濕熱、邪毒、血脈瘀阻為標[11]。半夏厚樸湯中半夏、厚樸理氣和胃、消痞除滿，生姜、紫蘇行氣和胃，茯苓健脾祛濕，加味黃芪、白術益氣健脾，鼓舞中氣，諸藥合用，共奏辛開苦降、行氣化濁、和胃調脾、補中益氣、梳理中焦之效，通則不痛，中氣暢通，痛止痞消。

本實驗結果顯示，模型組大鼠胃黏膜血流量、胃液游離酸度和總酸度、胃蛋白酶活性及胃黏膜組織中SOD、GSH-Px活性均顯著低于正常組，胃黏膜組織中MDA活性明顯高于正常組；維酶素組和半夏厚樸湯各劑量組大鼠胃黏膜血流量、胃液游離酸度和總酸度、胃蛋白酶活性及胃黏膜組織中SOD、GSH-Px活性均顯著均顯著高于模型組，MDA活性均明顯低于模型組，且高、中劑量組效果優于低劑量組。提示半夏厚樸湯加味干預，可增加CAG模型大鼠胃黏膜血流量，改善胃黏膜分泌功能，減輕脂質過氧化損傷，逆轉胃黏膜萎縮，達到修復胃黏膜的目的。

綜上所述，半夏厚樸湯加味可能通過增加胃黏膜血流量、調節胃酸和胃蛋白酶分泌及抗脂質過氧化損傷而起保護和修復胃黏膜作用，這為半夏厚樸湯加味在臨床上治療CAG提供了理論和實驗基礎。

[參考文獻]

[1]Vannella L,Lahner E,Annibale B. Risk for gastric neoplasias in patients with chronic atrophic gastritis:a critical reappraisal[J]. World J Gastroenterol，2012,18(12)：1279-1285

[2]彭貴祖. 改良中性紅法清除法應用于大鼠胃黏膜血流測定[J]. 江西醫藥,2002,37(1):10-12

[3]徐叔云,卞如濂,陳修. 藥理試驗方法[M]. 北京：人民衛生出版社,1982:849

[4]陳奇. 中藥藥理實驗方法學[M]. 北京:人民衛生出版社,1994:859

[5]何曉輝,陳文,陳建章,等. 雙蒲散治療大鼠慢性萎縮性胃炎的實驗研究[J]. 上海中醫藥雜志,2008,42(3):66-68

[6]李靜江. 加味芍藥甘草湯治療大鼠慢性萎縮性胃炎的實驗研究[J]. 安徽醫藥,2015,19(9):1668-1670

[7]楊燕燕,林江. 中藥對胃黏膜屏障保護研究進展[J]. 遼寧中醫藥大學學報,2014，16(10):118-121

[8]蔣時紅,劉旺根,王雪萍,等. 黃芪建中湯對脾虛型萎縮性胃炎大鼠血象、血液和胃黏膜生化指標的影響[J]. 中國中醫基礎醫學雜志,2006,12(4):279-281

[9]劉華漢,周余攀,陳世禧. 養胃舒膠囊治療老年慢性萎縮性胃炎的療效觀察[J]. 中醫藥導報,2013,19(2):67-68

[10] 王權華. 慢性萎縮性胃炎的胃黏膜保護機制的研究進展[J]. 臨床醫學工程,2011,18(7):1146-1174

[11] 成映霞,段永強,朱立鳴,等. 治萎防變膠囊對CAG模型大鼠血漿ET-1含量和胃組織氧自由基域的影響[J]. 中國中醫基礎醫學雜志,2011,17(2):174-176

Study on the effect of Banxia Houpo Decoction on blood flow and lipid peroxidation injury in gastric mucosa in rats with chronic atrophic gastritis

LI Ningning,GUO Hai, LEI Yanfei

(Henan Medical College,Zhengzhou 451191,Henan, China)

Abstract:0bjective It is to observe the effect of Banxia Houpo Decoction (BHD) on blood flow and lipid peroxidation injury in gastric mucosa in rats with chronic atrophic gastritis(CAG), and to investigate the mechanism. Methods 18 rats were randomly selected as normal group, another 90 rats were selected to establish CAG model with N methyl N nitro N nitrosoguanidine．The successful models were randomly divided into model group, Vitacoenzyme group treated with Vitacoenzyme 0.28 g/kg, high, medium and low dose of BHD groups treated with 10.0, 5.0, 2.5 g/kg BHD respectively, 18 rats in each group. All the rats were treated once per day and for 10 weeks. After 10 weeks, secretion of gastric acid and pepsin activity, gastric mucosal blood flow(GMBF), the SOD, MDA and GSH in gastric mlucosa were observed or detected. Results The secretion of gastric acid and pepsin activity and the levels of GMBF, SOD, GSH-Px in gastric mucosal were significantly lower while that of MDA was higher in model group than those in normal group (P all<0.05). The secretion of gastric acid and pepsin activity and the levels of GMBF, SOD, GSH-Px in gastric mucosal were significantly higher while that of MDA was lower in Vitacoenzyme group and BHD groups than those in model group (P all<0.05), and the decrease or increase were more significant in high dose group and medium group than that in low dose group (P<0.05). Conclusion Banxia Houpo Decoction has good curative effect on CAG, its mechanism may be related with improving blood circulation of gastric mucosa, strengthening gastric mucosl protective screen, regulating gastric acid and pepsin activity, resisting the free radical imp airment and so on.

Key words:chronica trophic gastritis; Banxia Houpo Decoction; Chinese medicine treatment; raexperiemntal study

[作者簡介]李寧寧，女，碩士，講師，主要從事胃腺癌的防治研究工作。

[基金項目]河南省科技攻關計劃項目(142102310089)

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.20.002

[中圖分類號]R-332

[文獻標識碼]A

[文章編號]1008-8849(2016)20-2170-04

[收稿日期]2015-12-02