網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)窺盤的設(shè)計與應(yīng)用

嚴(yán)家來+方安寧

摘 要： 網(wǎng)織紅細(xì)胞是評價骨髓造血能力的重要指標(biāo)，國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會推薦米勒窺盤用于網(wǎng)織紅細(xì)胞的手工計數(shù)，但其也存在一定缺點，作者對近年的相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行了整理分析，并提出觀點，為如何更好地設(shè)計、制作和選用的網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)窺盤提供參考。

關(guān)鍵詞： 網(wǎng)織紅細(xì)胞 窺盤 設(shè)計 應(yīng)用

紅細(xì)胞（RBC）的發(fā)育依次經(jīng)歷原始紅細(xì)胞、早幼紅細(xì)胞、中幼紅細(xì)胞、晚幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞（圖1）。網(wǎng)織紅細(xì)胞（Ret）是介于晚幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞之間的尚未完全成熟的過渡階段細(xì)胞，其胞質(zhì)中尚殘留部分核糖核酸（RNA）等嗜堿性物質(zhì)，可被新亞甲藍(lán)等堿性染料活體染色后呈織網(wǎng)狀或顆粒狀結(jié)構(gòu)，故稱之為網(wǎng)織紅細(xì)胞。國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會（ICSH）將網(wǎng)織紅細(xì)胞分成Ⅰ～Ⅳ型（圖2）。網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)可反映骨髓的造血功能，對貧血的診斷、鑒別診斷及預(yù)后有重要的參考價值。

目前雖然有流式細(xì)胞儀（FCM）和帶網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)的五分類血細(xì)胞分析儀（BA）可以檢測網(wǎng)織紅細(xì)胞，而且衍生出眾多參數(shù)，但至今尚未普及。基層醫(yī)療單位還是應(yīng)用窺盤法計數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞。網(wǎng)織紅細(xì)胞的認(rèn)識從形態(tài)學(xué)開始，以手工方法計數(shù)，可直觀地看到網(wǎng)織紅細(xì)胞的形態(tài)特征。網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)的參考方法（WS/T346-2011）是直接在油鏡下分別計數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞（圖3），網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（Ret%）按以下公式計算：

要保證網(wǎng)織紅細(xì)胞的準(zhǔn)確性即低CV%值，往往需要增大計數(shù)的紅細(xì)胞數(shù)（表1）。由此可見，直接計數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞比例時，紅細(xì)胞計數(shù)的工作量非常大。

網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)廣泛應(yīng)用米勒窺盤，計數(shù)1000個紅細(xì)胞中網(wǎng)織紅細(xì)胞的百分比。米勒窺盤是一種光學(xué)圓形片狀窺盤，直徑19mm，安裝在顯微鏡目鏡中，窺盤中有面積比例為1∶9的2個正方形計數(shù)方格[1]（圖4），只需計數(shù)小方格（A）內(nèi)的紅細(xì)胞即可準(zhǔn)確估量出整個大方格（B）內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)。

米勒窺盤在某些型號的顯微鏡下不能看到窺盤的整個大方格，以及1：9比例固定的缺點等。經(jīng)查閱文獻(xiàn)，介紹幾種計數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞的窺盤（表1）供大家參考。

各種窺盤結(jié)構(gòu)的核心是在血片上細(xì)胞分布均勻的前提下，要能夠以“小”窺“大”，并根據(jù)細(xì)胞數(shù)量確定一個部分與整體的合適比例，以降低工作強(qiáng)度，提高工作效率和準(zhǔn)確性。要做到窺盤的科學(xué)合理，必須遵循以下幾點：①窺盤是置于顯微鏡目鏡頭內(nèi)的玻璃片或透明膠片，畫線結(jié)構(gòu)應(yīng)在直徑16mm圓圈的范圍以內(nèi)，確保視野內(nèi)能夠看到完整的結(jié)構(gòu)；②對于部分非平場顯微鏡，邊緣細(xì)胞不清晰，易漏數(shù)誤數(shù)，小格盡可能設(shè)計位置居中；③大小方格比例10：1在計算和準(zhǔn)確度上優(yōu)由于9：1的設(shè)計；④對于壓線細(xì)胞的處理，方格型優(yōu)于圓圈型，易于做到壓線細(xì)胞計數(shù)一半，舍棄一半。

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