組織因子途徑抑制物—2在正常宮頸、宮頸上皮內瘤變和宮頸

[摘 要] 目的：探討TFPI-2在正常宮頸、宮頸上皮內瘤變和宮頸癌組織中表達。方法：選取2013年1月—2015年12月本院診治的宮頸癌患者45例、宮頸上皮內瘤變（CIN）患者45例以及正常宮頸組織45例的病理標本，采用免疫組化檢測方法，測定3組標本中TFPI-2的表達情況，表達量與宮頸癌分期、分型、淋巴轉移的關系。結果：正常宮頸患者、宮頸上皮內瘤變（CIN）患者、宮頸癌患者組織病理標本中TFPI-2的表達逐漸下降，3組間比較差異有統計學意義（P < 0.05）；宮頸癌中TFPI-2的表達與其FIGO分期和淋巴結轉移有關，腫瘤越晚期，TFPI-2的表達越低（P < 0.05）；但是與其病理分類和分化程度無關（P>0.05）。結論：TFPI-2的表達在宮頸癌患者中顯著降低，其含量降低可能是導致宮頸癌發生的原因之一。

[關鍵詞] TFPI-2；宮頸癌；免疫組化

中圖分類號：R737.33 文獻標識碼：B 文章編號：2095-5200（2016）03-079-03

DOI：10.11876/mimt201603029

宮頸癌是婦科常見的惡性腫瘤，發病可能與HPV感染、分娩次數、初產年齡小以及性生活紊亂等多種因素有關[1]。隨著對腫瘤分子水平發病機制的不斷研究，參與宮頸癌病理機制的其他因素也在不斷被揭示。TFPI-2（組織因子途徑抑制物-2）因其最早是從胎盤中分離提取故又稱為胎盤蛋白-5[2]，文獻報道，TFPI-2與腎癌[3]、肺癌[4]、肝癌[5]等惡性腫瘤的發生發展相關。本研究觀察宮頸癌、宮頸上皮內瘤變（CIN）以及正常宮頸的組織病理標本中TFPI-2的表達，探討TFPI-2是否參與宮頸癌的發生發展。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年1月—2015年12月本院診治的宮頸癌患者45例、宮頸上皮內瘤變（CIN）患者45例以及正常宮頸組織45例的病理標本。宮頸癌患者取材前未行手術或放化療；健康對照組排除妊娠以及哺乳期婦女。3組患者的年齡、孕產等一般資料相比，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 檢測方法

取宮頸組織，甲醛固定、脫水、浸蠟、包埋，，連續切片厚度4μm。切片給予常規脫蠟、水化處理，即：二甲苯3次，20min/次；100%酒精3次，100min/次；之后98%酒精、80%酒精、70%酒精各10min。蒸餾水、PBS液沖洗3次，5min/次；將切片置入枸櫞酸緩沖液中進行加熱，沸騰后停止加熱，5min之后重復加熱，之后在室溫下進行冷卻；用PBS溶液沖洗3次，5min/次；在37℃的溫度下，使用3%的H2O2孵育20min，阻斷內源性酶的活性；再次用PBS溶液沖洗3次，5min/次；滴加山羊血清封閉15mim，除去多余液體后加入濃度為1：160的TFPI-2抗體，在4℃的溫度下孵育過夜；復溫并在PBS沖洗后加入生物素標記的二抗IgG工作液，在37℃下孵育15min；用PBS溶液沖洗3次，5min/次；加入辣根標記的鏈霉卵白素工作液，在37℃下孵育15min；用PBS溶液沖洗3次，5min/次；DAB（聯苯胺）顯色，在室溫條件下顯色，顯微鏡下控制標本的染色程度；在蘇木素進行復染約20～30s后使用清水進行沖洗、返藍；使用梯度酒精進行脫水，即：70%酒精、80%酒精、98%酒精、100%酒精脫水三次，每次5min；二甲苯進行透明，3次，5min/次。結束后使用中性樹膠進行封片處理，放于顯微鏡下進行觀察。

1.3 結果判讀

病理科醫生在200倍鏡下，隨機選擇5個視野觀察，陽性結果為胞質被染為棕黃色。其中不表達是陰性，弱陽性為小于10%、陽性為10%～50%、次強陽性為50%～70%、強陽性為75%～100%。

1.4 統計學分析

使用SPSS 17.0，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料采用率表示，采用χ2檢驗，等級資料采用秩和檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組患者宮頸組織中TFPI-2的表達情況

免疫組化結果顯示：正常宮頸患者、宮頸上皮內瘤變（CIN）患者、宮頸癌患者組織病理標本中TFPI-2的表達逐漸下降，3組間比較差異有統計學意義（P<0.05）。具體結果見表1。

2.2 宮頸癌樣本TFPI-2的表達與病理類型、分化程度、分期以及淋巴結轉移的關系

宮頸癌中TFPI-2的表達與其FIGO分期和淋巴結轉移有關，腫瘤越晚期，TFPI-2的表達越低，差異有統計學意義（P<0.05）；但是與其病理分類和分化程度無關，差異無統計學意義（P>0.05）。具體結果見表2。

3 討論

3.1 TFPI-2概述

TFPI-2是一種絲氨酸蛋白酶家族抑制劑，基因位于染色體7q22，全長7Kb，其編碼產物的相對分子質量為32000，廣泛分布于人體細胞內[6]。TFPI-2可在內皮細胞、表皮細胞中分泌合成，在胎盤組織、骨骼肌、肝臟、血管內皮細胞中高度表達[7]。研究發現，惡性腫瘤患者發生了蛋白質的水解失調。Chand 等[8]進行體外實驗發現TFPI-2可抑制纖溶酶、基質金屬蛋白酶等多種蛋白酶。TFPI-2可以顯著的抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、纖溶酶的作用，從而參與到機體的組織發生、纖溶、胚胎發育及腫瘤侵襲等過程中[9]。在許多腫瘤中都能夠發現TFPI-2基因的缺失。

3.2 TFPI-2的作用機制及與宮頸癌的關系

宮頸癌導致患者死亡的一個主要原因就是癌細胞的侵襲以及遠處轉移，在宮頸癌發生侵襲或者遠處轉移時，需要將基底膜、ECM進行降解[10]。在整個過程中，腫瘤細胞分泌的絲氨酸蛋白酶起著重要的作用。作為絲氨酸蛋白酶抑制劑，TFPI-2可以通過以下方面抑制宮頸癌的侵襲和轉移：1）抑制、降解MMP（基質金屬蛋白酶），腫瘤細胞可以分泌MMP并與ECM中的生長因子結合，改變基質的微環境，不僅促進腫瘤的增生，還會使MMP的表達、分泌上調。而TFPI-2可以與MMP及其前體結合，競爭性的抑制MMP和ECM的結合，從而保證ECM結構的完整性，發揮抑制腫瘤的侵襲、轉移作用[11-12]。2）抑制腫瘤新生血管的形成，一方面可以抑制MMP的表達和纖溶物質，增加其抑制物的功能活性起作用；另一方面可以使IL-8的表達水平和血管生成因子的表達下調，發揮抑制血管生成的作用[13]。3）促進癌細胞的凋亡，TFPI-2可以通過降解絲氨酸蛋白產物，與凋亡受體結合，導致腫瘤細胞的死亡[14]。

本研究結果表明，宮頸癌中TFPI-2的表達與其FIGO分期和淋巴結轉移有關，但是與其病理分類和分化程度無關（P>0.05），推測宮頸癌中TFPI-2表達可能作為判斷患者的病情進展以及預后的指標。可在后續實驗中進行進一步研究。

參 考 文 獻

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