氣相色譜法測定伊潘立酮起始原料中1，2—二氯乙烷

黃鳳蕓　靳朝東　陳曉雨

[摘 要] 目的：建立伊潘立酮起始原料中1，2-二氯乙烷殘留溶劑的測定方法。方法：采用頂空進樣毛細管氣相色譜法。色譜柱：Agilent DB-624毛細管柱（30m×0.53mm×3.0?m）；程序升溫；檢測器：電子捕獲檢測器（ECD），溫度：250℃；恒壓：2.5psi；載氣為高純氮氣。結果：1，2-二氯乙烷在0.55～2.00μg/mL濃度范圍內線性關系良好（r=0.9999），平均回收率為101.1%；定量限為2.75ppm；檢測限為0.75ppm。結論：建立的方法操作簡便、靈敏度高，結果準確，可有效檢測伊潘立酮起始原料中一類溶劑1，2-二氯乙烷的殘留量。

[關鍵詞] 伊潘立酮起始原料；1，2-二氯乙烷；頂空氣相色譜法

中圖分類號：O657 文獻標識碼：A 文章編號：2095-5200（2016）03-067-03

[Abstract] Objective： To establish the method for the determination of 1，2-dichloroethane in iloperidonestarting material. Methods： Headspace capillary gas chromatography. The determination was performed on Agilent DB-624 capillary column by temperature programming.The temperature of electron capture detector was set at 250℃，steady pressure was set at 2.5psiand high purity N2was used as carrier gas. Results： The good linear range of 1，2-dichloroethane organic solvent had been obtained at 0.55μg / ml ～ 2.00μg / ml concentration range（r=0.9999）with average recovery of 101.1%.The limit of quantification was2.75ppm. The limit of detection was0.75ppm. Conclusion： The established method is simple， sensitive， accurate，and it can be effectively used in the determination of 1，2-dichloroethanein iloperidonestarting material.

[Key words] Iloperidonestarting material；1，2-dichloroethane；headspace gas chromatography

伊潘立酮（Iloperidone）為口服非典型精神抑制藥物，是5-羥色胺、多巴胺D2受體拮抗劑，能夠明顯減輕精神分裂患者陽性和陰性癥狀[1-3]且副作用少。伊潘立酮起始原料在合成過程中使用了鹵代烴1，2-二氯乙烷（CH2ClCH2Cl）[4-8]，其屬于一類有機溶劑，有劇毒，對人體健康危害較大，因此在制訂質量標準時必須考察該起始原料中1，2-二氯乙烷殘留問題。按照2010年版《中國藥典》（二部）附錄Ⅷ P殘留溶劑測定方法[9]和人用藥品注冊技術要求國際協調會（ICH）[10]制定的相關要求，本文采用頂空氣相色譜法對其進行測定，并對測定方法進行了驗證，結果表明本文建立方法操作簡便、靈敏度高，結果準確，從而為伊潘立酮質量標準制訂提供依據。

1 儀器試劑

Agilent6890N，Agilent7890A氣相色譜儀（美國Agilent 公司）；Agilent 7694E自動頂空進樣器（美國Agilent 公司）；電子捕獲檢測器（ECD）；純水氫氣發生器（濟南浩偉實驗儀器有限公司）；HV-3靜音無油空壓機（濟南浩偉實驗儀器有限公司）。

伊潘立酮起始原料（天津藥物研究院，自制，批號：080306，090107，含量>99.50%）；

1，2-二氯乙烷，分析純（天津市化學試劑二廠，含量：>99.0%）；N，N-二甲基甲酰胺，分析純（天津市康科德科技有限公司，含量：>99.0%）。

2 實驗方法

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent DB-624毛細管柱（30m×0.53mm ×3.0?m）；升溫程序：80℃保持20min，以100℃/min速率升溫至200℃，保持5min；電子捕獲檢測器，檢測器溫度：250℃；載氣：高純N2，恒壓：2.5psi；進樣口溫度：250℃，分流比：1∶1。采用頂空進樣法測定，頂空平衡溫度為120℃，平衡時間為15min，進樣量：3mL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品貯備溶液 精密稱取1，2-二氯乙烷2.0mg置于盛有適量N，N-二甲基甲酰胺200mL容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備溶液。

2.2.2 對照品溶液 精密量取上述對照品貯備溶液10mL，置于100mL容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺溶液稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

2.2.3 空白溶液 精密量取N，N-二甲基甲酰胺2mL置于頂空進樣瓶中，加蓋密封，作為空白溶液。

2.2.4 供試品溶液 精密稱取伊潘立酮起始原料樣品約400mg置于頂空進樣瓶中，加入2mL的N，N-二甲基甲酰胺溶液，溶解密封，作為供試品溶液。

3 方法學驗證

3.1 系統適用性試驗

在2.1項色譜條件下，取對照品溶液（2.2.2）進樣測定，記錄色譜圖，對照品溶劑色譜圖見圖1A。結果表明與相鄰溶劑峰（6.155min）之間分離度大于1.5，符合分離要求。

3.2 空白干擾試驗

在2.1項色譜條件下，取空白溶液進樣測定，記錄色譜圖，空白溶劑色譜圖見圖1B。結果表明空白溶劑對樣品測定無干擾，符合溶劑要求。

3.3 定量限試驗

取2.2.1項下對照品溶液用N，N-二甲基甲酰胺逐步稀釋成一系列低濃度溶液，分別取2mL，置于頂空進樣瓶中，按2.1項下色譜條件進樣，記錄色譜圖。將信噪比S/N約為10時相應溶液確定為定量限溶液，在該濃度水平下重復測定6次，6次所得色譜圖溶劑峰面積RSD值小于10%，結果見表1。

3.4 檢測限試驗

取定量限濃度溶液用N，N-二甲基甲酰胺逐步稀釋成一系列低濃度溶液，分別取2mL，置于頂空進樣瓶中，按2.1項下色譜條件進樣，記錄色譜圖。信噪比S/N約為3相應溶液確定為檢測限溶液，結果見表1。

3.5 線性關系及范圍

分別精密量取對照品貯備溶液（2.2.1）0.80mL、1.00mL、1.20mL、1.50mL、2.00mL，置于10mL量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻。另外取定量限溶液作為最低濃度溶液。各取上述溶液2mL，置于頂空進樣瓶中，按2.1項下色譜條件分別進樣。以1，2-二氯乙烷質量濃度（c）為橫坐標、峰面積（A）為縱坐標繪制標準曲線，其線性關系見表2。

表2 1，2-二氯乙烷線性關系試驗結果

殘留溶劑 線性范圍（μg/ml） 線性方程 相關系數（r）

1，2-二氯乙烷 0.55～2.00 A=100.28c-0.3308 0.9999

由表2可知，1，2-二氯乙烷在0.55～2.00μg/mL濃度范圍內，與峰面積積分值呈良好線性關系，表明該方法線性關系良好。

3.6 精密度試驗

3.6.1 重復性試驗 精密量取對照品溶液2mL至10mL頂空進樣瓶中，平行6份，密封。按2.1項下色譜條件，進樣，記錄色譜圖，結果峰面積RSD為1.56%（n=6），表明方法重復性良好。

3.6.2 中間精密度試驗 精密量取對照品溶液2mL至10mL頂空進樣瓶中，平行6份，密封。第二天由另一操作人員在Agilent7890A氣相色譜儀上進行試驗，按2.1項下色譜條件進樣，記錄色譜圖。結果峰面積RSD為1.13%（n=12），表明方法中間精密度良好。

3.7 回收率試驗

精密量取對照品貯備溶液4mL、5mL、6mL分別至50mL容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺溶液稀釋至刻度，分別得對照品溶液濃度80%、100%、120%溶液。精密稱取樣品約（批號：090107）400mg至10mL頂空進樣瓶中，共11份，其中2份加入2mL N，N-二甲基甲酰胺溶液溶解密封，作為供試品溶液。其余9份加入以上三種濃度溶液各2mL，各平行3份，作為加樣供試品溶液。以2.2項下對照品溶液作為對照，按2.1項下色譜條件，分別進樣，計算回收率，1，2-二氯乙烷平均回收率為101.1%，回收率RSD為3.16%。可知1，2-二氯乙烷回收率符合要求，表明方法準確度良好。

3.8 穩定性試驗

精密量取對照品溶液2mL至10mL頂空進樣瓶中，在不同時間點，按2.1項下色譜條件進樣，記錄色譜圖。結果在75h內峰面積RSD為1.75%，表明1，2-二氯乙烷在N，N-二甲基甲酰胺溶液中穩定。

3.9 耐用性試驗

精密量取對照品溶液2mL至10mL頂空進樣瓶中，平行18份，依據方法色譜條件，對壓力（±0.1psi）、初始柱溫（±2℃）、頂空平衡溫度（±2℃）及平衡時間（±1min）進行微小改變，在初始色譜條件及各變動條件下分別進樣，每個條件下各進樣2份，記錄色譜圖。結果在壓力各個條件下，峰面積RSD為4.19%；初始柱溫各個條件下，峰面積RSD為3.40%；頂空平衡溫度各個條件下，峰面積RSD為2.96%；頂空平衡時間各個條件下，峰面積RSD為4.02%。說明該方法耐用性良好。

3.10 樣品測定

精密量取對照品溶液2mL于10mL頂空瓶中，平行2份。稱取2批樣品約400mg于10mL頂空瓶中，加入2mL N，N-二甲基甲酰胺溶液，溶解密封，各平行2份。按2.1項下色譜條件分別進樣測定。結果見表3。

4 討論

測定藥物中殘留溶劑對于控制藥品質量、保證用藥安全具有重要意義。用本文建立氣相色譜法檢測藥品中殘留溶劑，結果完全符合2010年版《中國藥典》（二部）附錄Ⅷ P中有機溶劑殘留量測定要求[9]。

4.1 檢測器選擇

使用電子捕獲檢測器和氫火焰離子化檢測器均可檢測1，2-二氯乙烷。相比而言，電子捕獲檢測器對于含有鹵素1，2-二氯乙烷響應值更高，便于對樣品中微量溶劑準確測定。

4.2 溶劑選擇

伊潘立酮起始原料在二甲基亞砜和N，N-二甲基甲酰胺中溶解性均較好，但是伊潘立酮起始原料與二甲基亞砜會發生反應，生成未知雜質峰，故不選用。在本色譜條件下N，N-二甲基甲酰胺出峰與1，2-二氯乙烷峰互不干擾，而且1，2-二氯乙烷在N，N-二甲基甲酰胺中能互相溶解。所以選擇N，N-二甲基酰胺作溶劑。

4.3 頂空平衡條件選擇

頂空平衡溫度120℃和130℃相比，峰面積基本不再改變，因此選用頂空瓶加熱（平衡）溫度為120℃；并對頂空平衡時間進行篩選，結果發現平衡時間30min與15min相比，峰面積基本不再增加，表明溶液在15min時氣-液兩相已達到平衡。因此選擇在平衡溫度120℃條件下平衡15min。

4.4 柱溫選擇

分別選擇柱溫為80℃、100℃進行試驗。結果顯示在100℃時，1，2-二氯乙烷與空白溶液中4.9min雜質峰未分開，故選擇80℃作為初始溫度。

經過驗證，建立方法定量限、檢測限、精密度、線性及范圍、回收率、穩定性、耐用性等試驗結果均較好，能夠準確地檢測出伊潘立酮起始原料中殘留1，2-二氯乙烷，對于保障藥品質量及用藥安全具有重要意義。

參 考 文 獻

[1] 唐俊，張云霞，葛海濤.頂空進樣-毛細管氣相色譜法測定伊潘立酮原料藥中溶劑殘留[J].中國醫藥科學，2012，2（3）：154-155.

[2] 常麥會，李樂華.新型抗精神病藥伊潘立酮研究進展[J].中南藥學，2010，8（11）：858-862.

[3] 李園園，李華芳.新型非典型抗精神病藥：伊潘立酮[J].中國臨床藥學雜志，2011，20（5）：318-322.

[4] 劉俊，賈麗君，田延河. 自動頂空氣相色譜法同時測定食品包裝材料中氯乙烯、1，1-二氯乙烷和1，2-二氯乙烷單體[J].中國衛生檢驗雜志，2011，21（12）：2821-2823.

[5] 蔡志斌，張英，鄭志偉.自動頂空-氣相色譜質譜聯用技術測定化工原料中1，2-二氯乙烷[J].中國衛生檢驗雜志，2013，23（3）：622-624.

[6] 高嵐岳，齊瑩，金亞平.1，2-二氯乙烷神經毒性[J].中國工業醫學雜志，2012，25（1）：42-43.

[7] 姚志揚，徐煒.毛細管柱氣相色譜法測定工作場所空氣中丙烯腈、1，2-二氯乙烷方法[J].中國衛生檢驗雜志，2010，20（10）：2463-2464.

[8] 劉云富，譚廣輝.氣相色譜-質譜法測定工作場所空氣中1，2-二氯乙烷含量[J].理化檢驗-化學分冊，2014，50（2）：262～263.

[9] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版二部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄Ⅷ P.

[10] 人用藥物注冊技術要求國際協調會.殘留溶劑指導原則[M].北京：人民衛生出版社，2000：236.