胃腸道間質瘤病理及轉移灶免疫組織化學表達

徐志強　唐大榮

[摘 要] 目的：利用免疫組化檢測CD117、CD34、DOG-1、SMA、S-100、p53、Ki-67、PCNA等蛋白在胃腸道間質瘤（GIST）中的表達及臨床意義。方法：對89例確診為GIST的石蠟標本，運用免疫組織化學方法檢測CD117、CD34、DOG-1、SMA等蛋白表達，對出現肝轉移病例，對比原發灶和轉移灶的p53、Ki-67、PCNA蛋白的表達。結果：89例 GST中 CD117、CD 34 、DOG-1、SMA 、S-100 的陽性率分別是 95.5% （85/89）、 91.01% （81/89 ）、 37.1%（33/89）、23.5%（21/89）、 14.6% （13/89）。轉移灶中的Ki-67、PCNA、p53蛋白表達量明顯增加（P<0.05）。結論：CD117、CD34、DOG-1、SMA對GIST具有診斷和鑒別意義；p53、Ki-67、PCNA對GIST判斷預后有一定價值。

[關鍵詞] 胃腸道間質瘤；病理

中圖分類號：R735.2 文獻標識碼：B 文章編號：2095-5200（2016）03-073-03

[Abstract] Objective： Using immunohistochemical technique to to detect CD117、CD34、Dog-1、SMA、S-100、p53、Ki-67、PCNA in gastric stromal tumor （GIST）. Methods： Detected 89 cases.To compare the expression of p53、Ki-67、 PCNA of primary foci and metastatic foci. Results： The positive expression rate of CD117， CD 34， Dog - 1， SMA， S-100 was 95.5% （85/89）， 91.01% （81/89）， 37.1% （33/89）， 23.5% （21/89）， 14.6% （13/89）.In the metastatic foci，the expression of Ki-67/PCNA/p53 protein was significantly increased （P<0.05）. Conclusion：CD117， CD34， Dog-1， SMA have diagnostic of GIST.p53， Ki - 67， PCNA reflect the prognosis of GIST.

[Key words] gastric stromal tumor； pathological

胃腸道間質瘤是起源于中胚層的間質腫瘤。1983年，Mazurt等[1]運用電鏡技術發現胃腸道間葉腫瘤無平滑肌等超微結構，運用免疫組織化學法進一步研究，發現這組腫瘤無肌性或神經分化特征，而是一種非定向分化的間質細胞，于是將其命名為胃腸間質瘤（GIST）。1998年，Hirota等[2]發現GIST能特異性表達標記物KIT蛋白（CD117 ），而KIT蛋白表達來源于c-kit原癌基因突變。2003年，Heinrich等[3]發現部分GIST有血小板衍生生長因子受體α（plate let derived growth factor receptor alpha，PDGFRA）基因突變。本文利用免疫組織化學法檢測我院89例組織病理明確的胃腸道間質瘤病例的CD117、CD34、DOG-1、SMA、S-100表達情況，分析上述指標對GIST的診斷價值。

大量報道指出[4-6]，GIST預后極差，40%～90%的手術病人出現術后復發和轉移的癥狀。而腫瘤抑制因子（53）、細胞增殖核抗原（PCNA）及細胞增殖指數（Ki-67）這三個蛋白指標與GIST的預后密切相關。在收集的89例病例中，5例發生肝轉移，運用免疫組織化學方法對比5例原發灶和轉移灶的p53、Ki-67、PCNA蛋白的表達，了解這些指標對GIST預后判斷價值。

1 材料和方法

1.1 標本來源

收集我院從2013年1月至2015年6月期間臨床資料完整、經手術和病理檢查診斷明確的GIST 病例89例。記錄患者年齡、性別、腫瘤部位、 腫瘤大小、 腫瘤有無轉移等基本資料，GIST病理診斷由兩位病理醫師復閱切片，不一致病例由第三名高年資醫師評估，討論達成共識。

1.2 材料及免疫組織化學實驗方法

CD117、CD34、DOG-1、SMA、S-100、p53、Ki-67等抗體及檸檬酸鹽修復液購自福州邁新生物技術有限公司；DAB顯色試劑盒購自北京中杉金橋生物公司。

免疫組化步驟為1）脫蠟和水化；2）抗原修復；3）免疫組織化學染色， 3%H2O2滴加在組織上，室溫靜置10min；PBS洗3次各5min；滴加正常山羊血清封閉液，室溫20min；滴加Ⅰ抗50μL， 4℃過夜；PBS洗3次各5min；滴加Ⅱ抗50μL，37℃20min；PBS洗3次各5min；DAB顯色2～3min，在顯微鏡下掌握染色程度；自來水沖洗5min；蘇木精復染3min，鹽酸酒精分化3s；自來水沖洗10min；脫水、透明、封片、鏡檢。4）結果判讀標準為CD117、CD34、SMA、S-100、p53、Ki-67、PCNA以細胞核內出現黃色或棕黃色顆粒為陽性細胞；DOG-1以胞漿出現黃色或棕黃色顆粒為陽性細胞。陽性結果的判斷標準按照染色程度和顯色細胞的數量結合進行歸類：細胞顯色比例 < 5%（-）；細胞顯色的比例在 5%～25%之間，呈現為淡黃色（+）；細胞顯色的比例在25%～50%之間，呈現為黃色（++）；細胞顯色的比例 > 50% ，呈現棕黃色（+++）。

1.3 統計學處理

使用SPSS11.0軟件系統，計數資料進行χ2檢驗或Fisher`s確切概率法檢驗，相關比較采用Spearman等級相關分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 原發灶中CD117、CD 34 、DOG-1、SMA 、S-100

表達

免疫組織化學結果（圖1）顯示，在89例 GIST中 CD117、CD 34、DOG-1、SMA、S-100 的陽性率分別是 95.5% （85/89）、 91.01% （81/89 ）、 37.1%（33/89）、23.5%（21/89）、 14.6% （13/89）。可見CD 117和CD 34 在GIST組織中陽性表達較高，而肌源性 SMA 或者神經源性腫瘤標記物S-100 在GST中表達較低。

2.2 原發灶、轉移灶中p53、PCNA、Ki-67表達

免疫組織化學結果（圖2）顯示，p53、PCNA蛋白在原發部位中不表達，在轉移灶中表達量明顯增加（P<0.05）；在原發部位Ki-67增殖指數約13%，在轉移灶中增加到約89%（P<0.05）。

3 討論

胃腸道間質瘤最常見發生部位為胃（60%），其次為小腸（30%）、十二指腸（5%）、大腸（4%）[7]。臨床特征以消化道出血、腹痛、腫瘤阻塞為主。GIST組織病理學分型可以分為3種[8]：梭形細胞型、上皮細胞型、混合型。梭形細胞型約占70%，上皮細胞型約占20%，混合型約占10%。

目前認為GIST很大程度是由于C-kit基因發生突變引起。C-kit基因是酪氨酸激酶受體，編碼CD117蛋白。GIST患者C-kit基因外顯子突變，導致基因過表達，從而使CD117蛋白表達增加。CD34 蛋白是骨髓造血前體細胞的特殊性抗原，在原始造血干細胞、內皮細胞、肌纖維母細胞都可以看到陽性表達。本組實驗，89例GIST患者中CD117、CD34的陽性表達率高，而肌源性的SMA和神經源性腫瘤標記物S-100陽性表達率低。CD117陽性、CD34陽性可以作為GIST診斷依據[9]，而SMA和S-100低表達可以用來排除平滑肌源性腫瘤、神經源性腫瘤。

然而在實驗中我們觀察到，C-kit仍有5%左右的陰性表達率。C-kit陰性通常與PDGFRA相關基因突變相關。Rizzardi C等[10]提出C-kit陰性的GIST，存在PDGFRA基因14外顯子缺失，導致疾病發生。但是膜通道蛋白DOG-1蛋白[11-12]在C-kit陰性GIST中可以表達[13]。DOG-1的免疫組織化學在瘤細胞的胞漿和胞膜均有表達，因為敏感性和特異性很高，DOG-1在GIST診斷中越來越受重視。本研究表明，DOG-1可以作為C-kit陰性的胃腸道間質瘤的一個重要診斷指標。

胃腸道間質腫瘤的預后差，易發生轉移[14-15]，P53與PCNA在轉移灶的表達量明顯增加預示著GIST預后差。原因可能是p53調控cyclin依賴激酶抑制因子（p21），而p21與PCNA結合抑制PCNA的活性。當GIST發生惡性轉移時，p53表達增加，打亂這條通路，同時直接激活PCNA，從而促進細胞增殖。

Ki-67[16]作為增殖指數，與細胞有絲分裂密切相關。有觀點認為，在判定GIST預后因素中，Ki-67蛋白比PCNA更具特異性和準確性。然而，Ray等[17]提出相反意見，他們認為對于GIST預后判斷，PCNA更具優勢。從本實驗結果看，PCNA和Ki-67在轉移灶中表達均增加，對預測疾病的復發和患者生存率均具有一定價值。但是對PCNA和Ki-67 在臨床應用的優先級，仍存在爭論。

總之，GIST在形態學上顯示為非定向性腫瘤，因此準確診斷是一個復雜過程。借助于免疫組織化學，通過檢測CD117、CD34、DOG-1、SMA、S-100等蛋白指標可以明確GIST診斷。p53、Ki-67、PCNA蛋白的高表達可以直接反映GIST預后，為臨床治療提供參考。

參 考 文 獻

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