改良低溫螯合法分離家兔小腸絨毛和隱窩細(xì)胞及分離效果鑒定

沈雪梅　李　晶　張　剛　崔宏曉　劉麗慧　姚軍虎　徐秀容

(西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，楊凌712100)

改良低溫螯合法分離家兔小腸絨毛和隱窩細(xì)胞及分離效果鑒定

沈雪梅李晶張剛崔宏曉劉麗慧姚軍虎徐秀容*

(西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，楊凌712100)

摘要：本試驗(yàn)旨在研究家兔小腸絨毛和隱窩細(xì)胞的分離方法，為深入研究小腸上皮結(jié)構(gòu)與功能提供體外模型。試驗(yàn)以新西蘭白兔為試驗(yàn)材料，在不同螯合劑濃度[5、10、15、20、25 mmol/L 乙二胺四乙酸(EDTA)]和螯合溫度(4、25 ℃)下分離小腸絨毛和隱窩細(xì)胞，檢測(cè)所分離細(xì)胞團(tuán)的產(chǎn)量、形態(tài)、細(xì)胞活率、完整性。結(jié)果表明：1)各螯合條件下分離的絨毛和隱窩細(xì)胞形態(tài)完整，基因組DNA與總RNA完整；2)螯合溫度越高且EDTA濃度越大時(shí)，細(xì)胞富集率越高，但對(duì)細(xì)胞毒害作用也越強(qiáng)，4 ℃、5 mmol/L EDTA條件下絨毛和隱窩細(xì)胞富集率分別為7.75%和1.01%，絨毛相對(duì)完整率和隱窩細(xì)胞相對(duì)活率分別為91.67%和93.48%；25 ℃、25 mmol/L EDTA條件下絨毛和隱窩細(xì)胞富集率則分別高達(dá)17.89%和4.99%，但絨毛相對(duì)完整率和隱窩細(xì)胞相對(duì)活率僅為4.25%和5.17%；3)綜合分析后確定，4 ℃、10 mmol/L EDTA條件下分離效果最佳；4)在最佳條件下所分離隱窩富集物的溶菌酶和α-防御素的相對(duì)表達(dá)量極顯著高于絨毛富集物(P<0.01)，顯示細(xì)胞純度較高；且隱窩細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)9 h后溶菌酶和α-防御素的相對(duì)表達(dá)量未發(fā)生顯著變化(P>0.05)，顯示細(xì)胞依然具有較高活力。由此可見，改良的低溫螯合法適用于家兔小腸絨毛和隱窩細(xì)胞的高效分離。

關(guān)鍵詞：隱窩；絨毛；腸上皮細(xì)胞；螯合劑；家兔

小腸是機(jī)體消化吸收的重要部位，其功能與腸上皮細(xì)胞密切相關(guān)，單層柱狀上皮細(xì)胞覆蓋在腸腔組成小腸的上皮，上皮彎曲折疊有序地排列成絨毛和隱窩，其中上皮凸向腸腔形成的葉狀結(jié)構(gòu)為絨毛，下陷至固有層形成的指套狀結(jié)構(gòu)為隱窩[1]?！?br>