食品中金黃色葡萄球菌定量檢測方法的研究

王洪亮，程艷宇，王夢曉（天津市乳品食品監測中心，天津300381）

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食品中金黃色葡萄球菌定量檢測方法的研究

王洪亮，程艷宇，王夢曉
（天津市乳品食品監測中心，天津300381）

摘要：探討一種金色葡萄球菌定量檢測的操作方法。采用GB4789.10-2010《食品安全國家標準食品微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗》第二法Baird-Parker平板法，以接種量0.3、0.3、0.4mL和0.1 mL兩種方法對同一濃度的金色葡萄球菌進行檢測，將各數據進行記錄對比分析。計數結果在10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL 3個數量級菌濃度上兩種操作方法相近，其中接種量0.1mL的方法計數值較高，但是此方法操作簡單，涂布均勻。在實際非仲裁檢驗過程中，經過方法驗證，可以根據需要采用此方法，以減輕工作量。

關鍵詞：食品安全；金黃色葡萄球菌；定量；方法比較

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）屬于葡萄球菌屬，是一種重要的病原菌，是典型的革蘭氏陽性菌，有較強的抵抗力。金黃色葡萄球菌營養要求不高，且有高度的耐鹽性，容易污染肉類、水產品、乳品等食品，在世界各個國家中，由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒在細菌性食物中毒中均占較大比例［1-2］，金黃色葡萄球菌引起的食物中毒已成為世界性的公共衛生問題。

目前關于食品中金黃色葡萄球菌的定量檢測方法主要有Baird-Parker平板計數法［3］、MPN計數法［3］、測試紙片法［4］、顯色培養基計數法等。由于國家的致病菌限量標準［5］中金色葡萄菌定量檢測的方法都為Baird-Parker平板計數法，但是接種量為0.3、0.3、0.4 mL，涂布不容易均勻，耗時，工作量大。為了省時，減小工作量，對接種量0.1 mL的操作方法進行比較分析研究，添加非目標菌進行比較分析，同時比較研究了在食品中的應用。旨在探求一種適應食品微生物實驗室檢驗要求的省時省力準確的方法，為食品檢測方法的研究及應用積累一定的經驗，為今后金黃色葡萄球菌的檢測工作提供一定參考。

1　材料

1.1樣品

生鮮乳和乳粉。

1.2培養基

營養瓊脂、BHI肉湯、Baird-Parker瓊脂基礎、卵黃亞碲酸鉀增菌劑、凍干血漿，革蘭氏染色液：北京路橋技術股份有限公司。

1.3試驗菌株

金黃色葡萄球菌（ATCC 25923）、表皮葡萄球菌（CMCC 26069）：廣州環凱微生物科技有限公司。

1.4儀器設備

高壓滅菌鍋：日本雅馬拓；隔水式恒溫培養箱：上海一恒科技有限公司；麥氏比濁儀：法國梅理埃公司（bioMérieux，Inc）。

2　方法

2.1菌株和菌懸液的制備

取-20℃條件下保存于含10%脫脂奶粉的菌種，轉種至BHI肉湯，36℃培養24 h，再轉種至營養瓊脂平板，36℃培養24 h，用0.85%生理鹽水稀釋。調節濁度為（1～2）個麥氏單位，相應的菌濃度大約為（3×108～6×108）CFU/mL，10倍連續稀釋，分別制成10、102CFU/ mL和103CFU/mL數量級的純菌液。

2.2無添加食品基質的試驗

分別吸取1mL不同濃度的菌懸液以0.3、0.3、0.4mL接種量，分別加入3塊Baird-Parker平板，和0.1 mL的接種量，加入到一塊Baird-Parker平板，然后用無菌L棒涂布整個平板，注意不要觸及平板邊緣。使用前，如Baird-Parker平板表面有水珠，可放在25℃～50℃的培養箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。

在通常情況下，涂布后，將平板靜置10 min，如菌懸液不易吸收，可將平板放在培養箱（36±1）℃培養1 h；等菌懸液吸收后翻轉平皿，倒置于培養箱，（36± 1）℃培養，45 h～48 h。表皮葡萄球菌作為陰性對照。

平行5次試驗，觀察典型生長情況，記錄數據并分析比較。

2.3添加食品基質的試驗

生鮮乳在高壓121℃，5 min滅菌后，添加菌懸液分別制成10、100CFU/mL和1000 CFU/mL數量級的樣品。按“2.2”方法培養，判讀，計數，記錄數據并分析比較。

3　結果與分析

3.1無添加食品基質的試驗

選用10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL數量級濃度的純菌液，檢驗結果見表1。

表1　兩種操作方法檢測10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL數量級濃度金色葡萄球菌懸液的結果Table 1 Results of the two methods in determining the number of level concentration of S.aureus in the concentration of 10，100 CFU/mL和1 000 CFU/mL

續表1　兩種操作方法檢測10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL數量級濃度金色葡萄球菌懸液的結果Continue table 1 Results of the two methods in determining the number of level concentration of S.aureus in the concentration of 10，100 CFU/mL和1 000 CFU/mL

2種操作方法檢測數據平均值結果相近，其中接種量0.1 mL的方法計數值較高。

3.2添加食品基質的試驗

選用10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL數量級菌濃度的生鮮乳樣品，檢驗結果見表2。

表2　兩種操作方法檢測10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL數量級濃度金色葡萄球菌生鮮乳樣品的結果Table 2 Results of the two methods in determining the number of level concentration of S.aureus fresh milk sample in the concentration of 10，100 CFU/mL和1 000 CFU/mL

續表2　兩種操作方法檢測10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL數量級濃度金色葡萄球菌生鮮乳樣品的結果Continue table 2 Results of the two methods in determining the number of level concentration of S.aureus fresh milk sample in the concentration of 10，100 CFU/mL和1 000 CFU/mL

2種操作方法檢測數據平均值結果相近，其中接種量0.1 mL的方法計數值較高。

4　結論與討論

計數結果在10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL 3個數量級菌濃度兩種操作方法相近，其中接種量0.1 mL的方法計數值較高，但是此方法操作簡單，涂布均勻。對非仲裁檢驗單位有十分重要的實際意義，在實際非仲裁檢驗過程中，經過方法驗證，可以根據需要采用此方法，以減輕工作量。同時對金色葡萄球菌定量檢驗積累一些經驗及參考。

參考文獻：

［1］李自然，施春雷，宋明輝，等．上海市食源性金黃色葡萄球菌分布狀況［J］．食品科學，2013，34（1）：268-271

［2］陳廣全，張惠媛，曾靜．食品安全檢測培訓教材微生物檢驗［M］．北京：中國標準出版社，2010：351-352

［3］中華人民共和國衛生部．GB 4789.10-2010食品安全國家標準食品微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗［S］．北京：中國標準出版社，2010

［4］中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局．SN/T 1895-2007食品中金黃色葡萄球菌的快速計數法PetfifllmTM測試片法［S］．北京：中國標準出版社，2007

［5］中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會．GB 29921-2013食品安全國家標準食品中致病菌限量［S］．北京：中國標準出版社，2013

Study on Quantitative Detection Method of Staphylococcus Aureus in Food

WANG Hong-liang，CHENG Yan-yu，WANG Meng-xiao
（Dairy and Food Monitoring Center，Tianjin 300381，China）

Abstract：To explore a method for quantitative detection of Staphylococcus aureus. By GB 4789.10-2010＜National food safety standard Food microbiological examination：Staphylococcus aureus＞，the second method Baird Parker plate method，with two methods of inoculation of 0.3，0.3，0.4 mL and 0.1 mL of the same concentration of Staphylococcus aureus were detected，the data recording and comparison analysis. The results of the 10，100 CFU/mL and 1 000 CFU/mL three number of level concentration of the two methods of operation were similar，and the amount of 0.1 mL was higher，but this method was simple，and the coating was uniform. In theprocess of actual non arbitration inspection，verified by method，this method can be used according to the need to reduce the amount of work.

Key words：food safety；Staphylococcus aureus；determination；comparison method

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2016.09.044

作者簡介：王洪亮（1981—），男（漢），工程師，碩士，從事食品微生物檢驗研究。

收稿日期：2016-03-08