青刺果油皮炎凝膠的急毒試驗和皮膚刺激試驗研究

曹璽 和麗生 趙遠 郭世民??

摘要：目的觀察青刺果油皮炎凝膠的急性毒性試驗和皮膚刺激試驗。方法本試驗采用5 g/kg.bw最大給藥量進行家兔經皮急性毒性試驗；采用同體自身對照法進行家兔皮膚刺激試驗。結果最大給藥量給藥后動物未出現中毒反應及死亡，皮膚刺激試驗未見紅斑及水腫，藥物組與基質組、空白組相比，病變程度、病變范圍及病變發生率無明顯差異。結論急性毒性試驗，未發現明顯毒性反應和死亡；皮膚刺激試驗，對家兔完整皮膚和破損皮膚均無刺激性，表明青刺果油皮炎凝膠外用安全。

關鍵詞：青刺果油皮炎凝膠；急性毒性；皮膚刺激

中圖分類號：R285.5文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2016）05-0052-02

青刺果為薔薇科植物青刺尖（Prinsepia utilis Royle）的果實，中文學名總花扁核木，屬薔薇科、李亞科扁核木屬植物，別名青刺尖、打油果、青那果、狗奶子、炮筒果、梅花刺、打槍果、槍子果、阿那斯（納西族），出裸（彝族）[1]。它生長于海拔 1800～3000 m 的山坡、荒地、地邊、路邊和背陰灌叢中，在寒冷的冬季仍具極強生命力，在我國云南、四川和貴州等省均有分布，云南以麗江及其周邊地區為主要產地。青刺果在云南民間具有悠久的藥用歷史，根、葉、果均可入藥或食用，具有清熱、解毒、健胃等作用。

青刺果油皮炎凝膠是云南省中醫中藥研究院根據云南省麗江納西族民間藥用方法研制，采用純天然原料，具有治療濕疹的作用[2]。本實驗旨在研究皮膚給藥的安全性，為臨床應用提供理論依據。

1實驗材料

1.1實驗動物普通級家兔，體重2.0～3.5 kg，來源于昆明醫學院實驗動物中心，實驗動物生產許可證號：SCXK（滇）2011-0004。

1.2受試物及對照品青刺果油皮炎凝膠，批號：20150901；空白凝膠基質，均由云南省中醫中藥研究院配制。陰性對照，氯化鈉注射液，250 mL/瓶，250 mL/2.25 g，批號1114231，生產單位：昆明南疆制藥有限公司。

2實驗方法

2.1急性毒性試驗[3]

2.1.1分組普通級家兔用隨機法分為3組，即空白對照組，基質對照組和受試物原生藥組，每組10只，雌雄各5只。分籠飼養，每籠1只。

2.1.2給藥途徑及劑量采用5 g/kg最大給藥量進行經皮急性毒性試驗。[JP2]

2.1.3給藥方法及觀察時間動物給藥前24h背部去毛，涂藥面積應占體表面積10%，家兔為10 cm×16 cm。先將動物固定，將受試物均勻涂敷于動物背部皮膚染毒區，然后用一層薄膠片覆蓋，無刺激膠布固定，防止動物舔食。基質對照組按上述方法涂敷基質，采用24 h兩次給藥的方法，給藥容量為2.5 mL/kg，給藥量為5.0 g/kg。一般封閉接觸 24 h。24 h后用溫水洗去皮膚上的受試物，再進行局部觀察，連續觀察14 d。[JP]

2.1.4觀察指標觀察動物體重、皮膚黏膜、毛發光澤、呼吸、四肢活動等及其他中毒表現和死亡數。

2.1.5統計學方法采用SPSSwin11.5軟件對動物體重進行成組t檢驗和配對t檢驗統計分析。

2.2皮膚刺激試驗[4]

2.2.1試驗分組適應性飼養后，選擇健康皮膚完好的合格動物12只用于試驗，單籠飼養。實驗前動物處理：適應性飼養一周，試驗前24 h對日本大耳兔背部剪毛，分隔為3個區域各3 cm×3 cm；完整皮膚組無需任何處理，破損皮膚組用滅菌針頭以“井”字劃破表皮，以滲血為度。

2.2.2給藥途徑及劑量取受試物、基質對照、生理鹽水分別在去毛區域左上、右上，左下3塊皮膚每天涂抹1次，連續涂抹 7 d。

2.2.3給藥方法及觀察時間分別取相應的凝膠或生理鹽水0.5 mL涂于相應的皮膚，每天涂抹1次，連續涂抹7 d，左下區域皮膚為基質對照，右上區域皮膚作為陰性對照，給予相應的受試物后用一層保鮮膜覆蓋和二層紗布，再用無刺激性膠布加以固定。每次涂抹前應剪毛，用水或無刺激性溶劑清除殘留受試物，1 h后觀察結果，按表1評分，對照區和試驗區同樣處理。

2.2.4觀察指標一般觀察：每天觀察動物精神、活動、飲食等一般狀況，同時每周稱一次體重。每天肉眼觀察及記錄涂敷部位紅斑、水腫、色素沉著、出血點、皮膚情況出現和消退時間，并參照表1對紅斑和水腫情況進行評分。

2.2.5結果評價按下列公式計算每天每只動物平均積分，以表 1 判定皮膚刺激性強度。

每天每只動物平均積分=[SX（]∑紅斑和水腫積分[]受試動物數[SX）][JB<2/]14

3實驗結果

3.1急性毒性試驗

3.1.1一般情況及體征給藥后動物未出現中毒反應和死亡，24 h后用溫水洗去皮膚上的試驗受試物，未觀察到皮膚紅斑、丘疹、水腫等反應。連續飼養觀察14 d，2組動物一般狀況好，解剖動物，主要臟器、器官未見明顯異常改變。

3.1.2體重變化給藥前、給藥后7 d、14 d體重組間比較無顯著性差異（P>0.05），試驗前后組內比較有顯著性差異（P<0.01），提示兩組動物體重均有增長。見表3。

3.2皮膚刺激試驗

3.2.1變化家兔皮膚連續7天外涂青刺果油皮炎凝膠后，動物行為活動、進食飲水及精神狀態等一般情況良好，動物體重均有增長，組間比較和比較均無顯著性差異（P>0.05），給藥前后組內比較有顯著性差異（P<0.05）。

3.2.2局部肉眼觀察結果連續7d皮膚外涂青刺果油皮炎凝膠，于每天給藥前、每次除藥物后1 h以及末次給藥后24、48和72 h肉眼觀察，完整皮膚組基質對照區、空白對照區和試驗區三塊皮膚未見紅斑及水腫。破損皮膚組基質對照區、空白對照區和試驗區皮兩三塊皮膚給藥第1、2 d可見輕微發紅，無水腫，于第3 d基本恢復，考慮是用滅菌針頭人為制造破損皮膚引起的損傷。皮膚刺激強度評分<0.5。各試驗組皮膚刺激評分見表5。

3.2.3病理組織學檢查給藥末期和恢復期破損皮膚組，完整皮膚組均可見表皮不同程度的增生，真皮乳頭層不同程度的淋巴細胞浸潤，給藥末期破損皮膚組的皮膚病變重于完整皮膚組，但藥物組與基質組、空白組相比，病變程度、病變范圍及病變發生率無明顯差異。停藥恢復14天后，破損皮膚和完整皮膚組均較末次給藥72小時后病變減輕，病變范圍縮小。

4結論

青刺果油凝膠以最大給藥量法進行家兔急性經皮毒性試驗，未發現明顯毒性反應和死亡，劑量為5.0 g/kg，為臨床用藥量的333.33倍；青刺果油皮炎凝膠進行家兔多次皮膚刺激試驗，在本實驗條件下對家兔完整皮膚和破損皮膚均無刺激性，表明青刺果油皮炎凝膠外用安全。

參考文獻：

[1]江蘇植物研究所.新華本草綱要[M].第3冊.上海：上海科學技術出版社，1990.195.

[2]張宇，蔣召雪.野生青刺果研究綜述[J].西昌學院學報：自然科學版，2007，21（3）：34-36.

[3]中華人民共和國衛生部藥政局.中藥新藥研究指南（藥學、藥理學、毒理學）[S].1994：209.

[4]國家食品藥品監督管理局.藥物研究技術指導原則[S].北京.中國醫藥科技出版社，2005：227-242，243-254.